文│潘紅梅 張鳳鳴 張利娟 張亮 王娟（重慶市畜牧科學(xué)院）

溫清華 劉勇（西南大學(xué)榮昌校區(qū)）

重慶板角山羊，屬優(yōu)良的皮肉兼用型地方品種，具有適應(yīng)性強(qiáng)、抗病力強(qiáng)，體型大、生長(zhǎng)快，產(chǎn)肉多、膻味輕，皮張面積大、質(zhì)量好等特點(diǎn)。發(fā)展板角山羊養(yǎng)殖業(yè)是庫(kù)區(qū)發(fā)展草食牲畜，促進(jìn)農(nóng)民增收的重要途徑。但最新的品種資源調(diào)查顯示，該品種種群數(shù)量正急劇下降，因此，采用生物技術(shù)手段，加強(qiáng)選種選配、提純復(fù)壯、快速擴(kuò)繁是當(dāng)前急需解決的問(wèn)題。本試驗(yàn)用加拿大和寧波生產(chǎn)的垂體促卵泡素（FSH）對(duì)重慶板角山羊進(jìn)行超數(shù)排卵效果研究。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料。試驗(yàn)動(dòng)物由重慶市巫溪縣板角山羊保種區(qū)內(nèi)購(gòu)回，共22只成年板角母山羊和4只成年板角公山羊，全部舍養(yǎng)，精粗飼料搭配飼喂，體況良好、無(wú)疾病，定期驅(qū)蟲(chóng)與注射疫苗。山羊購(gòu)入后，用氯前列烯醇（PG）進(jìn)行流產(chǎn)處理，并加強(qiáng)補(bǔ)飼和管理，使其盡快適應(yīng)新的環(huán)境和飼養(yǎng)管理，膘情達(dá)到中等以上。選擇健康、發(fā)育正常、繁殖機(jī)能正常、體況較好、膘情中上等的母羊作受試動(dòng)物。整個(gè)試驗(yàn)于山羊發(fā)情季節(jié)（9～12月）進(jìn)行。主要試劑包括FSH、FOLLTROPIN-V，加拿大；FSH、PG、促排卵素3號(hào)（LRH-A3），寧波第二激素廠；CIDR，澳大利亞EAZIBREED。

2.試驗(yàn)方法。

（1）試驗(yàn)羊的發(fā)情周期觀察。超數(shù)排卵（以下簡(jiǎn)稱超排）處理前，對(duì)供體羊群連續(xù)觀察兩個(gè)以上完整發(fā)情周期，準(zhǔn)確記錄每只羊發(fā)情周期起止日期及周期天數(shù)。

（2）超排處理方案。將CIDR植入供體羊陰道內(nèi)，在發(fā)情的第15天，注射FSH進(jìn)行超排，連續(xù)4天，上下午各注射1次，共8次。加拿大激素總劑量為8.8毫克（第一天1.45毫克，第二天1.95毫克，第三天2.45毫克，第四天2.95毫克）；寧波激素總劑量為300國(guó)際單位（第一天45國(guó)際單位，第二天40國(guó)際單位，第三天35國(guó)際單位，第四天30國(guó)際單位）。分別于最后1次注射的同時(shí)肌注PG 0.1毫克/頭，并取出CIDR，于第2天開(kāi)始觀察發(fā)情，發(fā)情后立即配種，同時(shí)靜脈注射LRH-A3 100國(guó)際單位，12小時(shí)后補(bǔ)配1次。配種后第6天手術(shù)子宮角沖胚利用，并統(tǒng)計(jì)超排結(jié)果。之后，再依據(jù)上述試驗(yàn)的結(jié)果，采用寧波FSH對(duì)不同劑量FSH的超排效果進(jìn)行研究。

（3）試情及配種。最后一次注射FSH后，用試情公羊檢測(cè)供體羊發(fā)情情況，此后，第2天早晨開(kāi)始給供受體羊每2小時(shí)試情一次。母羊接受爬跨為發(fā)情時(shí)間，發(fā)情后2～3小時(shí)靜脈注射LRH-A3 100國(guó)際單位，15～20小時(shí)開(kāi)始配種，配種次數(shù)1～2次。

（4）手術(shù)及胚胎收集。于配種后的6～7天，將受試羊用846注射液1～1.5毫升肌肉注射全身麻醉后采用手術(shù)法進(jìn)行胚胎采集，由子宮角注入30毫升預(yù)熱的沖卵液，在輸卵管傘部一端用集胚杯收集胚胎。供體發(fā)情后50～55小時(shí)，通過(guò)手術(shù)方法，在輸卵管回收受精卵。即于乳腺根部?jī)扇殪o脈之間將皮膚切開(kāi)，露出并切開(kāi)腹中線，用兩指將子宮及卵巢拉出體外，檢查黃體數(shù)及卵泡數(shù)，把沖卵管一端經(jīng)輸卵管傘部插入，另一端接集卵皿，然后將套管針經(jīng)富管結(jié)合部刺入并注射5毫升沖卵液（DPBS+10%發(fā)情山羊血清）。

