吳 春 聶國興

(河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南新鄉(xiāng) 453007)

順應(yīng)當(dāng)今回歸自然、追求綠色食品和健康消費(fèi)的趨勢，天然飼料添加劑已成為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)，我國傳統(tǒng)的中草藥免疫增強(qiáng)劑以其高效、安全以及成本低廉等優(yōu)點(diǎn)而引起國內(nèi)外科研工作者的注意。國內(nèi)學(xué)者對中草藥作為免疫增強(qiáng)劑的研究有了一定的認(rèn)識，但其在畜牧、水產(chǎn)等不同的養(yǎng)殖領(lǐng)域發(fā)展并不平衡。

地黃（Rehmannia glutinosa Libosch）是一種傳統(tǒng)中藥，在我國的河南、山東、山西、陜西等地都有大面積栽培，地黃屬于玄參科植物，其藥用部分為塊根，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)能、抗腫瘤、影響機(jī)體內(nèi)分泌和造血系統(tǒng)以及降血糖等多種藥效。根據(jù)其塊根炮制方法與藥效的不同可分為鮮地黃、生地黃和熟地黃。地黃中化學(xué)成分主要有糖類、氨基酸、環(huán)烯醚萜苷等，它們是地黃藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。糖類化合物主要包括多糖和寡糖，現(xiàn)已分離鑒定出8種糖：水蘇糖、棉子糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露三糖、毛蕊花糖及半乳糖。生地黃中總多糖含量明顯高于熟地黃和鮮地黃。地黃中含有丙氨酸、谷氨酸、纈氨酸和精氨酸等20多種氨基酸，在加工熟地黃的過程中氨基酸含量，尤其是堿性氨基酸和游離氨基酸普遍下降。目前已從鮮地黃、干地黃、熟地黃中分離鑒定了幾十種有效活性成分，除了地黃寡糖、多糖外，環(huán)烯醚萜及其苷類、地黃苷A、D等均顯示出多種生理活性。但由于加工炮制方法的不同，其所含化學(xué)成分的種類和含量亦發(fā)生不同程度的改變，這些是地黃不同炮制品具有不同藥理作用的主要原因。目前,地黃作為免疫增強(qiáng)劑的研究較少，基于地黃開發(fā)水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑具有廣闊的前景。

1 地黃主要成分的免疫調(diào)節(jié)作用

免疫系統(tǒng)由具有免疫作用的分子、細(xì)胞及其相關(guān)組織和器官等構(gòu)成。這些免疫系統(tǒng)發(fā)育是否正常，在很大程度上影響機(jī)體正常運(yùn)轉(zhuǎn)。地黃的主要成分（多糖、低聚糖、地黃苷）可通過不同的藥理作用調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，改善機(jī)體免疫力。

1.1 地黃多糖的免疫調(diào)節(jié)作用

地黃多糖可以改善機(jī)體的免疫機(jī)能，提高正常淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)小鼠免疫器官(肝、脾)的生長，增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

胸腺和脾臟是機(jī)體內(nèi)重要的免疫器官，胸腺皮質(zhì)增厚、脾小結(jié)增大，表明機(jī)體免疫功能提高。地黃多糖對免疫器官的發(fā)育有較好的改善和刺激作用。苗明三等(2007、1999)報道，地黃多糖可增加血虛模型小鼠和代謝衰老模型小鼠的胸腺皮質(zhì)厚度、脾小結(jié)大小和皮質(zhì)細(xì)胞數(shù)，從而對模型小鼠胸腺及脾臟等免疫器官的萎縮產(chǎn)生拮抗。

單核-巨噬細(xì)胞是體內(nèi)一種重要的非特異性免疫細(xì)胞，通過吞噬作用抑制和殺傷靶細(xì)胞，還可通過抗原呈遞作用及分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)T、B淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞的功能。趙素榮等(2006)采用灌胃和體外給藥兩種方法，探討了地黃多糖對正常小鼠非特異性免疫和細(xì)胞免疫功能的影響，結(jié)果表明，在一定劑量范圍內(nèi)地黃多糖可顯著提高小鼠的脾指數(shù)，增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能，顯著促進(jìn)ConA刺激的T淋巴細(xì)胞增殖和小鼠外周血CD8+細(xì)胞比例。齊春會等(2001)發(fā)現(xiàn)，六味地黃多糖CA4-3對環(huán)磷酰胺造成的小鼠脾細(xì)胞抗體生成能力低下具有明顯的改善作用，提高脾細(xì)胞產(chǎn)生IgG水平，進(jìn)一步從CA4-3分離獲得的地黃多糖CA4-3B和P-3對體外培養(yǎng)的正常和快速老化模型SAMP8和SAMR1小鼠B細(xì)胞亦有明顯的促增殖作用。

