頂空氣相色譜法測(cè)定鹽酸伐昔洛韋中的殘留溶劑

寧偉志，吳秀榮，林煥澤，李 桃，莫 劍（茂名市人民醫(yī)院藥劑科，廣東茂名 525000）

藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及制備過(guò)程中使用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。由于此類(lèi)雜質(zhì)不僅沒(méi)有療效，還可能增加藥物的毒副作用，影響藥物的穩(wěn)定性，故其中的有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能除去。因此，有必要對(duì)藥品中的殘留溶劑量進(jìn)行控制。鹽酸伐昔洛韋（Valaciclovir hydrochloride）是阿昔洛韋的前體物，進(jìn)入體內(nèi)后立即水解成阿昔洛韋，其抗病毒作用由阿昔洛韋發(fā)揮。筆者考察鹽酸伐昔洛韋的制備工藝后，發(fā)現(xiàn)其中有可能引入甲醇、乙醇、丙酮和四氫呋喃4種有機(jī)溶劑。本試驗(yàn)采用頂空氣相色譜法對(duì)鹽酸伐昔洛韋中的殘留溶劑進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，本方法靈敏度高、分離度好、簡(jiǎn)單快速，可用于鹽酸伐昔洛韋中的殘留溶劑檢查。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC-6890N氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）、色譜柱 DB-5（30 m×0.53 mm，0.25 μm）、G1888頂空爐（美國(guó)Agilent公司）；色譜柱 CP-Sil 8 CB（30 m×0.53 mm，1.5 μm）（美國(guó)瓦里安公司）。

1.2 試藥

鹽酸伐昔洛韋（某公司提供，批號(hào):20100701、20100817、20101104，純度:均大于99.0%）；甲醇、乙醇、四氫呋喃（廣州化學(xué)試劑廠）、丙酮（天津化學(xué)試劑一廠）均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent DB-5（30 m×0.53 mm，0.25 μm）；柱溫:35℃；進(jìn)樣口溫度:200℃；FID溫度:260℃；流速:1.5 mL·min－1；分流比:1∶1；載氣:氮?dú)?；頂空爐溫度:80 ℃（平衡時(shí)間:45 min）；定量環(huán)溫度:85 ℃；轉(zhuǎn)移線溫度:90 ℃；進(jìn)樣量:1 mL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別取甲醇、乙醇、丙酮和四氫呋喃置于同一量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得4種溶劑濃度分別為0.75、1.25、1.25、0.18 mg·mL－1的溶液，作為對(duì)照品貯備液。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品約1.0 g，加水20 mL溶解，搖勻，取該溶液5 mL，加入含無(wú)水硫酸鈉1 g的頂空瓶中密封，即得。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

將對(duì)照品貯備液稀釋5倍后取5 mL，加入無(wú)水硫酸鈉1 g，置于頂空瓶中密封，進(jìn)樣，結(jié)果，各峰分離度均大于4.0。另取供試品進(jìn)樣，色譜結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.5 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品貯備液，分別稀釋20倍（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃濃度分別為37.5、62.5、62.5、9 μg·mL－1）、10倍（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃濃度分別為0.075、0.125、0.125、0.018 mg·mL－1）、5倍（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃濃度分別為0.15、0.25、0.25、0.036 mg·mL－1）、2倍（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃濃度分別為0.375、0.625、0.625、0.09 mg·mL－1）和不稀釋?zhuān)状肌⒁掖?、丙酮、四氫呋喃濃度分別為0.75、1.25、1.25、0.18 mg·mL－1），并分別取5 mL和無(wú)水硫酸鈉1 g，置于頂空瓶中密封，進(jìn)樣，記錄色譜圖，并測(cè)量各待測(cè)溶液峰的峰面積，以峰面積（Y）對(duì)濃度（x）作線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系結(jié)果Tab 1 Result of linear correlations

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下試驗(yàn)溶液（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃濃度分別為0.15、0.25、0.25、0.036 mg·mL－1），在同一天內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，并測(cè)量各待測(cè)溶液的峰面積，計(jì)算各組分峰面積的RSD，結(jié)果分別為2.1%、0.9%、1.3%、2.8%。

2.7 檢測(cè)限和定量限檢測(cè)

精密量取對(duì)照品貯備液適量，作系列稀釋后進(jìn)樣測(cè)定，以各峰達(dá)信噪比3倍和10倍時(shí)的量分別為最低檢測(cè)限和最低定量限，結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃檢測(cè)限分別為0.596、0.38、0.32、1.251 μg·mL－1），定量限分別為0.239、0.117、0.83、5.013 μg·mL－1）。

