窄譜中波紫外線(xiàn)對(duì)自體黑素細(xì)胞移植治療白癜風(fēng)療效影響的研究

張迪敏等

[摘要]目的：評(píng)價(jià)不同方式聯(lián)合窄波UVB照射對(duì)于自體黑素細(xì)胞培養(yǎng)移植治療白癜風(fēng)療效的影響。方法：將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者隨機(jī)分為四組，A組：移植前進(jìn)行窄波UVB照射20次；B組：移植后予窄波UVB照射30次；C組：移植前予窄波UVB照射20次，移植后再予窄波UVB照射30次；D組：僅進(jìn)行自體黑素細(xì)胞移植，未照射窄波UVB。治療后至少隨訪(fǎng)6個(gè)月觀察復(fù)色效果。結(jié)果：共治療221例白癜風(fēng)患者，移植前后均照光組48例，有81.3%的患者獲得90%～100%的復(fù)色，獲得50%以上復(fù)色率的患者達(dá)93.8%；移植前照光組54例患者的痊愈率為68.5%，有效率為92.6%；移植后照光組63例患者的痊愈率為61.9%，有效率為88.9%；僅移植未照光組56例，僅有44.6%的患者獲得90～100%的復(fù)色，獲得50%以上復(fù)色率的患者為73.2%。四組的痊愈率和有效率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：體外培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植治療穩(wěn)定期白癜風(fēng)療效肯定，用少量供皮區(qū)即可治療大面積皮損，聯(lián)合窄波UVB治療可顯著提高療效，其中移植前后均進(jìn)行窄波UVB照射者效果最佳。

[關(guān)鍵詞]白癜風(fēng)；黑素細(xì)胞；移植；窄波UVB

[中圖分類(lèi)號(hào)]R758.4+1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2012）08-1360-03

白癜風(fēng)是一種常見(jiàn)的色素脫失性疾病，病因復(fù)雜，治療困難。對(duì)于活動(dòng)期的白癜風(fēng)，可選擇藥物治療包括外用和口服皮質(zhì)激素，免疫調(diào)制劑，維生素D衍生物，系統(tǒng)或局部的光化學(xué)療法，窄波UVB及308nm準(zhǔn)分子激光[1]。而穩(wěn)定期白癜風(fēng)對(duì)于傳統(tǒng)方法治療大多無(wú)效，可考慮采用外科手段治療。自體黑素細(xì)胞培養(yǎng)移植是治療穩(wěn)定期白癜風(fēng)的一種有效方法，通過(guò)體外培養(yǎng)擴(kuò)增黑素細(xì)胞數(shù)量可用于較大面積皮損的治療，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外已有大量文獻(xiàn)報(bào)道[2-5]。聯(lián)合窄波紫外線(xiàn)照射能通過(guò)促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖和遷移而促進(jìn)移植區(qū)域復(fù)色[1]，筆者在以往的研究中發(fā)現(xiàn)自體黑素細(xì)胞培養(yǎng)移植聯(lián)合窄波UVB照射能明顯提高移植療效[6]。為了比較不同方式聯(lián)合窄波UVB照射對(duì)于自體黑素細(xì)胞培養(yǎng)移植療效的影響，筆者進(jìn)行了一項(xiàng)大樣本隨機(jī)對(duì)照研究，結(jié)果報(bào)道如下。

1資料和方法

1.1病例：病例入選標(biāo)準(zhǔn)：均符合中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)色素病學(xué)組制定的白癜風(fēng)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，病期參照VIDA評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[8]，均為穩(wěn)定期患者，病情穩(wěn)定時(shí)間均6個(gè)月以上，對(duì)常規(guī)的局部和系統(tǒng)治療無(wú)反應(yīng)，無(wú)瘢痕體質(zhì)以及無(wú)嚴(yán)重的自身免疫性疾病，患者均無(wú)紫外線(xiàn)照射的禁忌證。將患者隨機(jī)分為四組，A組：窄波UVB照射20次后進(jìn)行自體黑素細(xì)胞移植；B組：自體黑素細(xì)胞移植后予窄波UVB照射30次；C組：移植前予窄波UVB照射20次，移植后再予窄波UVB照射30次；D組：僅進(jìn)行自體黑素細(xì)胞移植，未照射窄波UVB。共治療221例白癜風(fēng)患者，其中男性104例，女性117例，年齡5～55歲（平均年齡23.1±10.5歲）；平均病程3.9年；節(jié)段型40例，尋常型181例。其中A組54例，B組63例，C組48例，D組56例。所有患者均經(jīng)知情同意，試驗(yàn)方案經(jīng)本院倫理委員會(huì)討論通過(guò)。

1.2 試劑和儀器：F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清、谷氨酰胺、慶大霉素、0.25%胰酶、0.02%EDTA、0.05%胰酶-EDTA、D-Hank′s液、基因素均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，霍亂毒素（CT）、異丁基甲基黃嘌呤(IBMX)、二甲基亞砜（DMSO）、L-多巴、內(nèi)皮素-1（ET-1）、黑色素均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，人重組堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）購(gòu)自英國(guó)Pepro-Tech公司。倒置顯微鏡和立體顯微鏡為日本Olympus產(chǎn)品，超脈沖二氧化碳激光機(jī)為美國(guó)科醫(yī)人公司產(chǎn)品，分光光度計(jì)為美國(guó)BIO-RAD公司產(chǎn)品。

