IFABP、LFABP檢測技術(shù)在小兒腸缺血中的應(yīng)用

李 立梁海峰

IFABP、LFABP檢測技術(shù)在小兒腸缺血中的應(yīng)用

李 立1梁海峰2

IFABP；LFABP；小兒腸缺血

2009年2月至2011年4月，我們通過對臨床腸缺血患兒血清中肝、腸脂肪酸結(jié)合蛋白變化的研究，來探討其臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

按入院時間收集2009年2月 2011年4月間在我院住院的機械性腸梗阻患兒92例，年齡為5月～9歲，男58例，女34例。嵌頓病32例，男22例，女10例，全部I期行病修補術(shù)，因腸壞死行腸切除、腸吻合術(shù)者8例；腸套疊24例，男16例，女8例，全部開腹手術(shù)，因腸壞死行腸切除、腸吻合術(shù)者10例；粘連性腸梗阻36例，男20例，女16例，保守治療（胃腸減壓，3：2：1液灌腸，中藥鼻飼）24例，12例開腹手術(shù)松解粘連，其中4例因腸壞死行腸切除、腸吻合術(shù)。

對于92例機械性腸梗阻患兒，分為實驗組1（腸壞死手術(shù)切除腸管組）22例；實驗組2（手術(shù)未切除腸管組）46例；實驗組3（未手術(shù)組）24例，取闌尾炎患兒20例作為實驗組4，對照組為正常兒童20例。

1.2 標本采集

對照組采外周靜脈血1次，實驗組患兒分別于入院時、術(shù)后（有效治療）第1天、術(shù)后（有效治療）第3天采外周靜脈血3次，分別檢測血標本中I-FABP、L-FABP水平。

1.3 IFABP與LFABP的檢測方法

IFABP與LFABP的測定采用美國RD公司提供的ELISA試劑盒進行，具體方法如下：①按照說明將標準品在酶標包被板上梯度稀釋，稀釋后各孔加樣量均為50uL，濃度分別為900ng/m L，600ng/m L，300ng/m L，150ng/m L，75ng/m L。②加樣。分別設(shè)空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔先加樣品稀釋液40uL，然后再加待測樣品l0uL。將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。③溫育。用封板膜封板后置37℃溫育30m in。④配液。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。⑤洗滌。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30s后棄去，如此反復(fù)5次，拍干。⑥加酶。每孔加入酶標試劑50uL。⑦溫育、洗滌。操作同③、⑤。⑧顯色。每孔先加入顯色劑ASOuL，再加入顯色劑BSOuL，輕輕震動混勻，37℃避光顯色15m in。⑨終止。每孔加終止液50uL，終止反應(yīng)。⑩測定。以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

利用SPSS15.0進行資料的輸入和統(tǒng)計分析，進行計量資料的t檢驗及方差分析。P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IFABP的變化

入院時，實驗組1、實驗組2、實驗組3血清IFABP水平明顯高于對照組，以實驗組1最高，其次為實驗組2，實驗組1與實驗組2、實驗組3之間均有顯著差異，說明血清IFABP水平與腸壞死、腸缺血的程度呈正相關(guān)；術(shù)后（有效治療）第1天實驗組1、實驗組2、實驗組3與對照組無差異，表明腸壞死、腸缺血糾正后，血清IFABP水平恢復(fù)正常。術(shù)后（有效治療）第3天所有腸梗阻組較前無變化。入院時實驗組4血清IFABP水平與對照組無差別，且術(shù)前與術(shù)后無差別，證明單純腸道炎癥并不能引起血清IFABP水平的升高，手術(shù)對血清IFABP亦無影響。

2.2 血清LFABP的變化

入院時，實驗組1、實驗組2、實驗組3血清LFABP水平明顯高于對照組（P均＜0.001），實驗組1與實驗組2較實驗組3之間均有顯著差異（P ＜0.001），實驗組1與實驗組2之間無差異（P＞0.05）；術(shù)后（有效治療）第1天實驗組1、實驗組2、實驗組3與對照組無差異，表明腸壞死、腸缺血糾正后，血清LFABP水平恢復(fù)正常。術(shù)后（有效治療）第3天所有腸梗阻組較前無變化。入院時實驗組4血清LFABP水平與對照組無差別，且術(shù)前與術(shù)后無差別，證明單純腸道炎癥并不能引起血清IFABP水平的升高，手術(shù)對血清LFABP亦無影響。

3 討論

腸梗阻所致的腸缺血可損傷腸道粘膜上皮機械屏障和免疫屏障，致多種介質(zhì)釋放，如血小板活化因子（PAF）、腫瘤壞死因子（TNF）、心臟抑制因子、IL-2、IL-6等，可并發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合癥（SIRS）。缺血的腸管不能有效阻止腸道內(nèi)細菌和內(nèi)毒素向腸道外移位而引起菌血癥和內(nèi)毒素血癥。腸缺血還可使血流緩慢和粘附分子表達的增加致腸管內(nèi)白細胞、內(nèi)皮細胞和血小板聚集，從而進一步損害灌注，加重酸中毒和有利于DIC的發(fā)生。腸道缺氧導(dǎo)致大量氧自由基產(chǎn)生及腸勃膜細胞的鈣超載，致細胞死亡。本試驗證明所有腸梗阻患兒入院時血清IFABP水平均明顯高于正常對照組，且與腸缺血程度呈正相關(guān)，以腸壞死組升高最明顯。如果腸梗阻患兒血清IFABP值超過800ng/m L，有絞窄性腸梗阻可能，建議考慮剖腹探查；如果超過1000ng/m L，建議早期剖腹探查，因為可能已經(jīng)發(fā)生腸壞死。術(shù)前血清IFABP水平與病變腸管長度呈正相關(guān)。腸缺血糾正后，IFABP在術(shù)后（有效治療）第1天馬上恢復(fù)到正常水平，證明其提示預(yù)后的敏感性也較好。闌尾炎組無論術(shù)前術(shù)后，血清IFABP水平均與對照組無明顯差異，證明單純腸道炎癥及開腹手術(shù)對IFABP無影響。IFABP是早期診斷腸缺血、敏感性和特異性均較高的生物學(xué)指標，且隨病變腸管程度的加重而增高。本試驗顯示所有腸梗阻患兒入院時血清LFABP較對照組明顯升高，其中實驗組1、實驗組2較實驗組3升高明顯（P＜0.01），但實驗組1與實驗組2之間無顯著差異（P＞0.05），證明LFABP水平與腸缺血程度有一定相關(guān)，而三組之間的差異，作者認為實驗組2血清LFABP的升高是腸缺血與腸道干細胞再生分化共同作用的結(jié)果；實驗組1因為發(fā)生腸壞死影響了腸道干細胞分化，其血清LFABP的升高主要是由腸壞死引起；實驗組3血清LFABP升高可能只是對腸道勃膜輕度損傷，尚未或輕微激發(fā)腸道干細胞的分化所致。

[1] 沈滌華，施誠仁，吳燕，徐遠飛. 腸脂肪酸結(jié)合蛋白變化在腸道疾病的臨床意義[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2009,21(22):2535-2536.

1勝利石油管理局現(xiàn)河衛(wèi)生院 山東東營 257068

2山東省東營市東營區(qū)人民醫(yī)院 山東東營 257085