禤達科，張漢偉，張剛利，趙利軍

（1.山西中醫(yī)學院，山西太原030024； 2.山西省人民醫(yī)院，山西太原030012）

癲癇是由不同病因所引起的腦部神經(jīng)元高度同步化異常放電，臨床以反復發(fā)作性、短暫性、通常是刻板性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的綜合征。癲癇是目前神經(jīng)科內僅次于腦血管病和癡呆的第三大常見疾病［1］。我國有超過900萬癲癇患者，其中約80%可通過常規(guī)的一線抗癲癇藥物治療獲得滿意療效，但仍有20%患者因耐藥或西藥的嚴重副作用而未能有效控制，且抗癲癇藥均有不同程度的不良反應。臨床發(fā)現(xiàn)，穴位埋線治療癲癇療效肯定，但其抗癲癇機理尚不明確。我們通過對大鼠穴位埋線預處理后，以青霉素腹腔注射建立急性癲癇發(fā)作模型，探討穴位埋線法對癲癇大鼠癇性發(fā)作行為以及體重的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物與分組 健康SD雄性大鼠40只，體重（300±20）g，購自北京軍科院，隨機分為穴位組、西藥組、針刺組和模型組4組，每組10只。在室溫、自然光環(huán)境下給予充足的食物及水。各組大鼠適應性喂養(yǎng)3 d后進行實驗，每日早晨稱重并記錄。

1.1.2 藥物與配制 丙戊酸鈉緩釋片（0.2 g/片，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：101013），取200 mg丙戊酸鈉，研細末，加蒸餾水至10 mL，配制成20 mg/mL的丙戊酸鈉溶液用于西藥組灌胃；注射用青霉素鈉（160萬U/瓶，華北制藥股份有限公司，批號：X1105401），取青霉素160萬U，加滅菌注射用水2 mL配成57萬U/mL的青霉素溶液腹腔注射造模；滅菌注射用水（500 mL，石家莊四藥有限公司，批號091026104）；10%水合氯醛：10 g水合氯醛加蒸餾水到100 mL。

1.1.3 實驗器材 JA2003精密電子天平、SF-400電子秤、針刺針（華佗牌，25 mm×13 mm，蘇州醫(yī)療用品有限公司）、一次性穴位埋線針（祾康牌，7#，揚州市華宏醫(yī)療器械有限公司）、可吸收膠原蛋白線［博達牌，3#，（20×2）cm/包，山東博達醫(yī)療用品有限公司］。

1.2 實驗方法

1.2.1 癲癇大鼠模型的造模方法［2］青霉素鈉溶液的配制方法：取青霉素鈉160萬U，加滅菌注射用水2 mL配成57萬U/mL；根據(jù)參考文獻介紹并經(jīng)過預實驗后，確定青霉素鈉按456萬U/kg體重的劑量腹腔注射；按Racine標準判定癲癇發(fā)作的程度，達到Ⅳ～Ⅴ級及腦電圖出現(xiàn)棘波和棘慢波的大鼠被認為模型制作成功。

1.2.2 給藥方法 西藥組：以體重50 kg成人每天服用丙戊酸鈉15 mg/kg的劑量按照體表面積換算成大鼠的劑量灌胃，每次稱重后給藥，其他3組給予同體積的蒸餾水灌胃，每天上午、下午各灌胃1次，連續(xù)灌胃3 d；埋線組：大椎穴準確定位（取穴標準參考中國中醫(yī)藥出版社李忠仁等2003版《實驗針灸學》［2］）并局部剪毛，鑷取一段 PGLA 線，置于埋線針針管的前端，用鑷子將線體推入針管，左手拇、食指繃緊或提起進針部位皮膚，右手持針迅速刺入皮下，并進一步伸入到穴位適宜的深度；邊推針芯，邊退針管，將線體植入穴位的皮下組織或肌層內；出針后，干棉棒按壓1 min～2 min。針刺組：穴位同埋線組，每天上午蒸餾水灌胃后針刺1次，毫針針刺大椎穴，針刺方向與深度同埋線組，輕捻轉，每隔l0 min行針1次，30 min后出針，每天1次，連續(xù)針刺3 d。干棉棒按壓數(shù)秒。每日早晨8 h～9 h給大鼠稱重并記錄，癲癇大發(fā)作后48 h大鼠斷頭取腦，稱重。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。所測數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標準差（±s）表示，癲癇發(fā)作Ⅳ級以上發(fā)生率（含Ⅳ級）用χ2檢驗，發(fā)作潛伏期用方差分析之q檢驗。

