HPLC法測定注射用頭孢呋辛鈉含量

袁 琦，郭新社，楊 浩

（河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物分析教研室，河南 開封 475001）

頭孢呋辛鈉（Cefuroxime Sodium），又名頭孢呋肟，為半合成的第二代頭孢菌素類抗生素［1］。因其對革蘭氏陰性菌的β內(nèi)酰胺酶相當(dāng)穩(wěn)定，有穿透血腦屏障等特點(diǎn)。臨床上廣泛應(yīng)用于敏感菌引起的呼吸道、泌尿系統(tǒng)、皮膚、軟組織、骨關(guān)節(jié)及女性生殖器等組織器官的感染，對敗血癥、腦膜炎也有效［2-3］。

頭孢呋辛鈉的測定方法主要有微生物法、旋光法、紫外分光光度法、近紅外光譜法和高效液相色譜法等［4-5］。其中大多數(shù)測定方法無分離能力，無法排除一些雜質(zhì)的干擾，不利于監(jiān)控注射用藥物的使用安全性。我們建立了高效液相色譜法測定注射用頭孢呋辛鈉的含量。該方法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好，可作為樣品的檢測方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters－2695高效液相色譜儀（Waters公司）；Waters－2489可變波長紫外檢測器（Waters公司）；UV－1600型紫外可見分光光度計（北京瑞利）；BP－211D電子天平（德國Sartorius）；色譜柱（大連伊利特科學(xué)有限公司）。

1.2 試藥

頭孢呋辛鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所30493－200704）；注射用頭孢呋辛鈉（規(guī)格：0.75g，批號：091009，091010，091011，河南帥克制藥有限公司）；乙腈為色譜純；醋酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉均為分析純；水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱C18（5μm，4.6mm×250mm）；流動相為pH3.4的緩沖液（取0.1mol／L醋酸鈉溶液50mL，加0.1mol／L的醋酸溶液至1000mL）－乙腈（86∶14）；流速1.0mL／min；檢測波長254nm；進(jìn)樣量20μL；柱溫：25℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取對照品約50mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品約50mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得 。

2.3 破壞試驗(yàn)

取頭孢呋辛鈉對照品適量，加流動相溶解并稀釋成每1mL中含100μg的溶液。取上述溶液適量，在60℃水浴中加熱10min，冷卻，使部分頭孢呋辛轉(zhuǎn)變?yōu)槿グ被柞ｎ^孢呋辛，取20μL注入液相色譜儀，頭孢呋辛鈉峰與雜質(zhì)峰的分離度為4.371。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性 取“2.2”項下各溶液按上述色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見圖1。由圖1可知，空白溶劑對主成分測定無干擾，頭孢呋辛鈉的出峰時間為8.315min。

圖1 頭孢呋辛鈉溶液色譜圖

2.4.2 精密度 精密稱取本品適量，用流動相溶解并稀釋制成0.5g／L的溶液，取20μL注入色譜儀，記錄色譜圖。重復(fù)測定6次，RSD值為0.24%。

2.4.3 檢測限與定量限 取本品，用流動相溶解制成0.0001g／L的溶液，進(jìn)樣20μL分析，記錄色譜圖，本品的最小檢測量為2ng。10∶1信噪比作為本品的定量限，即定量限為10ng。

2.4.4 線性與范圍 精密稱取頭孢呋辛鈉對照品適量，加流動相定量溶解，配制成濃度為0.75、0.60、0.50、0.40、0.25g／L的溶液，取20μL注入色譜儀，記錄色譜圖。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以溶液中頭孢呋辛鈉的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。回歸方程為：Y＝19730707 X＋874894，r＝0.9991。結(jié)果表明，頭孢呋辛鈉在0.25～0.75g／L范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2”項下方法配制供試品溶液（批號：091009），測定18h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定情況，重復(fù)測定6次。平均峰面積為20882496，RSD＝0.73%。以上結(jié)果表明，頭孢呋辛鈉在選定色譜條件下，于18h內(nèi)穩(wěn)定。

圖2 頭孢呋辛鈉線性圖

2.4.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取9個10mL容量瓶，分別精密加入已知濃度供試品（批號：091009）溶液4.0mL，再分別加入3.0、4.0、5.0mL對照品溶液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備低、中、高3種質(zhì)量濃度的供試品溶液，每種濃度制備3份樣品。按樣品測定項下方法測定含量，計算平均回收率為99.32%，RSD 值為0.28%。

2.5 含量測定

取“2.2”項下供試品約50mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測得的峰面積代入回歸方程計算出供試品中C16H16N4O8S的含量，結(jié)果各批樣品含量均符合規(guī)定，結(jié)果見表1。

表1 注射用頭孢呋辛鈉的含量測定結(jié)果（n＝3）

3 討論

3.1 流動相的選擇

按照《中國藥典》（2010版）二部規(guī)定的流動相，頭孢呋辛鈉出峰時間約為35min，樣品保留時間過長，色譜峰拖尾嚴(yán)重［6］。我們在實(shí)驗(yàn)中，以pH 3.4的醋酸鹽緩沖溶液－乙腈（10∶1.6）為流動相，縮短了保留時間。破壞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在實(shí)驗(yàn)選定的色譜條件下，頭孢呋辛鈉與雜質(zhì)峰能夠完全分離［7］，大大降低了時間成本和溶劑的消耗。

3.2 柱溫的選擇

通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，柱溫的變化，對頭孢呋辛鈉的出峰時間影響較大，故在測定頭孢呋辛鈉的含量時，雖然是在室溫下測定，最好還是把色譜柱放入柱溫箱中，以保證柱溫的恒定和測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

高效液相色譜法測量頭孢呋辛鈉的含量，方法簡便，測量準(zhǔn)確，能很好地控制藥品質(zhì)量，保證了臨床用藥的安全。

［1］高碩，楊錯，王紅.頭孢呋辛鈉藥動學(xué)的研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2012，23（1）：85－86.

［2］鄧寶軍，林詩貴，李蜀巍，等.頭孢呋辛的臨床抗感染研究進(jìn)展［J］.中國臨床藥理學(xué)雜志，2000，16（5）：390－393.

［3］白林，王曉蕾，王璐，等.頭孢呋辛鈉與5種常用輸液的配伍穩(wěn)定性研究［J］.中國藥師，2008，11（3）：335－336.

［4］謝守霞，董淳.旋光法測定注射用頭孢呋辛鈉的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2003，18（3）：219－222.

［5］杜美菊，陳玲.荷移分光光度法測定頭孢呋辛鈉的含量［J］.商丘師范學(xué)院學(xué)報，2011，27（9）：71－73.

［6］國家藥典委員會編.中國藥典：二部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1188－1190.

［7］陳兆坤，胡昌勤，沈永嘉.頭孢呋辛鈉的氨解研究［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2007，7（10）：1770－1771.