環(huán)保透明劑替代二甲苯在病理制片技術(shù)中的應(yīng)用

第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院病理科（西安710038）

蘭 淼 李艷紅△ 鞏 麗 朱少君 任 拼 姚 麗 韓秀娟 張 偉▲

在常規(guī)組織石蠟制片技術(shù)中，組織透明、切片脫臘、透明、封固劑制備都離不開透明劑的使用，是病理制片必須使用的有機(jī)溶劑。二甲苯作為病理石蠟切片透明劑效果優(yōu)良，但隨著其對(duì)人體的毒性研究，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期使用二甲苯可對(duì)機(jī)體構(gòu)成眾多危害［1］，吸入二甲苯蒸氣可引起眼、鼻、喉的刺激，高濃度時(shí)可致嚴(yán)重的呼吸困難，甚至死亡。衛(wèi)生部在《工業(yè)企業(yè)設(shè)計(jì)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)二甲苯的最高容許濃度做了具體規(guī)定［2］，已把二甲苯中毒定為職業(yè)病之一。環(huán)保透明劑是以純天然植物提取油配制而成無色芳香透明液體。我們采用環(huán)保透明劑代替二甲苯運(yùn)用到病理制片和染色過程中，觀察其運(yùn)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 材 料 選取本院2010年4～6月臨床送檢的活體組織標(biāo)本，其中胃腸組織30例，甲狀腺組織30例，皮膚組織30例，淋巴結(jié)組織30例，共計(jì)120例。儀器包括德國(guó)Leica SP300全自動(dòng)封閉式脫水機(jī)2臺(tái)、德國(guó)Laica自動(dòng)染色封片機(jī)2臺(tái)、德國(guó)Leica RM 2235石蠟切片機(jī)均由西安康源生物器材公司提供；YT－6B型攤烤片機(jī)由湖北孝感亞光醫(yī)用生物器材公司提供。試劑包括環(huán)保透明劑（由廣州市秀威貿(mào)易有限公司提供）、二甲苯分析純（西安化學(xué)試劑廠）、蘇木素（英國(guó)進(jìn)口上海化學(xué)試劑分裝廠提供）、伊紅（北京化學(xué)試劑廠）、中性樹膠（中國(guó)上海標(biāo)本模型廠）。

2 方 法 120例標(biāo)本每例標(biāo)本分別取兩塊組織，取材大小為1．5c m×1．5c m×0．3c m。分為二甲苯組與環(huán)保透明劑組各120塊。分別放入裝有環(huán)保透明劑和二甲苯試劑的全自動(dòng)封閉式脫水機(jī)中，組織按常規(guī)脫水程序進(jìn)行固定、脫水、透明和浸蠟。每組各設(shè)2缸透明劑，作用時(shí)間相同。每缸為30 min，2缸總共為60 min。兩組組織分別進(jìn)行石蠟包埋，4μm厚切片，烤片機(jī)烤片，溫度70℃，時(shí)間1h。再分別放入裝有環(huán)保透明劑和二甲苯試劑的全自動(dòng)染色封片中，切片按常規(guī)程序進(jìn)行脫蠟脫水、HE染色、脫水透明和封片。

結(jié) 果

1 脫水機(jī)組織處理時(shí)間比較 見表1。二甲苯組與環(huán)保透明劑組各個(gè)環(huán)節(jié)的組織脫水浸蠟時(shí)間無增減。環(huán)保透明劑組兩組梯度乙醇脫水時(shí)間無差別。

表1 兩組標(biāo)本全自動(dòng)組織脫水機(jī)處理程序比較

2 染色機(jī)各環(huán)節(jié)時(shí)間比較 見表2。二甲苯組與環(huán)保透明劑組的切片脫蠟時(shí)間一致，環(huán)保透明劑組的脫蠟時(shí)間較二甲苯組稍長(zhǎng)，兩組梯度乙醇脫水時(shí)間無差別。

表2 兩組切片全自動(dòng)染色封片機(jī)染色程序比較

3 組織處理效果比較 見表3。環(huán)保透明劑應(yīng)用于組織透明效果與二甲苯基本一致，利于切片，染色鮮亮，對(duì)比度強(qiáng)，有效的減少了環(huán)境污染。

表3 環(huán)保透明劑與二甲苯病理組織處理效果的比較

討 論

在常規(guī)石蠟制片技術(shù)中，組織在固定后需要進(jìn)行脫水透明和浸蠟等處理，石蠟切片必須經(jīng)過脫蠟后才能進(jìn)行相關(guān)的染色。一直以來在病理組織制片過程中，二甲苯是首選的脫蠟劑［3］。環(huán)保透明劑是一種新型的生物組織透明劑，它是一種無色、不揮發(fā)的有機(jī)溶劑，天然水果味，即使加熱也不會(huì)產(chǎn)生對(duì)人體不利的有害氣體，符合國(guó)家 GB18583－2001環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)。由于乙醇和石蠟不能相混合。因此組織在乙醇脫水后必須要經(jīng)過一種過渡的溶劑，才能進(jìn)入石蠟浸蠟。環(huán)保透明劑具有既能和乙醇又能和石蠟及樹膠互溶的物理特點(diǎn)，對(duì)組織也有透明作用，因此在脫水劑乙醇和石蠟之間能起到一種“橋梁作用”。環(huán)保透明劑和二甲苯對(duì)組織都有收縮作用，但比二甲苯少，能很好地保存組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其作用效果與二甲苯相當(dāng)。在快速石蠟制片的操作過程中，將環(huán)保透明劑加熱至45℃，低于浸蠟的溫度，相應(yīng)減少作用時(shí)間，也不會(huì)引起組織收縮和破壞組織抗原［4－8］。使用該試劑制作的組織蠟塊軟硬適中，易于切出2～3μm完整切片。切片經(jīng)環(huán)保透明劑脫蠟后進(jìn)行HE染色、特殊染色和免疫組化染色，組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完好，核漿染色分明：能顯示出相應(yīng)的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和其他組織成分如膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、基底膜和中性黏液物質(zhì)等；也能很好地將組織中的相應(yīng)抗原特異地顯示出來，定位準(zhǔn)確，背景干凈。

本研究表明，采用環(huán)保透明劑可以代替二甲苯用于病理制片技術(shù)，制作出的組織染片不會(huì)對(duì)組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組織細(xì)胞內(nèi)其他成分以及組織抗原造成破壞，符合臨床病理診斷和研究所要求的優(yōu)質(zhì)染色片的要求，同時(shí)也符合實(shí)驗(yàn)室環(huán)保的要求。缺點(diǎn)是價(jià)格較高，且對(duì)于長(zhǎng)期保存的蠟塊切片，其蠟塊粘固度，有無皸裂及切片長(zhǎng)期封固效果，有無褪色現(xiàn)象還有待觀察。因此，該試劑能否廣泛應(yīng)用于病理組織制片中，達(dá)到良好而持久的應(yīng)用效果，尚需進(jìn)一步研究。

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