視網(wǎng)膜母細胞瘤組織中Livin、PTEN表達變化及意義

(河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院，石家莊050011)

研究［1，2］證實，視網(wǎng)膜母細胞瘤(RB)的發(fā)生和發(fā)展是多基因參與、多階段變化的復雜過程。Livin是近幾年從人類基因組庫中篩選克隆出來的一種新的蛋白質(zhì)，其在一些腫瘤中高表達［3，4］。PTEN是第一個被發(fā)現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多種正常組織，但在惡性腫瘤中表達明顯異常［5］。2011年2～9月，我們觀察了RB組織中Livin、PTEN蛋白的表達變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 RB患兒43例(RB組)，男23例，女20例;年齡9個月～8歲，平均3.35歲;臨床分期為眼內(nèi)生長期21例，青光眼期13例，眼外擴展期9例;術前患者均未進行放化療，均行手術治療。術中切除癌組織標本，均經(jīng)福爾馬林固定，自動脫水，浸蠟，包埋，切片;術后病理檢查證實為RB，組織分化程度為未分化型24例、分化型19例。對照組視網(wǎng)膜組織切片34例，均來自外傷后眼球摘除患兒。兩組患兒性別、年齡具有可比性。

1.2 Livin、PTEN檢測方法 采用 Max-VisionTM快捷免疫組化法，按說明書操作。以已知的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。結果判定:Livin表達主要位于細胞質(zhì)，PTEN表達主要位于細胞核，以出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒作為陽性細胞判定。每張切片隨機選取10個不同高倍視野，各計數(shù)100個細胞。陽性細胞所占百分比≤5%計0分，6% ～25%計1分，26% ～50%計2分，51% ～75%計3分，＞75%計4分;無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕褐色為3分。上述兩項相加＜2分為陰性表達，≥2分判為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)比較用χ2檢驗或Fisher確切概率法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

RB組中 Livin、PTEN陽性表達分別為27例(62.79%)、20 例(46.51%)，顯著高于對照組的 7例(20.59%)、31 例(91.18%)，P 均 ＜0.05。Livin、PTEN表達與RB臨床病理參數(shù)的關系見表1。由表1可見，Livin表達與RB的分化程度有關(P＜0.05)，PTEN表達與RB的分化程度及臨床分期有關(P 均 ＜0.05)。

表1 Livin、PTEN表達與RB臨床病理參數(shù)的關系(例)

3 討論

Livin又名 KIAP/ML-IAP，2000年由科學家在人基因組庫中篩選克隆出的一種新型、有較強抗凋亡功能的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族新成員，能夠與凋亡蛋白酶結合，抑制其介導的細胞凋亡［6］。本研究中，Livin在RB組織中的表達明顯高于正常視網(wǎng)膜組織(P＜0.05)，提示 Livin的異常表達可能與RB的發(fā)生、發(fā)展有關。Livin的陽性表達與RB的組織分化程度有關，提示Livin表達可能與RB的惡性程度有關，可能是預后不良的指征。

PTEN是第一個被發(fā)現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多種正常組織，但在惡性腫瘤中PTEN的表達明顯異常。PTEN也是惟一能使脂類去磷酸化的抑癌基因，與多種細胞信號轉(zhuǎn)導通路的因子有關，不僅參與細胞周期的調(diào)控，還能調(diào)控細胞的生長、凋亡、移動及信號轉(zhuǎn)導等，參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，是人類腫瘤中最易發(fā)生突變的抑癌基因之一。關于PTEN與惡性腫瘤的關系，各家報道不一［7，8］。本研究中，PTEN 蛋白在 RB 中表達與正常對照者比較明顯降低(P＜0.05)，提示PTEN對RB的發(fā)生有抑制作用，PTEN的缺失或失活在RB的發(fā)病中發(fā)揮了重要作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，PTEN與RB的分化、臨床分期有關(P＜0.05)。PTEN阻滯PI3K/AKT通路，導致G1期停滯，抑制細胞生長，這是PTEN作用機制中最經(jīng)典的途徑。當PTEN在組織中的表達下調(diào)或缺失時，其對PI3K/AKT通路的抑制作用即減弱或消失，可導致AKT磷酸化，引起下游Livin基因的表達上調(diào)，隨即啟動一系列反應，從而抑制腫瘤細胞的凋亡［9］。這也提示，RB組織中Livin的激活與PTEN的失活或缺失之間可能存在相互協(xié)同作用，共同參與了RB的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及浸潤，提示RB的形成是多基因、多因素共同作用的結果。

［1］彭輝燦，何湘珍，夏旭光.p16、p21、p53和 PCNA在視網(wǎng)膜母細胞瘤中的表達［J］.眼科新進展，2002，22(4):242-244.

［2］應方微，李永平，唐松，等.抗視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞株SO-Rb50單克隆抗體相應抗原的提取［J］.中華眼底病雜志，2003，19(3):152-155.

［3］Yagihashi A，Asanuma K，Tsuji N，et al.Detection of anti-Livin antibody in gastrointestinal cancer patients［J］.Clin Chem，2003，49(7):1206-1208.

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