地黃多糖可以通過上調(diào)血虛模型大鼠的某些細(xì)胞因子濃度而增強(qiáng)機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫功能及造血機(jī)能。苗明三等(2002)研究發(fā)現(xiàn)，地黃多糖可促進(jìn)免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，顯著提高血虛模型大鼠血清的IL-2、IL-6和促紅細(xì)胞生成素（EPO）水平。李發(fā)勝等(2008)研究表明，中劑量(100 mg/kg)熟地黃多糖通過促進(jìn)IL-2的分泌增強(qiáng)正常小鼠的免疫機(jī)能。粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子能增強(qiáng)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的吞噬功能，有一定的免疫促進(jìn)作用。熟地黃多糖可通過提高氣血雙虛模型小鼠血清粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子含量，促進(jìn)骨髓造血和興奮免疫。

地黃多糖b（單糖組成：半乳糖：葡萄糖：木糖：甘露糖：阿拉伯糖=12：6：2：2：1）是兼具免疫與抑瘤雙重作用的活性成分，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能是其抑瘤的重要機(jī)制。陳力真等(1993)研究表明，地黃多糖b在體內(nèi)外試驗中均可明顯提高正常小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)能力，促進(jìn)白細(xì)胞介素2(IL-2)的分泌，從而改善荷瘤小鼠由于腫瘤生長引起的IL-2分泌功能的下降。地黃多糖b還可顯著提高S180荷瘤小鼠脾臟細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)的活力，增強(qiáng)CTL對腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。

研究表明，多糖是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)，可明顯促進(jìn)和恢復(fù)機(jī)體免疫機(jī)能?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種中草藥多糖可改善水產(chǎn)動物非特異性免疫功能，如茯苓多糖可提高中華鱉血清溶菌酶和補(bǔ)體活性；體外試驗證實，黃芪多糖可作為免疫增強(qiáng)劑促進(jìn)刺參體液吞噬細(xì)胞的吞噬活性和超氧離子的產(chǎn)生；飼料中添加黃芪多糖能提高黃顙魚和羅非魚非特異性免疫功能。由此可見，基于地黃多糖開發(fā)水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑，具備研發(fā)潛力。

1.2 地黃低聚糖的免疫調(diào)節(jié)作用

地黃低聚糖可促進(jìn)免疫抑制小鼠B淋巴細(xì)胞恢復(fù)產(chǎn)生抗體的能力，增強(qiáng)免疫抑制小鼠和荷瘤小鼠脾細(xì)胞對綿羊紅細(xì)胞(SRBC)的抗體反應(yīng)，增強(qiáng)荷瘤小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和小鼠的細(xì)胞免疫功能。

低聚糖能夠提高機(jī)體的免疫機(jī)能，主要通過充當(dāng)免疫佐劑以及激活機(jī)體體液和細(xì)胞免疫等途徑得以實現(xiàn)。水產(chǎn)動物試驗表明，低聚異麥芽糖和低聚果糖可提高羅非魚血清中溶菌酶和補(bǔ)體的活性；低聚果糖還能提高幼鱉SOD酶活力、增重率和成活率；飼料中添加低聚木糖可不同程度地提高草魚和凡納濱對蝦的非特異性免疫功能。

1.3 地黃苷A的免疫調(diào)節(jié)作用

地黃苷A為地黃的有效藥用成分，可增強(qiáng)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫功能。王軍等(2003)試驗表明，地黃苷A可以顯著增加免疫功能低下小鼠體重，降低血漿cAMP含量和cAMP/cGMP值，提高小鼠血清溶血素水平，增強(qiáng)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)。地黃苷A還可促進(jìn)骨髓造血及外周血白細(xì)胞增殖，對抗環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥，升高白細(xì)胞減少癥模型小鼠的白細(xì)胞、血小板及紅細(xì)胞數(shù)，增加小鼠體重及骨髓有核細(xì)胞數(shù)量和骨髓DNA含量。

2 配伍方式與劑型影響地黃的免疫調(diào)節(jié)作用

2.1 地黃單劑的免疫調(diào)節(jié)作用

地黃中除了主要成分對免疫系統(tǒng)起調(diào)控作用，各種水提液和煎劑也能夠增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能以及平衡機(jī)體免疫因子的分泌。

在脾臟淋巴細(xì)胞中，堿性磷酸酶被認(rèn)為是B淋巴細(xì)胞增殖和分化的分子標(biāo)志物。鮮地黃汁、鮮地黃水煎液和干地黃水煎液均能明顯提高甲狀腺素誘導(dǎo)的類陰虛小鼠脾臟淋巴細(xì)胞堿性磷酸酶的表達(dá)活性，表明地黃能提高陰虛小鼠的脾臟B淋巴細(xì)胞功能。地黃水煎液還可明顯促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞的增殖和分化，并提高免疫力低下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

