鄧彪

[摘要]目的：通過(guò)對(duì)SKP-2及PTEN的免疫組化變化來(lái)分析手部燒傷后瘢痕攣縮的發(fā)病機(jī)制。方法：選擇2009年7月～2011年12月因手部燒傷后瘢痕攣縮在我院住院的患者58例（增生性瘢痕41例，瘢痕疙瘩17例）和非攣縮瘢痕皮膚組織患者30例，采用免疫組化檢測(cè)三組的SKP-2及PTEN表達(dá)情況，并且進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的SKP-2表達(dá)的平均光密度值也明顯高于非攣縮瘢痕組織（P<0.05）。瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的PTEN表達(dá)的平均光密度值也明顯少于非攣縮瘢痕組織（P<0.05）。不同組織中SKP-2和PTEN表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。結(jié)論：手部燒傷后瘢痕攣縮在臨床上比較常見(jiàn)，SKP-2和PTEN蛋白共同參與了瘢痕攣縮發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，而且互為影響，從而有可能為瘢痕攣縮的治療提供新的思路。

[關(guān)鍵詞]手部燒傷；瘢痕攣縮；發(fā)病機(jī)制；SKP-2；PTEN

[中圖分類(lèi)號(hào)]R644 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2012）08-1328-03

瘢痕攣縮是以肢體或器官的功能受到影響而劃分的一類(lèi)瘢痕表現(xiàn)形式，它不僅有明顯的功能障礙，也存在明顯的外觀改變，包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，多發(fā)生于手部。多見(jiàn)于較大面積的燒傷肉芽創(chuàng)面愈合后，瘢痕深而厚，范圍較大。也可見(jiàn)于外傷較深跨越關(guān)節(jié)部位的直線瘢痕[1]。所以近年來(lái)研究與腫瘤相關(guān)的基因，以及其所表達(dá)的蛋白成為了手部燒傷后瘢痕攣縮的防治研究的一個(gè)重要方向[2]。本文為此通過(guò)對(duì)SKP-2及PTEN的免疫組化變化來(lái)分析手部燒傷后瘢痕攣縮的發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料和方法

1.1 一般資料：選擇在我院2009年7月～2011年12月住院的手部燒傷后瘢痕攣縮患者58例，年齡在4～52歲，其中男38例，女20例，傷后6～24月，平均10.9個(gè)月。瘢痕類(lèi)型：增生性瘢痕41例，瘢痕疙瘩17例。同時(shí)取住院病人供皮區(qū)非攣縮瘢痕皮膚組織病人共30例，年齡23～45歲，其中男18例，女12例。組織塊離體后經(jīng)10%中性甲醛固定、然后常規(guī)脫水，包埋于低熔點(diǎn)石蠟中，系列切片，厚度為4μm。三組年齡、性別對(duì)比類(lèi)似（P>0.05）。

1.2 免疫組化方法：鼠抗人PTEN單克隆抗體（福州邁新生物技術(shù)公司）。SKP-2兔抗人多克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。將選擇的將組織切片在60℃恒溫箱中烘烤1h、二甲苯中浸泡10min、更換二甲苯后浸泡10min，然后在無(wú)水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中各浸泡5min；用PBS（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）洗兩次各3min后，在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鹽緩沖溶液至沸騰后，將組織切片放入，停止加熱，間隔5min（反復(fù)2次）。PBS洗三次各3min。滴加SP試劑盒中的封閉液，置入37℃恒溫箱中孵育20min。滴加1：50稀釋的一抗，4℃過(guò)夜。PBS洗三次各3min。滴加SP試劑盒中的生物素化二抗，置入37℃溫箱中孵育15min。PBS洗三次各3min。滴加辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液，置入37℃溫箱中孵育15min。PBS洗三次各3min。DAB顯色。組織切片置于二甲苯中浸泡3min，更換二甲苯后再浸泡3min透明，分別挑選高倍鏡視野下的表皮組織、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞中黃染區(qū)域作為測(cè)量區(qū)域，測(cè)得切片上DAB顯色為棕黃色代表陽(yáng)性的區(qū)域的平均光密度值（MOD），取10個(gè)視野的平均值。

2結(jié)果

2.3 相關(guān)性分析：用Pearson相關(guān)分析法分析SKP-2和PTEN在不同組織中表達(dá)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)不同組織中SKP-2和PTEN表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.521，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體情況見(jiàn)圖1。

3討論

近10年來(lái)，燒傷的發(fā)生率在世界范圍內(nèi)總體呈上升的趨勢(shì)。2004年，美國(guó)燒傷患者達(dá)23.22萬(wàn)，治療總費(fèi)用達(dá)111.3億美元[3]。手部燒傷后瘢痕攣縮是深度皮膚軟組織創(chuàng)傷后的一種病理性修復(fù)結(jié)果，輕者影響患者手部狀況，嚴(yán)重者可導(dǎo)致手部殘疾。影響瘢痕形成的因素很多，其中瘢痕內(nèi)缺氧環(huán)境起重要作用，組織內(nèi)缺氧可能是誘發(fā)增生性瘢痕的關(guān)鍵因素[4-5]。在創(chuàng)面愈合過(guò)程中，成肌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞聯(lián)結(jié)而成的合胞體，使創(chuàng)緣皮膚與創(chuàng)面基底的組織相連接，其收縮使創(chuàng)緣帶動(dòng)四周正常皮膚呈向心性收縮，因而創(chuàng)面日益縮小。

SKP-2就是F-box蛋白家族成員之一，能特異性識(shí)別磷酸化的底物并介導(dǎo)其泛素化降解，是DNA復(fù)制所必需的人類(lèi)F-box蛋白家族成員[6]。本文結(jié)果顯示，瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的SKP-2表達(dá)的平均光密度值也明顯高于非攣縮瘢痕組織（P<0.05），提示在瘢痕形成中SKP-2起了非常重要的作用，我們推測(cè)在燒傷、創(chuàng)傷組織的修復(fù)過(guò)程中，局部環(huán)境發(fā)生變化如持續(xù)低氧，從而導(dǎo)致了病理性瘢痕中各種細(xì)胞的增殖失控，凋亡減少，從而導(dǎo)致了瘢痕的形成[7]。

PTEN蛋白作為雙特異磷酸酶，可作用于某些磷脂或蛋白激酶的位點(diǎn)使之脫磷酸化[8]。有報(bào)道在PTEN2/2的腫瘤細(xì)胞中，PTEN的恢復(fù)性表達(dá)能夠上調(diào)P27蛋白的水平，從而誘導(dǎo)細(xì)胞G1期阻滯[9]。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的PTEN表達(dá)的平均光密度值也明顯少于非攣縮瘢痕組織（P<0.05）。據(jù)此推測(cè)，在組織創(chuàng)傷的異常修復(fù)中，組織中由于PTEN蛋白表達(dá)減少，抑制細(xì)胞增殖的作用減弱，瘢痕中的表皮細(xì)胞，從而導(dǎo)致了組織創(chuàng)傷修復(fù)時(shí)，大量血管內(nèi)皮細(xì)胞，最終導(dǎo)致了疤痕形成。在相關(guān)性分析方面，兩者之間的相關(guān)性并不是很強(qiáng)，不同組織中SKP-2和PTEN表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。

總之，手部燒傷后瘢痕攣縮臨床上比較常見(jiàn)，SKP-2和PTEN蛋白共同參與了瘢痕攣縮發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，而且互為影響，從而有可能為瘢痕攣縮的治療提供新的思路。

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[收稿日期]2012-04-06[修回日期]2012-06-27

編輯/張惠娟