鄭欽方 汪 冶

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長沙 410128;2.懷化醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中心，湖南 懷化 418000)

血馬鞭是一種侗族藥物，其植物來源為馬鞭草科(Verbenaceae)紫珠屬(Callicarpa L.)植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun)的干燥全株，中國藥典2010年版收載的廣東紫珠，其入藥部位是干燥地上部分［1］。血馬鞭具有收斂止血，散瘀，清熱解毒的功效。主要用于治療咯血，便血，崩漏，肺熱咳嗽，咽喉腫痛，熱毒瘡瘍，水火燙傷［1］。

血馬鞭的主要化學(xué)成分為黃酮類、三萜類、苯丙素糖苷類等［2］。近年來，研究較多的為黃酮類成分，對三萜類成分研究較少。血馬鞭中三萜主要為齊墩果酸、熊果酸、白樺酸［3，4］，其中熊果酸和齊墩果酸具有抗炎、保肝、抗腫瘤、抗HIV、抗菌、抗?jié)?、降血糖和降血脂等功效?］。全國有18家制藥企業(yè)生產(chǎn)抗宮炎片或抗宮炎膠囊，因血馬鞭藥材需求量大，現(xiàn)湖南懷化、江西萍鄉(xiāng)等地已開展大規(guī)模栽培，為更好的開發(fā)血馬鞭資源，特對血馬鞭中的總?cè)坪繙y定進(jìn)行研究，以對血馬鞭的質(zhì)量進(jìn)行評價(jià)，為開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器:UV－4802型紫外可見分光光度計(jì)(上海尤尼柯儀器有限公司)，KQ－250DB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)，PS－80AL超聲儀(深圳市科潔超聲科技公司)HZK－FA－210電子天平(美國華志)。

1.2 藥材:血馬鞭樣品分別為湖南懷化會同縣連山基地栽培藥材，湖南懷化雪峰山野生藥材，懷化郊區(qū)林下自然生長藥材，江西萍鄉(xiāng)的大田栽培1年生和多年生藥材，經(jīng)懷化醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校汪冶教授鑒定，均為馬鞭草科紫珠屬植物廣東紫珠。采收的廣東紫珠藥材均使用陰干法干燥。

1.3 試劑與試藥:齊墩果酸對照品購于中國藥品生物制品檢定所(批號:110709－200505)，無水乙醇、香草醛、高氯酸、冰醋酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 血馬鞭總?cè)瞥煞趾繙y定方法的建立

2.1.1 顯色方法及測定波長的選擇:分別精密吸取齊墩果酸對照品溶液和供試品溶液適量至具塞試管中，水浴揮干溶劑，各加入新配置的5%香草醛－冰醋酸0.3mL，高氯酸1.0mL，密塞搖勻，于60℃水浴中加熱 10min，取出立即置冰浴中冷卻，加入冰醋酸5mL，搖勻。以空白試劑為對照，于200～800nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果對照品溶液和供試品溶液在546nm處有最大吸收，故選取546nm為測定波長。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密稱取干燥至恒重的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品4.2mg置于50 mL的量瓶中，加入無水乙醇超聲溶解，稀釋至刻度，搖勻，即質(zhì)量濃度為0.084 mg·ml－1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精確吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 于具塞試管中，水浴揮盡溶劑，按“2.1.1”項(xiàng)下方法，在546nm波長下測定吸光度。以齊墩果酸質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)，吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:y=0.1894x+0.0029，R2=0.9992。結(jié)果表明齊墩果酸在0.0084 ～0.084mg·ml－1濃度范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2 血馬鞭總?cè)铺崛》椒ǖ目疾?/p>

表1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):經(jīng)過單因素考察，選擇乙醇濃度(A)、超聲溫度(B)、提取時(shí)間(C)、超聲功率(D)，4因素作為考察對象，每個(gè)因素3個(gè)水平，以提取物中總?cè)祁惡繛樵u價(jià)指標(biāo)，用L9(34)正交試驗(yàn)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，其因素水平選取見表l，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 超聲提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.2 正交實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果:對血馬鞭總?cè)瞥曁崛〗Y(jié)果的數(shù)據(jù)進(jìn)行直觀分析，可以看出，影響因素順序?yàn)镃＞D＞A＞B，即超聲提取時(shí)間對總?cè)频寐视绊懽畲?，提取溫度對總?cè)频寐视绊懽钚　８鶕?jù)分析結(jié)果得到最佳提取工A2B2C3D1，即乙醇濃度85%，提取溫度為40℃，提取時(shí)間30min，超聲功率250W。