腫瘤壞死因子（TNF）是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子，熟地黃水提液能夠刺激小鼠單核細(xì)胞分泌TNF-α，從而產(chǎn)生較強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng)。過敏性皮炎(AD)是一種炎癥性皮膚病，患者Th2細(xì)胞對過敏原的反應(yīng)及白細(xì)胞浸潤增強(qiáng)，血清IgE水平升高。病變部位炎性細(xì)胞因子IL-4和TNF-α的mRNA表達(dá)水平升高，Th2細(xì)胞趨化因子TARC、MDC、RANTES和細(xì)胞黏附分子表達(dá)增強(qiáng)。地黃水提取物（RGE）可抑制NC/Nga小鼠炎癥部位細(xì)胞因子、趨化因子和黏附分子的過表達(dá)，減少Th2細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤，調(diào)節(jié)過敏原引起的免疫功能失調(diào)，阻止過敏性皮炎的發(fā)生。

2.2 地黃合劑的免疫調(diào)節(jié)作用

2.2.1 六味地黃丸的免疫調(diào)節(jié)作用

六味地黃丸由熟地黃、山茱萸、淮山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓等6味中藥以8：4：4：3：3：3的質(zhì)量比水煎濃縮而成，方劑以熟地黃為主藥，輔以山萸肉、山藥。研究發(fā)現(xiàn)，六味地黃丸主要通過增強(qiáng)機(jī)體T淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞以及吞噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能來增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

復(fù)發(fā)性口瘡（RAU）是一種原因不明的口腔黏膜常見病，屬于自身免疫性疾病，發(fā)病期細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài)，T淋巴細(xì)胞亞群的平衡失調(diào)。六味地黃丸對RAU患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群有顯著的調(diào)節(jié)作用，可顯著提高CD3和CD4，有效地糾正CD4+/CD8+的比例失調(diào)，穩(wěn)定機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。

紅細(xì)胞免疫功能是機(jī)體免疫功能的重要組成部分，紅細(xì)胞免疫功能低下與多種疾病的發(fā)生和病理過程密切相關(guān)。曹建恒等(2005)研究表明，六味地黃丸可改善紅細(xì)胞免疫黏附調(diào)節(jié)因子的功能，顯著升高RBC-C3bRR和RBC-ICR，降低循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC）水平，提高紅細(xì)胞的免疫功能。

多形核白細(xì)胞(PMNLS)是乳牛體內(nèi)主要的吞噬細(xì)胞，是機(jī)體防御感染的第一道防線。在適當(dāng)濃度范圍內(nèi)，六味地黃丸對多形核白細(xì)胞的免疫功能起明顯的調(diào)節(jié)作用，六味地黃丸可促進(jìn)外周血及乳中多形核白細(xì)胞的殺菌能力，顯著提高血液和乳中吞噬細(xì)胞超氧基的釋放水平。六味地黃丸還可顯著提高正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面Ia抗原表達(dá)的陽性率，從而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）、吞噬指數(shù)以及吞噬活性。

此外，六味地黃丸還可以作用于免疫器官提高機(jī)體免疫力。如高劑量六味地黃丸加減復(fù)方可提高免疫功能低下小鼠體重以及胸腺和脾臟重量，顯著增加耳廓腫脹度，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。六味地黃丸還可以激活造血干細(xì)胞，通過影響骨髓中造血干細(xì)胞的數(shù)量和增殖能力，提高造血機(jī)能，進(jìn)而有助于提高老年小鼠的免疫功能。

2.2.2 六味地黃湯的免疫調(diào)節(jié)作用

六味地黃湯（LW）由熟地黃、山茱萸、淮山藥、澤瀉、茯苓、牡丹皮6味中藥組成。藥理學(xué)研究表明，LW能夠明顯改善多種免疫功能低下及自身免疫性疾病模型動物的免疫功能。

LW可增強(qiáng)環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠以及糖皮質(zhì)激素腎陰虛小鼠的細(xì)胞及體液免疫，可以使小鼠體重明顯增加，提高模型小鼠外周血CD3+和CD4+細(xì)胞百分率，促進(jìn)血清IgM、IgG和IgA的生成，增強(qiáng)T細(xì)胞的增殖和腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。LW還能夠明顯提高快速老化小鼠（SAMP8）脾臟CD4+T細(xì)胞百分率和CD4/CD8的比值，提示LW對SAMP8 T、B細(xì)胞功能及T細(xì)胞亞群的平衡具有調(diào)節(jié)作用。通過促進(jìn)CD8分子表達(dá)，恢復(fù)CD4+/CD8+平衡，LW可起到抗腫瘤作用。

