陳恩碧 鄒繼彬 黃勇波 黃 偉 高 翔 賴德欣

廣東省湛江中心人民醫(yī)院普外科，廣東湛江 524023

CTHRC1和NFE2L3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性

陳恩碧 鄒繼彬 黃勇波 黃 偉 高 翔 賴德欣

廣東省湛江中心人民醫(yī)院普外科，廣東湛江 524023

目的 探討CTHRC1和NFE2L3在結(jié)直腸癌早期診斷的意義。 方法 收集本院2005～2011年經(jīng)過(guò)病理組織學(xué)檢查診斷結(jié)直腸癌的手術(shù)標(biāo)本51例與非癌癥的經(jīng)過(guò)病理組織學(xué)檢查為正常結(jié)腸和直腸組織20例，應(yīng)用免疫組化檢測(cè)人結(jié)直腸中CTHRC1和NFE2L3蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 癌組織中CTHRC1表達(dá)陽(yáng)性47例（92.16%），正常組織中陽(yáng)性1例（5.00%），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=30.13，P＜0.01）；NFE2L3的瘤組織陽(yáng)性43例（84.43%），正常組織中6例（30.00%），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.22，P＜0.01）。CTHRC1陽(yáng)性表達(dá)組中，NFE2L3的陽(yáng)性表達(dá)率為72.55%（37/51)；在CTHRC1陰性表達(dá)組中，NFE2L3陽(yáng)性表達(dá)率為1.96%（1/51），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=36.54，r：0.510；P＜0.01），兩者表達(dá)呈正相關(guān)。 結(jié)論 CTHRC1是結(jié)直腸癌發(fā)展過(guò)程中的重要因素，而NFE2L3可以直接調(diào)節(jié)CTHRC1基因的表達(dá)，這說(shuō)明通過(guò)抑制NFE2L3的活性可以減少CTHRC1的表達(dá)，進(jìn)而延緩結(jié)直腸癌的進(jìn)展，從而發(fā)揮其抗腫瘤的作用。

結(jié)直腸癌；三螺旋重復(fù)膠原蛋白1；核因子（網(wǎng)織紅細(xì)胞衍生2）樣3；癌癥生物標(biāo)記

結(jié)直腸癌（Colorectal cancer，CRC）是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。CRC早期可無(wú)癥狀，而晚期手術(shù)效果差。因此對(duì)結(jié)直腸癌的診治最重要的是早期診斷及早期手術(shù)治療。目前臨床上用于CRC分子標(biāo)記診斷的是CEA，其靈敏度和可靠性較低[1]。由此CRC的臨床診療上需要研究一種新型分子標(biāo)記作為CRC早期診斷的標(biāo)志物。三螺旋重復(fù)膠原蛋白1（collagentriple helix repeat containing1，CTHRC1）是一種分泌蛋白，主要的生物學(xué)作用是抑制膠原基質(zhì)的合成。在已有的研究中表明，CTHRC1在結(jié)直腸癌中高表達(dá)[2-4]。在最近的研究中提出，抑制CTHRC1可以減少黑色素瘤[5]。核因子（網(wǎng)織紅細(xì)胞衍生2）樣 3[nuclear factor （erythroid-derived 2）-like 3，NFE2L3]是NF-E2家族的第三個(gè)家族成員，主要的生物學(xué)作用是誘導(dǎo)抗氧化作用基礎(chǔ)基因的表達(dá)[6]。在已有的研究表明NFE2L3在卵巢漿液性乳頭狀癌、固體腫瘤干細(xì)胞、睪丸精原細(xì)胞瘤中表達(dá)。本文主要是通過(guò)免疫組化等檢測(cè)技術(shù)探討CTHRC1和NFE2L3在結(jié)直腸癌早期診斷的意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