（5）胚胎質(zhì)量評(píng)價(jià)。根據(jù)胚胎形態(tài)特征分為A、B、C、D四個(gè)等級(jí)。A級(jí)胚胎：透明帶體積充實(shí)、飽滿，卵裂球緊密，大小色澤充實(shí)度均勻一致，沒(méi)有缺陷的標(biāo)準(zhǔn)胚胎；B級(jí)胚胎：其結(jié)構(gòu)形態(tài)基本符合一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，僅個(gè)別卵裂球有增大現(xiàn)象；C級(jí)胚胎：胚胎結(jié)構(gòu)和卵裂球大小色澤致密度基本正常，僅個(gè)別卵裂球凸于細(xì)胞團(tuán)表面；D級(jí)胚胎：胚胎大小色澤致密度不正常，卵裂球凸于細(xì)胞團(tuán)表面較多，或者是根本沒(méi)有受精的卵母細(xì)胞或退化變性胚胎。A、B級(jí)胚胎為可移植用胚胎。在體視鏡下用吸卵管將胚胎轉(zhuǎn)入凹皿，根據(jù)形態(tài)分成可移植用與不可移植用胚胎，將可移植用胚胎置入38.9℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中供移植或冷凍保存。

表1 不同F(xiàn)SH劑量對(duì)超排效果的影響

3.統(tǒng)計(jì)方法。t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著分析。

二、試驗(yàn)結(jié)果與分析

1.不同來(lái)源FSH對(duì)板角山羊超排效果的影響。加拿大、寧波生產(chǎn)的FSH超排結(jié)果表明，兩組羊的平均黃體數(shù)、可用胚胎數(shù)差異均不顯著（P＞0.05）。加拿大組和寧波組平均每只羊獲得可用胚胎分別為（11.88±6.83）枚和（12.00±6.77）枚。

2.不同F(xiàn)SH劑量對(duì)板角山羊超排效果的影響。

用三種不同的FSH劑量（280國(guó)際單位、300國(guó)際單位、320國(guó)際單位）對(duì)板角山羊進(jìn)行超排處理，結(jié)果見(jiàn)表1。

三、討論

1.不同來(lái)源FSH對(duì)板角山羊超排效果的影響。

關(guān)于不同來(lái)源的FSH對(duì)超排效果的影響，不同的研究者獲得的超排效果差異很大。本研究發(fā)現(xiàn)，加拿大產(chǎn)FSH和寧波產(chǎn)FSH超排效果類(lèi)似，平均黃體數(shù)、回收胚胎總數(shù)以及可用胚胎數(shù)差異均不顯著（P＞0.05）；一定劑量的國(guó)產(chǎn)（寧波）激素可以獲得與進(jìn)口激素相同的超排效果，但用進(jìn)口FSH超排時(shí)，未排卵泡較少。

從成本的角度來(lái)看，進(jìn)口FSH雖能獲得相對(duì)穩(wěn)定的超排效果，但其昂貴的價(jià)格令規(guī)模生產(chǎn)者們望而卻步；國(guó)產(chǎn)激素的價(jià)格優(yōu)勢(shì)不言而喻，但其超排效果不穩(wěn)定，常因廠家和批次的不同而有所差異。因此，在進(jìn)行大規(guī)模的胚胎移植前必須做預(yù)試。

2.不同F(xiàn)SH劑量對(duì)板角山羊超排效果的影響。

李擁軍等（2008）認(rèn)為對(duì)山羊進(jìn)行超排處理時(shí)，外源FSH可促進(jìn)卵巢中卵泡的發(fā)育、成熟，但到一定劑量后，超排效果并不隨FSH劑量的增加而增加。如果FSH使用劑量過(guò)大，卵巢中發(fā)育的卵泡和排卵數(shù)量過(guò)多，會(huì)導(dǎo)致卵巢體積異常增大和卵子接受障礙，經(jīng)輸卵管傘接受到的卵子數(shù)量卻很有限。同時(shí)，多數(shù)黃體分泌的孕酮量增大，可能使運(yùn)行到輸卵管的精子和卵子發(fā)生變性，導(dǎo)致回收的胚胎退化或未受精卵的比例增高。

本試驗(yàn)參照李擁軍等對(duì)超排所用的劑量分組，獲得與李擁軍試驗(yàn)組II相似的結(jié)果，即280國(guó)際單位為最佳的超排劑量。因本試驗(yàn)所用的全部是從未受過(guò)FSH處理的山羊，且多數(shù)為初產(chǎn)羊，體內(nèi)的激素水平不穩(wěn)定，對(duì)激素敏感性高，加大激素劑量時(shí)，雖然能促進(jìn)卵泡發(fā)育、排卵，但受精率降低。因此，為了能取得更好的超排效果，在生產(chǎn)實(shí)踐中，未生產(chǎn)過(guò)也沒(méi)有接受過(guò)超排處理的羊，應(yīng)該用較低劑量超排，而生產(chǎn)過(guò)且接受過(guò)超排處理的羊，可以適當(dāng)增加FSH劑量。