1.3方法

1.3.1窄波UVB治療：起始劑量為0.4J/cm2，每周2次，每次照射劑量根據(jù)患者的反應(yīng)和耐受能力遞增20%，但不超過(guò)3J/cm2。B組和C組患者在移植后2周開(kāi)始照射窄波UVB。

1.3.2自體黑素細(xì)胞培養(yǎng)和移植

1.3.2.1 取皮：使用表皮分離吸皰儀在白癜風(fēng)患者腹部正常皮膚處吸皰4個(gè)（負(fù)壓40kPa，時(shí)間60～90min），用虹膜剪沿水皰壁邊緣剪下皰壁，置于Hanks'液中立即送入細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室分離細(xì)胞。

1.3.2.2 黑素細(xì)胞培養(yǎng)：按文獻(xiàn)所述方法進(jìn)行黑素細(xì)胞的分離和培養(yǎng)[2]。

1.3.2.3 黑素細(xì)胞移植：將復(fù)方利多卡因軟膏涂于移植區(qū)皮膚表面作局部麻醉，用超脈沖二氧化碳激光（能量225mJ/s）去除表皮層。將黑素細(xì)胞懸液均勻地接種在去除表皮層的移植區(qū)，無(wú)菌凡士林紗布覆蓋，外敷含F(xiàn)12培養(yǎng)液的濕紗布，包扎固定。囑咐患者平臥休息1h，7～10天后去除紗布。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1 移植1個(gè)月后80%皮損有明顯的色素產(chǎn)生，只有20%皮損2個(gè)月后才產(chǎn)生色素。聯(lián)合窄波UVB治療的患者出現(xiàn)色素時(shí)間早于未照射窄波UVB者。5%的患者治療區(qū)域起初有輕微的色素過(guò)深，但隨著時(shí)間的推移逐漸變淡，6個(gè)月后移植部位的色素與正常皮膚無(wú)明顯差別。5例患者在窄波UVB照射后出現(xiàn)皮膚灼熱感，15例患者出現(xiàn)皮膚干燥、瘙癢，12例患者出現(xiàn)紅斑。所有病例均跟蹤觀察療效至少6個(gè)月，最長(zhǎng)者隨訪(fǎng)24個(gè)月，未見(jiàn)瘢痕及其他不良反應(yīng)，產(chǎn)生的色素?zé)o脫失。

3討論

3.1 對(duì)于傳統(tǒng)治療抵抗的穩(wěn)定期白癜風(fēng)，使用培養(yǎng)的自體黑素細(xì)胞移植是一種較好的選擇。移植的純黑素細(xì)胞能為白癜風(fēng)區(qū)域提供新的黑素細(xì)胞來(lái)源，通過(guò)增殖擴(kuò)散，使白斑區(qū)復(fù)色。自體黑素細(xì)胞的體外培養(yǎng)能顯著增加黑素細(xì)胞的數(shù)量，從而用少量供皮區(qū)即可治療大面積的皮損，而且白斑區(qū)復(fù)色均勻，與周?chē)Ｆつw的色差小，避免了表皮移植后出現(xiàn)的“鵝卵石”樣表現(xiàn)。

窄波紫外線(xiàn)治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制尚未完全明確。復(fù)色往往從毛囊開(kāi)始，毛囊外毛根鞘存在的多巴染色陰性，無(wú)黑色素的黑素細(xì)胞被激活后出現(xiàn)增殖，產(chǎn)生黑素并移行到色素脫失部位致色素恢復(fù)[9]。因此單純的窄波UVB治療引起的復(fù)色模式為毛囊周?chē)?，而筆者所有患者均呈現(xiàn)彌散型復(fù)色，說(shuō)明窄波UVB直接刺激了移植而來(lái)的黑素細(xì)胞增殖和遷移。

筆者的研究發(fā)現(xiàn)無(wú)論移植前照光、移植后照光還是移植前后均照光，三組的痊愈率和有效率均顯著高于未照光組，其中又以移植前后均照光組療效最佳，移植前照光組次之。黑素細(xì)胞的有絲分裂、黑素合成和細(xì)胞遷移被證實(shí)由各種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)誘導(dǎo)，包括白介素-1（IL-1），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白三烯C4。IL-1α能刺激內(nèi)皮素-1（ET-1）的合成，ET-1是一種能促進(jìn)有絲分裂和黑素合成的血管收縮肽。Imokawa等發(fā)現(xiàn)窄波UVB照射后人角質(zhì)形成細(xì)胞中ET-1，IL-1α及酪氨酸酶的表達(dá)均增加[10]。Wu等研究也證實(shí)NB-UVB能刺激角質(zhì)形成細(xì)胞釋放bFGF和ET-1顯著增加，從而引起黑素細(xì)胞增殖。此外，窄波UVB能誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡[11]，而T細(xì)胞被認(rèn)為可能參與白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制。因此，筆者認(rèn)為移植前照射窄波UVB能通過(guò)影響各種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)及誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡為移植營(yíng)造一個(gè)有利于黑素細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，移植后照射窄波UVB能促進(jìn)黑素細(xì)胞的增殖和遷移，并通過(guò)免疫抑制作用保護(hù)增殖和移行的黑素細(xì)胞。

聯(lián)合窄波UVB照射能顯著提高自體黑素細(xì)胞培養(yǎng)移植治療白癜風(fēng)的療效，對(duì)于有條件者，在移植前后均應(yīng)進(jìn)行窄波UVB照射，以最大限度提高移植療效。至于移植前后的最佳照光次數(shù)還有待于筆者進(jìn)一步研究。

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[收稿日期]2012-05-16

編輯/張惠娟