馮 健，胡昌江，張秀環(huán)，羅 旭

(四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司·藥研所 四川 成都 611930)

桑葉配方顆粒由桑科植物桑 Morus alba L.干燥葉制成，為棕黃色至黃棕色的顆粒，氣微，味淡微苦，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤(rùn)燥、清肝明目的功效，用于風(fēng)熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭痛、目赤暈花等癥。為有效控制配方顆粒的質(zhì)量，按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》通知要求，借鑒2010年版《中國(guó)藥典(一部)》桑葉項(xiàng)下的鑒別和含量測(cè)定方法[1]，參考有關(guān)文獻(xiàn)，采用薄層色譜(TLC)法對(duì)桑葉配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)桑葉配方顆粒中的蘆丁進(jìn)行含量測(cè)定?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695－2996型高效液相色譜儀;Empower色譜工作站;BP －211D 型電子天平(Sautoris，德國(guó)，d=0.1 mg/0.01 mg，max=210 g/80 g);KQ3200B型超聲波清洗器(昆山市儀器有限公司)。桑葉配方顆粒(本公司產(chǎn)品);蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為100080－2007);水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

取本品 0.5 g，精密稱定，加甲醇 20 mL，超聲處理 20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，作為供試品溶液。取桑葉對(duì)照藥材 0.5 g，加水 60 mL，煮沸 30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0 mL同法制成對(duì)照藥材溶液。以甲醇的水溶液作為空白溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(5∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下觀察。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 桑葉配方顆粒薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:迪馬公司Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:以甲醇為流動(dòng)相 A，以0.5%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng):358 nm。理論板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。高效液相色譜圖見圖2。

表1 流動(dòng)相梯度比例表

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

取本品約1.0 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入甲醇50 mL，加熱回流30 min，濾過(guò)，濾渣再用甲醇50 mL，同法提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為0.092 4 g/L)，分別進(jìn)樣 2，4，6，8，10 μL，測(cè)定峰面積，以峰面積值(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X，μg)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 Y=1×106X+23 921，r=0.999 6(n=5)。結(jié)果表明，蘆丁進(jìn)樣量在0.184 8～0.924 0 mg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果蘆丁峰面積的 RSD=1.35%。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品5份，分別按樣品的測(cè)定方法在給定的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果蘆丁含量的 RSD為1.50%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取桑葉配方顆粒供試品，置室溫下放置，于不同時(shí)間取混合溶液 10 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.97%，結(jié)果表明蘆丁在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量同一批號(hào)的樣品，精密稱定，然后精密加入一定量蘆丁對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制備溶液，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 蘆丁加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取本品適量，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，按上述蘆丁含量測(cè)定方法操作，測(cè)定蘆丁含量。結(jié)果批號(hào)分別為 091008，100109，090631 的樣品中蘆丁含量分別為 0.055%，0.053%，0.052%。

3 討論

參考2010年版《中國(guó)藥典(一部)》桑葉項(xiàng)下鑒別方法，進(jìn)行了優(yōu)化，比較了桑葉配方顆粒與桑葉對(duì)照藥材的薄層色譜圖，二者相關(guān)性強(qiáng)，說(shuō)明桑葉配方顆粒的生產(chǎn)工藝合適。多批樣品的重復(fù)試驗(yàn)證明，所用方法穩(wěn)定、靈敏、專屬性強(qiáng)，可用于成品的定性檢測(cè)。

采用高效液相色譜法測(cè)定蘆丁的含量，方法重現(xiàn)性較好，且方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，更好地控制了產(chǎn)品的質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:279.

[2]歐陽(yáng)臻，陳 鈞.桑葉的化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，24(6):39 －44.

[3]朱業(yè)靖，周 文.桑葉的化學(xué)成分及其藥理作用研究[J].菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2010，22(4):82 －83.