乳腺癌中MTDH的表達及意義

尹崇高，高乃堯，李洪利，李文通，張寶剛*

（1.山東省濰坊醫(yī)學(xué)院護理學(xué)院;2.科研處醫(yī)學(xué)研究實驗中心;3.病理學(xué)教研室，山東濰坊 261053;4.山東省濰坊衛(wèi)生學(xué)校教務(wù)科，山東濰坊 261041）

乳腺癌中MTDH的表達及意義

尹崇高1，高乃堯4，李洪利2，李文通3，張寶剛3*

（1.山東省濰坊醫(yī)學(xué)院護理學(xué)院;2.科研處醫(yī)學(xué)研究實驗中心;3.病理學(xué)教研室，山東濰坊 261053;4.山東省濰坊衛(wèi)生學(xué)校教務(wù)科，山東濰坊 261041）

*通信作者（corresponding author）:zbg111@yahoo.com.cn

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，其侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的主要原因［1］。

近來，美國新澤西癌癥研究所和普林斯頓大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)身患嚴重乳腺癌的患者體內(nèi)，8號人類染色體的一小部分被重復(fù)了多次，腫瘤內(nèi)一種名為Metadherin（MTDH）基因發(fā)生變異，表現(xiàn)異?；钴S［2］。本研究探討MTDH在乳腺癌發(fā)病中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例標本:收集濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)切除乳腺癌標本52例，分別取腫瘤組織和癌旁正常組織（＞5 cm），置于－150℃冰箱保存?zhèn)溆?。所有病例均?jīng)病理證實，術(shù)前均未采取放療、化療和免疫治療?；颊咂骄挲g55.8歲（41～80歲）且均為女性。乳腺癌標本分為高分化10例，中分化26例，低分化16例。20例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟1978年修訂的乳腺癌TNM分期標準:Ⅰ期10例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期10例。患者均知情同意。

1.1.2 主要試劑:免疫印跡法試劑（Sigma公司）;MTDH抗體（zymed公司）;TRIquick Reagent（北京索萊寶科技有限公司）;MmLV第一鏈cDNA合成試劑盒、PCR擴增試劑盒（上海生工生物有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 免疫印跡法檢測MTDH蛋白表達情況:基因組蛋白抽提試劑盒提取癌組織及癌旁正常乳腺組織中的蛋白質(zhì)，SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，半干轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜，5%奶粉封閉，雜交ECL發(fā)光試劑盒顯影、X片感光后顯影定影，清水沖凈晾干。應(yīng)用BiospectrumAC凝膠成像分析系統(tǒng)掃描照相保存圖片。

1.2.2 RT-PCR檢測MTDHmRNA表達情況:用TRIquick Reagent提取乳腺癌及癌旁乳腺組織中的總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，擴增目的基因。MTDH上游引物為5'-TGC CTCCTTCACAGACCAAGTCTGAA-3'，下游引物為5'-CTATCT CATCTGCAGCCGA-3'，目的條帶長度為411bp。以β-actin作為內(nèi)參照，β-actin上游引物為5'-CCTGTGGCATCCACGAA ACT-3'，下游引物為 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'，目的條帶長度為315 bp。PCR瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠，于BiospectrumAC凝膠成像分析系統(tǒng)下照相并掃描分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析:MTDH蛋白和mRNA的表達量用組織中蛋白的A值與內(nèi)參照的A值做比值表示。組織中MTDHmRNA、蛋白表達率分析及蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗，mRNA、蛋白的表達量用獨立樣本t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌及癌旁乳腺組織中MTDH蛋白的表達:52例乳腺癌組織中有46例檢測到MTDH蛋白的表達，表達量為1.213±0.364，表達率為88.5%，顯著高于癌旁乳腺組織中有15例檢測到MTDH蛋白的表達，表達量為0.392±0.178，表達率為28.8%（P＜0.01）（圖1）。

2.2 MTDH蛋白表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系:MTDH蛋白陽性表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.01），與TNM分期、分化程度無關(guān)。

2.3 乳腺癌及癌旁乳腺組織中MTDHmRNA的表達:在乳腺癌組織中MTDHmRNA表達率為82.7%（43/52），表達量為1.458±0.535，顯著高于在癌旁乳腺組織中表達率為30.8%（16/52），表達量為 0.767±0.318（P＜0.01）（圖2）。

圖1 MTDH蛋白在乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中的表達Fig 1 Expression of MTDH protein in breast cancer and normal breast tissue

3 討論

乳腺癌發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移導(dǎo)致患者預(yù)后不良，當(dāng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時，5年生存率由98%大幅下降至27%［3］。近來，美國研究人員對侵襲性乳腺癌患者的腫瘤樣本采用了集中方法來尋找使腫瘤擴散的基因，發(fā)現(xiàn)腫瘤內(nèi)有一種名為MTDH基因發(fā)生變異，表現(xiàn)異?；钴S。該基因可以幫助癌細胞黏著在其他器官的血管壁上，導(dǎo)致癌細胞更易擴散。

MTDH又稱為LYRIC，AEG-1和3D3，是近年來發(fā)現(xiàn)的一個癌基因，MTDH過表達與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在哺乳動物中，MTDH是一種極其保守的蛋白，目

圖2 MTDH及β-actin mRNA在乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中的表達Fig 2 Expression of MTDH and β-actin mRNA in breast cancer and normal breast tissue

前尚未發(fā)現(xiàn)在非脊椎動物中存在該蛋白。MTDH在極化的上皮組織中高度保守，和閉鎖小帶-1一起定位于緊密連接結(jié)構(gòu)中。大部分正常組織，MTDH表達非常低，甚至檢測不到。

本研究結(jié)果提示乳腺癌的癌變、侵襲、轉(zhuǎn)移可能與MTDH蛋白、mRNA的高表達有關(guān)。

［1］Kim MS，You MK，Rhuy DY，et al.Loquat（Eriobotrya japonica）extracts suppress the adhesion，migration and invasion of human breast cancer cell line［J］.Nutr Res Pract，2009，3:259 －264.

［2］Hu G，Chong RA，Yang Q，et al.MTDH activation by 8q22 genomic gain promotes chemoresistance and metastasis of poor-prognosis breast cancer［J］.Cancer Cell，2009，15:9－20.

［3］馮俊飛，董堅，洪敏，等.CXCR4-siRNA表達載體的構(gòu)建及其對體外乳腺癌細胞侵襲能力的影響［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，29:1286－1290.

R 737.9

A

1001-6325（2012）01-0087-02

2011－01－17

2011－05－25

國家自然科學(xué)基金（81072068）;山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金（BS2010YY071）;山東省高等學(xué)?？萍加媱潱↗10LF64）