高效液相色譜法（HPLC測(cè)定）煙酰胺的含量

上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司，河南商丘 476000

煙酰胺為水溶性維生素，是輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ的組成部分，在生物氧化呼吸鏈中起著遞氫的作用，可促進(jìn)生物氧化過程和組織新陳代謝，對(duì)維持正常組織（特別是皮膚、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)）的完整性具有重要作用。此外，尚有防治心臟傳導(dǎo)阻滯，提高竇房結(jié)功能及抗快速型實(shí)驗(yàn)性心律失常作用。主要用于防治糙皮病、口炎、舌炎等，也可用于治療冠心病、病毒性心肌炎、風(fēng)濕性心臟病等。

1 儀器與試藥

1.1 儀器安捷倫 1200型高效液相色譜儀；BP211D型十萬分之一電子分析天平；BSA224S型萬分之一電子分析天平；AS5150型超聲儀；各種校驗(yàn)的玻璃容器（如移液管、容量瓶等）。

1.2 試藥煙酰胺對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100115-200703）；煙酰胺原料藥（天津中瑞藥業(yè)有限公司生產(chǎn)提供，批號(hào)為 110306、110705、111103）；甲醇為色譜級(jí)，天津星馬克科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；水為純化水。

2 色譜條件與系統(tǒng)性試驗(yàn)

色譜柱，日本資生堂生產(chǎn)的（A4AD04276）C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（35:65）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長為：261nm；進(jìn)樣體積20μl；理論塔板數(shù)按煙酰胺峰計(jì)算不低于3000。

3 溶液制備

3.1 對(duì)照品貯備液取煙酰胺對(duì)照品 0.02g，精密稱定，置于 20ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含1.0mg的煙酰胺溶液，作為對(duì)照品貯備液（1.0mg/ml）。

3.2 對(duì)照品溶液取“3.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液1ml，置50ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含20μg的煙酰胺溶液，作為對(duì)照品溶液（20μg/ml）。

3.3 供試品溶液取本品0.2g，精密稱定，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密量取1ml，置100ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含煙酰胺20μg的溶液，作為供試品溶液（20μg/ml）。

4 方法與結(jié)果

4.1 精密度試驗(yàn)取上述“3.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算 RSD=0.45%（n=6），表明精密度良好。

4.2 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（批號(hào)為111103）的煙酰胺樣品，按“3.3”項(xiàng)的方法，制備6份供試品溶液，按“4.1”項(xiàng)下方法測(cè)定含量，煙酰胺含量測(cè)定結(jié)果的RSD為0.66%（n=6），方法重復(fù)性良好。

4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述其中一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時(shí)測(cè)樣，測(cè)得峰面積，計(jì)算RSD=0.38%，表明樣品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

4.4 線性關(guān)系考察精密量取“3.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml分別置 50ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成10、20、30、40、50、60μg/ml的溶液，進(jìn)樣 20μg，記錄色譜峰面積。以煙酰胺濃度（C）對(duì)峰面積（S）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為S=1.0107C+1.9745，r=0.9991（n=6）。結(jié)果表明，煙酰胺在 10μg～60μg/ml范圍內(nèi)，濃度與峰面積成良好的線性關(guān)系。

4.5 回收率試驗(yàn)精密稱取同一批（111103）煙酰胺樣品，分別制成每 1ml中含 16μg、20μg、24μg的溶液（即供試品溶液濃度的80%、100%、120%）各2份，分別加入濃度為15.025μg/ml的對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果6份樣品的回收率，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

4.6 樣品含量測(cè)定取“3.3”項(xiàng)下的供試品溶液及“3.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液各20μl，按上述色譜條件測(cè)定。按外標(biāo)法峰面積計(jì)算樣品煙酰胺含量，并與《中國藥典》2010年版高氯酸非水滴定法測(cè)定的含量進(jìn)行比較（表2）。

表2 煙酰胺含量測(cè)定結(jié)果比較(%)

5 討論

《中國藥典》2010年版測(cè)定煙酰胺方法是高氯酸非水滴定法，由于是靠顏色判斷終點(diǎn)滴定，終點(diǎn)不易觀察，不同人員測(cè)定結(jié)果相差較大。筆者通過多次實(shí)驗(yàn)，證明本實(shí)驗(yàn)條件下的HPLC法可以更好的檢驗(yàn)、控制煙酰胺的含量。

[1]吳楣,陳媛,宋新康,等.高效液相法測(cè)定復(fù)方煙酰胺沙星軟膏中煙酰胺含量[J].中國社區(qū)醫(yī)師:醫(yī)學(xué)專業(yè),2008,10(14).