2.3 供試品溶液制備方法:精密稱取各血馬鞭樣品約2g，加10倍85%乙醇，40℃，250W超聲提取30min，過濾，提取3次，合并3次提取液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇15ml，超聲溶解，加活性炭適量，70℃水浴15min脫色，趁熱過濾，加無水乙醇定容至25mL，作為供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度實(shí)驗(yàn):精密吸取齊墩果酸對照品溶液適量于具塞試管中，平行測定5份，按“2.1.1”項(xiàng)下方法顯色，測定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果RSD=0.50%(n=5)。

2.4.2 穩(wěn)定性考察:精密吸取齊墩果酸對照品溶液適量于具塞試管中。按“2.1.1”項(xiàng)下方法顯色，放置 l0，20，30，40，50，60 min后，分別測定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果在對照品在60min 內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.55%(n=6)。

2.4.3 重現(xiàn)性考察:精確稱取同一批血馬鞭樣品5份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下方法顯色，分別測定吸收度，計(jì)算含量。結(jié)果RSD=0.87%(n=5)。

2.4.4 回收率試驗(yàn):精確稱取已知含量的血馬鞭樣品，準(zhǔn)確加入齊墩果酸對照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下方法顯色，平行測定5份。結(jié)果平均加樣回收率為:98.5%，RSD=1.45%(n=5)。

2.5 不同產(chǎn)地血馬鞭總?cè)坪繙y定:精密吸取各供試品溶液50μL于具塞試管中，按“2.1.1”項(xiàng)下方法顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計(jì)算總?cè)频暮?。結(jié)果見表3。

表3 湖南、江西產(chǎn)血馬鞭總?cè)坪?/p>

3 小結(jié)與討論

3.1 本研究采用正交實(shí)驗(yàn)，得到了血馬鞭總?cè)频淖罴烟崛》椒?，該提取方法簡便易行，對血馬鞭研究具有指導(dǎo)意義。

3.2 含量測定結(jié)果表明，湖南、江西產(chǎn)血馬鞭總?cè)坪坑胁町?，其中湖南懷化會同縣栽培的血馬鞭總?cè)坪孔罡撸瑧鸦紖^(qū)林下自然生長的血馬鞭總?cè)坪孔畹?。江西萍鄉(xiāng)栽培的1年生及多年生血馬鞭總?cè)坪肯嘟?，沒有顯著差異。

3.3 本實(shí)驗(yàn)所選樣品，為10月份采收，10月份以前及11月份以后的總?cè)坪坑写M(jìn)一步研究。

3.4 湖南懷化雪峰山野生血馬鞭與湖南懷化郊區(qū)林下自然生長的血馬鞭光照不足，水分相對充足，總?cè)坪枯^低，這可能是總?cè)频母患c光照、水分脅迫有關(guān)。湖南懷化會同栽培的血馬鞭生長在山上，光照非常充足，且比較干旱，總?cè)坪枯^高。說明總?cè)坪颗c光照條件、干旱脅迫有關(guān)。提示血馬鞭的栽培不應(yīng)在林下進(jìn)行，不能作為林下藥材栽培或與其他作物套種。至于水分脅迫、干旱脅迫與光照作用對總?cè)频母患绊懬闆r有待下文研究。

［1］國家藥典委員會.中國藥典2010年版.一部［S］.2000:40.

［2］聶韡，朱培林，黃麗莉，等.廣東紫珠藥材的研究進(jìn)展［J］.中國現(xiàn)代中藥，2011，13(9):37.

［3］周伯庭，李新中，徐平聲，等.廣東紫珠地上部位化學(xué)成分研究(I)［J］.中南藥學(xué)，2004，2(4):238-239.

［4］陳艷華，馮鋒，任冬春，等.廣東紫珠地上部分的化學(xué)成分［J］.中國天然藥物，2008，6(2):120-122.

［5］盛艷樂，趙大球，周春華，等.植物熊果酸和齊墩果酸分析的研究進(jìn)展［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào):2009，25(23):347.