2.8 回收率試驗(yàn)

取供試品（批號(hào):20100701）溶液5 mL，以2010年版《中國(guó)藥典》二部附錄規(guī)定的相應(yīng)溶劑限度[1]所得相應(yīng)的對(duì)照品溶液（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃分別為0.15、0.25、0.25、0.036 mg·mL－1）為基準(zhǔn)，制備濃度為該對(duì)照品溶液80%、100%、120%的溶液，并分別取各溶液5 mL及無(wú)水硫酸鈉1 g，置于頂空瓶中密封，依法測(cè)定，每個(gè)濃度測(cè)定3次，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of recovery test

2.9 耐用性試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下溶液（甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃濃度分別為0.075、0.125、0.125、0.018 mg·mL－1），分別用色譜柱Agilent DB-5和Varian CP-Sil 8 CB重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行耐用性試驗(yàn)，結(jié)果4組分峰面積的RSD分別為1.38%、0.98%、1.34%、2.01%。

2.10 樣品檢測(cè)結(jié)果

取3批樣品進(jìn)樣，結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃的含量均小于《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄[1]中對(duì)相應(yīng)有機(jī)溶劑的限度規(guī)定（甲醇:0.3%；乙醇:0.5%；丙酮:0.5%；四氫呋喃:0.072%），詳見(jiàn)表3。

3 討論

《中國(guó)藥典》2010年版和《歐洲藥典》（EP）7.0都收載有鹽酸伐昔洛韋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1，2]，但均未列有殘留溶劑檢查項(xiàng)，《美國(guó)藥典》（USP）32未收載伐昔洛韋的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)內(nèi)王文芳等[3]采用直接進(jìn)樣法測(cè)定鹽酸伐昔洛韋中的甲醇、乙醇、醋酸乙酯、四氫呋喃和N，N-二甲基甲酰胺的含量；而本文是根據(jù)待測(cè)樣品的相關(guān)工藝確定檢測(cè)的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮和四氫呋喃，且本文采用頂空氣相色譜法，因此，檢測(cè)限和定量限結(jié)果更優(yōu)于直接進(jìn)樣法，因此本法更能真實(shí)地反映鹽酸伐昔洛韋中有機(jī)溶劑的殘留量。

表3 樣品中4種溶劑測(cè)定結(jié)果（%）Tab 3 Results of content determination of 4 solvents in samples（%）

本研究的方法和限度參考人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[4]和《中國(guó)藥典》2010年版的相關(guān)規(guī)定，對(duì)甲醇、乙醇、丙酮和四氫呋喃4種有機(jī)溶劑的量進(jìn)行檢測(cè)，采用頂空氣相色譜法。本試驗(yàn)樣品進(jìn)樣處理中加入了無(wú)機(jī)鹽無(wú)水硫酸鈉，其作用是改變有機(jī)溶劑在液相和氣相中的分配系數(shù)，以促進(jìn)有機(jī)溶劑的揮發(fā)[5]。本試驗(yàn)柱溫采用35℃，因柱溫較低，建議試驗(yàn)結(jié)束后升高柱溫以?xún)艋V柱。

本試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明，鹽酸伐昔洛韋中4種有機(jī)溶劑的量均符合相關(guān)規(guī)定，各峰間達(dá)到良好的分離。本方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠、靈敏度高，能達(dá)到殘留溶劑的檢測(cè)要求，可用于鹽酸伐昔洛韋中殘留溶劑的檢測(cè)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:686、附錄61-65.

[2]European Director for the Quality of Medicines ＆ Healthcare.European Pharmacopeia（7.0）[S].Germany:Druckerei C.H.Beck Nordlingen，2010:3 185-3 188.

[3]王文芳，楊 敏，賴(lài)招連.鹽酸伐昔洛韋中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定 [J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26（9）:1 088.

[4]李 眉，馬玉楠.簡(jiǎn)介ICH關(guān)于藥品中溶劑殘留的指導(dǎo)原則[J].中國(guó)藥師，1998，1（3）:119.

[5]朱海燕，藍(lán)偉松，鄭凝堅(jiān).頂空氣相色譜法測(cè)定利巴韋林中的殘留溶劑[J].分析試驗(yàn)室，2002，21（2）:33.