2 結 果

2.1 癇性發(fā)作行為分級

觀察各組有無癇性發(fā)作及發(fā)作的潛伏時間、發(fā)作級別及持續(xù)時間。發(fā)作級別參考 Racine′s分級法［3］，即0級：無驚厥；Ⅰ級：閉眼、胡須動、面部抽搐；Ⅱ級：點頭、咀嚼伴面部抽搐；Ⅲ級：一側前肢抬起、陣攣；Ⅳ級：站立常伴兩側前肢陣攣；Ⅴ級：站立、扭轉并伴有跌倒。

模型組10只大鼠均有癲癇發(fā)作的行為表現(xiàn)，有9只為Ⅳ～Ⅴ級發(fā)作，1只死亡。主要表現(xiàn)為前肢抽動伴站立或強直甚至是全身強直-陣攣發(fā)作。本實驗成功建立了急性癲癇大鼠模型。

2.2 穴位埋線法對癲癇大鼠急性發(fā)作潛伏期的影響

埋線組、西藥組、針刺組與模型組比較，均可延長大鼠癇性發(fā)作潛伏期（P<0.05），且三組中以埋線組最為明顯，但三組間差異無統(tǒng)計學意義。結果見表1。

表1 各組大鼠癇性發(fā)作潛伏期的比較 （min，±s）

表1 各組大鼠癇性發(fā)作潛伏期的比較 （min，±s）

注：與模型組比較，1）P<0.05

組別 n 潛伏期西藥組 10 17.2±1.6 1）針刺組 10 16.3±2.6 1）埋線組 10 17.7±1.5 1）模型組 10 10.4±2.4

2.3 穴位埋線法對癲癇大鼠癇性發(fā)作程度的影響

模型組有9只大鼠出現(xiàn)Ⅳ～Ⅴ級癇性發(fā)作，Ⅳ～Ⅴ級癇性發(fā)作率為90%，造模成功。西藥組與模型組均有1只大鼠Ⅴ級癇性發(fā)作后死亡。4組等級資料的比較用Ridit分析（P<0.05），提示西藥組、針刺組、埋線組造模后大鼠Ⅳ～Ⅴ級癇性發(fā)作率均明顯低于模型組，且差異具有統(tǒng)計學意義。三組中以針刺組Ⅴ級癇性發(fā)作率相對較高，但三組間差異無統(tǒng)計學意義。結果見表2。

根據(jù)表1、表2數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計軟件用散點圖描述，提示各組大鼠癇性發(fā)作程度與潛伏期不存在相關關系。結果見圖1。

表2 各組大鼠癇性發(fā)作程度的比較 （min）

2.4 穴位埋線法對癲癇大鼠體重的影響

4組大鼠每日體重與前一日相比差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），觀察數(shù)據(jù)，西藥組大鼠體重增長明顯，埋線組大鼠體重增長較平穩(wěn)，模型組大鼠在造模后體重增長趨勢較造模前放緩，但前后無顯著性差異（P>0.05）。針刺組大鼠在造模前1 d、造模當天以及造模后1 d的體重較同期模型組大鼠體重小，且差異具有統(tǒng)計學意義。結果見表3。

表3 各組大鼠造模后每日體重的比較 （g，±s）

表3 各組大鼠造模后每日體重的比較 （g，±s）

注：每日體重與本組前一日體重比較，1）P<0.05；與同期模型組大鼠體重比較，2）P<0.05

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3 討論

本實驗結果顯示，針刺組大鼠體重較模型組大鼠體重偏小，這與多數(shù)研究以及臨床工作不相符［4］，主要考慮是在對大鼠進行針刺操作過程中產生的不利影響。與埋線組只需第一日進行操作以及西藥組只需做簡單的灌胃操作相比，針刺組大鼠每日針刺操作前需要繩子固定四肢然后針刺，持續(xù)30 min，此過程難免對大鼠的身體及精神產生一定影響，進而影響正常飲食，導致體重增長較其他組緩慢。而西藥組體重增長明顯，是否屬于正常，由于觀察時間短暫，較難作出判斷，但之前有研究報道在長時間服用丙戊酸鈉抗癲癇治療，可能出現(xiàn)體重增加［5］。