收集本院2005～2011年經(jīng)過(guò)病理組織學(xué)檢查診斷結(jié)直腸癌的手術(shù)標(biāo)本51例為實(shí)驗(yàn)組，男40例，女11例，平均年齡（59.4±12.5）歲；因外傷及其他非癌癥的經(jīng)病理組織學(xué)檢查為正常結(jié)腸和直腸組織標(biāo)本20例為正常組，男14例，女6例，平均年齡（58.2±11.6）歲。

1.2 試劑

Anti-CTHRC1 antibody（兔抗人類型）是由Abcam提供，產(chǎn)品批號(hào)：ab54181；NFE2L3 Antibody（兔抗人類型）購(gòu)買自anbobio，產(chǎn)品批號(hào)：C20959；二抗為福州邁新提供的即用型快速免疫組化MaxVisionTM檢測(cè)試劑盒 （抗兔），產(chǎn)品批號(hào)：KIT-5004。

1.3 CTHRC1和NFE2L3的免疫組織化學(xué)檢測(cè)

石蠟切片脫蠟和水化后，用PBS（pH7.4）沖洗3次，每次3 min。微波修復(fù)3 min。每張切片加3%過(guò)氧化氫50 μL，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min。去PBS液，每張切片加1滴或50μL的一抗，室溫下4℃12h，PBS沖洗3次，每次3min。去PBS液，每張切片加即用型MaxVisionTM 試劑50 μL，室溫下孵育10～15 min。PBS沖洗3次，每次3 min。去除PBS液，每張切片加新鮮配制的DAB溶液100 μL，顯微鏡下觀察3～5 min。自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，PBS或自來(lái)水沖洗返藍(lán)，經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析所得數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以百分比（陽(yáng)性率）表示，采用χ2檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)進(jìn)行相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 CTHRC1和NFE2L3蛋白的表達(dá)

癌組織中CTHRC1表達(dá)陽(yáng)性47例（92.16%），正常組織中陽(yáng)性1例（5.00%），兩組比較差異極其顯著 （χ2=30.13，P＜0.01）；NFE2L3的瘤組織陽(yáng)性 43例（84.43%），正常組織陽(yáng)性6 例（30.00%），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.22，P ＜0.01）。 見(jiàn)表 1。

表1 CTHRC1、NFE2L3表達(dá)與結(jié)直腸癌組織臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

2.2 結(jié)直腸癌中CTHRC1與NFE2L3的相關(guān)性

CTHRC1和NFE2L3均陽(yáng)性表達(dá)者37例，均陰性者8例；CTHRC1陽(yáng)性、NFE2L3陰性者5例；CTHRC1陰性、NFE2L3陽(yáng)性者1例；CTHRC1陽(yáng)性表達(dá)組中，NFE2L3的陽(yáng)性表達(dá)率為72.55%（37/51）；在 CTHRC1陰性表達(dá)組中，NFE2L3陽(yáng)性表達(dá)率為 1.96%（1/51）， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=36.54，r：0.510；P ＜ 0.01），兩者表達(dá)呈正相關(guān)。

3 討論

3.1 CTHRC1的表達(dá)與結(jié)直腸癌的關(guān)系

CTHRC1基因在體外實(shí)驗(yàn)中已被證實(shí)其過(guò)表達(dá)能夠提高細(xì)胞的遷移能力并抑制Ⅰ型膠原的合成[7]，可以通過(guò)限制膠原基質(zhì)沉積和促進(jìn)細(xì)胞遷移來(lái)參與血管的損傷修復(fù)，因此，其表達(dá)可能與腫瘤的侵襲及惡性程度相關(guān)。應(yīng)用抗CTHRC1及其受體的單克隆抗體可封閉已分泌的CTHRC1及CTHRC1R，從而達(dá)到干擾、阻斷CTHRC1與其受體旁分泌和自分泌作用的目的。目前已有抗CTHRC1及CTHRC1R抗體的抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床[8]，其主要是通過(guò)阻礙血管的生成從而有效地抑制腫瘤淋巴管的生成和癌癥的轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)，CTHRC1在大部分的結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)異常增高，只有4例患者少量表達(dá)，考慮為患者的年齡較高。結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)端的正常組織中CTHRC1的表達(dá)極少，與結(jié)直腸癌組織的CTHRC1的表達(dá)有極顯著差異（P<0.01），并且發(fā)現(xiàn)在結(jié)直腸癌組織中新生血管周圍的腫瘤細(xì)胞CTHRC1表達(dá)較強(qiáng)，驗(yàn)證了結(jié)直腸癌細(xì)胞產(chǎn)生的CTHRC1可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