LW對免疫功能的調(diào)節(jié)具有雙向性，對正常小鼠，LW可增強(qiáng)Notch信號強(qiáng)度，促進(jìn)胸腺淋巴細(xì)胞向T抑制性細(xì)胞分化；對免疫老化的SAMP8，LW能夠降低Notch信號強(qiáng)度，抑制胸腺淋巴細(xì)胞向T抑制性細(xì)胞的過早分化。

2.2.3 其他地黃合劑的免疫調(diào)節(jié)作用

地黃與其它中草藥配制成的地黃合劑，對免疫系統(tǒng)疾病或免疫功能紊亂性疾病均具有良好的療效。

與四君子湯（人參、甘草、茯苓、白術(shù)）合用后可上調(diào)原發(fā)性肝癌介入術(shù)后患者CD4+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞比例，提高IFN-γ的產(chǎn)生，對患者細(xì)胞免疫功能有上調(diào)作用。

多發(fā)性硬化（MS）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性脫髓鞘性疾病，患者免疫功能異常，表現(xiàn)為T輔助細(xì)胞增多，T抑制性細(xì)胞水平下降。采用地黃合劑（熟地黃、山萸肉、麥冬、肉蓯蓉、白芍、肉桂、膽南星、地龍、郁金）治療后，患者外周血（PB）及腦脊液（CSF）中 CD8+細(xì)胞數(shù)升高，CSF中CD4+細(xì)胞以及CSF和PB中CD4+/CD8+比值降低，EDSS評分降低，復(fù)發(fā)次數(shù)減少。說明地黃合劑能有效地調(diào)節(jié)MS免疫功能的紊亂，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的異常免疫應(yīng)答有療效。

免疫性血小板減少性紫癜（ITP）是自身免疫性疾病，系存在抗血小板抗體和免疫介導(dǎo)所致的血小板減少，其發(fā)生與機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境失衡有關(guān)。程緯民等(2006)研究表明，地黃止血方（水牛角、白茅根、生地黃、赤芍、丹皮、生黃芪）對 ITP患者 CD3+、CD4+水平有明顯提高作用,并顯著降低CD8+水平，改善CD4+/CD8+比值，明顯改善ITP患者的T細(xì)胞免疫功能和機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境失衡。

此外，地黃合劑還能明顯改善多種免疫性疾病模型動物的免疫功能。地黃合劑（由生地黃、功勞葉、生黃芪、制香附）能拮抗環(huán)磷酰胺對小鼠的免疫抑制作用，通過提高輔助性T細(xì)胞（Th細(xì)胞），糾正T細(xì)胞亞群分布的紊亂狀態(tài)和提高脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2這兩條途徑實現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)作用。參芪地黃丸可對抗D-半乳糖所致的小鼠亞急性衰老過程，明顯升高衰老小鼠脾臟指數(shù)及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，提高血清IL-2水平，降低血清IL-6水平，一定程度上延緩免疫衰老。

3 基于地黃研發(fā)水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑的前景

中草藥作為免疫增強(qiáng)劑在人體健康、畜禽養(yǎng)殖等領(lǐng)域得到了廣泛重視，但在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面還缺乏系統(tǒng)的研究。當(dāng)前，消費(fèi)者十分關(guān)心水產(chǎn)品安全，因中草藥無毒、無害、無殘留、無耐藥性的優(yōu)勢，利用其研發(fā)水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑，部分或全部替代抗生素等藥物，提高水產(chǎn)品安全和品質(zhì)，日益受到業(yè)界重視。試驗表明，黃芪、旱蓮草、當(dāng)歸、茯苓、魚腥草、板藍(lán)根和金銀花等中草藥單劑或合劑配合飼料應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，可顯著增強(qiáng)水產(chǎn)動物機(jī)體非特異性免疫力。

黃芪、旱蓮草水提液單劑可顯著增強(qiáng)羅非魚溶菌酶活性和吞噬細(xì)胞的吞噬功能。茯苓、魚腥草和板藍(lán)根均可使鯉魚的紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率升高。黃芪和當(dāng)歸以5：1配合，可明顯增強(qiáng)大黃魚和建鯉血液中NBT陽性細(xì)胞活性，提高血清中補(bǔ)體活性以及增重率和存活率。黃芪和金銀花合用可顯著增強(qiáng)羅非魚血液中吞噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活動，降低試驗魚的死亡率，提高機(jī)體免疫力。

地黃是傳統(tǒng)中藥，河南省地黃資源豐富。研究證實，其免疫調(diào)節(jié)作用十分顯著，因此，基于地黃研發(fā)水產(chǎn)動物免疫增強(qiáng)劑，前景廣闊。