青霉素是經(jīng)典的致癇劑，其癲癇點燃模型是一種極為有效的、操作簡便的實驗動物癲癇模型，癲癇放電持久穩(wěn)定，其急性癲癇模型已獲公認，可以用作抗癲癇藥物療效及癲癇發(fā)病機制的研究。青霉素致癇原理：青霉素誘發(fā)的癲癇電活動是阻斷了GABAα受體導致抑制性神經(jīng)網(wǎng)絡功能失調而產生癲癇狀態(tài)［6］。我們通過預實驗發(fā)現(xiàn)，青霉素癲癇模型造模成功與否與合適的體重-劑量關系密切相關，腹腔注射方式對癲癇大鼠腦組織的影響的不利干擾較腦內貼片小，而且按456萬U/kg體重的劑量腹腔注射造模發(fā)生Ⅲ～Ⅴ級發(fā)作的概率大，且死亡率低，能夠很好滿足實驗要求。

近些年來，穴位埋線應用于癲癇治療，取得了較好的臨床療效，同時在穴位埋線治療癲癇的機理探討及埋線技巧的創(chuàng)新都有較大的發(fā)展與進步，進一步促進了穴位埋線在癲癇治療的應用，提高了療效。穴位埋線療法持續(xù)不斷的刺激可以向大腦反饋促通信息，形成一種復雜持久而柔和的非特異性刺激沖動。一部分經(jīng)傳入神經(jīng)到相應節(jié)段的脊髓后角，再內傳臟腑起調節(jié)作用；另一部分經(jīng)脊髓后角上傳大腦皮層，對大腦的異常放電病灶進行抑制，同時，埋線后可使大腦皮層建立新的興奮灶，從而對病灶產生良性誘導，緩解病灶放電，而達到消除疾病的目的［7-8］。穴位埋線療法寓粗針透穴、放血、穴位注射、組織療法于一體，具有“以線代針”的長效針感治療效果，可避免長期針刺對局部的不良反應。由于羊腸線長期持續(xù)刺激穴位，以達穴位刺激的續(xù)效作用，提高穴位的興奮性與傳導性，具有止痛、解痙、調和氣血、疏通經(jīng)絡、扶正祛邪、平衡陰陽，調節(jié)機體有關臟腑器官功能趨于平衡，達到良性、雙向性調整作用［9-10］。大椎穴為督脈的要穴，手足三陽經(jīng)與督脈的交會穴，又稱“諸陽之會”，內可通行督脈，外可流走三陽，為調整全身機能要穴。癲癇病位在腦，督脈入腦，腦為元神之府，督脈氣血失調，則“大人癲疾，小兒驚癇”。（《脈經(jīng)·平奇經(jīng)八脈病》）。大椎有清熱息風、寧神止癇之功。本文通過大椎穴處穴位埋線對癲癇大鼠癇性發(fā)作行為以及體重的影響后進一步說明了穴位埋線法在抑制癲癇發(fā)作不僅有效而且安全可靠。但考慮到本實驗穴位預埋線時間只有3 d，腸線未能完全吸收，故埋線的持續(xù)刺激作用有限。在以后的研究中，可將穴位埋線的時間適當延長，有助于完整的觀察穴位埋線的短期速效和長期續(xù)效兩種作用。

穴位埋線法的抗癲癇療效與西藥丙戊酸鈉以及常規(guī)針刺無明顯差異，但從西藥長期服用存在副作用，常規(guī)針刺需要多次針刺操作，患者耐受性、順應性低等缺點考慮，穴位埋線法治療癲癇有其獨特的優(yōu)勢，而且在預防癲癇發(fā)作方面更明顯，可根據(jù)既往患者癲癇發(fā)作史，制定埋線時間，可較好地預防癲癇發(fā)作或者減少發(fā)作次數(shù)，降低發(fā)作程度，提高生活質量。在癲癇的發(fā)作期，加以穴位埋線，控制或緩解癲癇的發(fā)作，可減少西藥服用的頻率與劑量，降低西藥所致的副作用；在緩解期，采用埋線療法，可減少發(fā)作頻率及患者的就診次數(shù)，提高患者的依從性。目前研究中仍有許多問題仍未解決，在穴位埋線的抗癲癇機理以及對埋線的介入時機、間隔時間、穴位、針刺的深度對療效的影響，都需要做進一步的探討研究。

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