3.2 結(jié)直腸癌中CTHRC1的表達(dá)與NFE2L3的關(guān)系

CTHRC1的激活首先是由細(xì)胞外的IL-6和細(xì)胞膜上的gp130受體結(jié)合，然后CTHRC1蛋白接收膜受體gp130的信號(hào)后，CTHRC1上調(diào)NFE2L3的磷酸化水平，促使NFE2L3入核后，反式激活CTHRC1的啟動(dòng)子，促進(jìn)CTHRC1的表達(dá)和分泌[9-10]。這其中Ras-MEK通路和mTOR蛋白也有上調(diào)NFE2L3的磷酸化水平的作用[11-12]。本研究結(jié)果顯示在結(jié)直腸癌組織中CTHRC1與NFE2L3的表達(dá)呈正相關(guān)，表明它們?cè)诮Y(jié)直腸癌的發(fā)生中可能是很重要的相關(guān)因素。

總之，CTHRC1是結(jié)直腸癌發(fā)展過(guò)程中的重要因素，而NFE2L3可以直接調(diào)節(jié)CTHRC1基因的表達(dá)，這說(shuō)明通過(guò)抑制NFE2L3的活性可以減少CTHRC1的表達(dá)，進(jìn)而減緩結(jié)直腸癌的進(jìn)展，從而發(fā)揮其抗腫瘤的作用。然而對(duì)NFE2L3的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未明了，有待進(jìn)一步的深入研究。

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CTHRC1 and NFE2L3 expression in colorectal cancer tissues and correlation

CHEN EnbiZOU Jibin HUANG YongboHUANG WeiGAO XiangLAI Dexin
Department of General Surgery,Zhanjiang Center People's Hospital in Guangdong Province,Zhanjiang 524023,China

ObjectiveTo explore the significance of the CTHRC1 and NFE2L3 in the early diagnosis of colorectal cancer.Methods Collected our hospital's 51 cases of colorectal cancer's surgical specimens which were diagnosed by the histopathological and 20 cases of non-cancer colorectal's normal tissue which were tested by histopathological during 2005 to 2011.Results CTHRC1 expressed positive for 47 cases(92.16%)in cancer tissues,but only 1 case(5.00%)expressed positive in normal tissues,the difference of them was extremely significant(χ2=30.13,P ＜ 0.01);the positive of the NFE2L3 which in tumor tissue was in 43 cases(84.43%),but only 6 cases(30.00%)in normal tissue,and the difference was significant too(χ2=23.22,P ＜ 0.01).The positive expression rate of the NFE2L3 was 72.55%(37/51)in the CTHRC1's positive expression group;in CTHRC1's negative expression group,NFE2L3 positive expression rate was 1.96%(1/51),the difference was significant(χ2=36.54,r：0.510;P ＜ 0.01),and the two expression was positively correlated.Conclusion In the progress of colorectal cancer,CTHRC1 is an important factor.NFE2L3 can directly regulate the expression of the CTHRC1 gene.It explained that,it can reduce the expression of CTHRC1 by inhibited activity of the NFE2L3,thus delay the progress of colorectal cancer,and play its anti-tumor role.

Colorectal cancer;Collagentriple helix repeat containing1;Nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 3;Cancer biomarker

R735.3

A

1674-4721（2012）06（a）-0008-02

陳恩碧（1966-），男，副主任醫(yī)師。

2012-04-23 本文編輯：馬 雙）