鄧 梅，黃 潔，單 敏

(陜西省西安市食品藥品檢驗所，陜西 西安 710054)

對氨基水楊酸鈉片為結(jié)核病治療的二線藥物，由間氨基酚合成，合成后若精制不完全會有間氨基酚殘留。間氨基酚既無療效，又有毒性，故需要進(jìn)行檢查。其現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)收載于1995年版《中國藥典(二部)》[1]，但其有關(guān)物質(zhì)測定國內(nèi)尚未見有文獻(xiàn)報道。筆者參考32版美國藥典(USP32)及2010年版《中國藥典(二部)》[2]，建立了測定對氨基水楊酸鈉片中有關(guān)物質(zhì)間氨基酚的高效液相色譜法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Ultimate U－3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司);TU－1901型紫外－可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);Sartorius BSA124S－CW型萬分之一天平;WT－2A型十萬分之一機(jī)械天平(北京光學(xué)儀器廠)。對氨基水楊酸鈉片(重慶迪康長江藥業(yè)有限公司，批號為110301，110302，110303);間氨基酚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為101160－201160，含量為99.8%);甲醇(色譜純，Merck 公司)，水為高純水(自制)，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Phenomenex Luna C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－10%四丁基氫氧化銨溶液－0.05 mol/L磷酸氫二鈉－0.05 mol/L 磷酸二氫鈉(200∶19∶400 ∶400);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:270 nm;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取間氨基酚對照品適量，用流動相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為73.00 μg/mL的對照品貯備液。取本品，除去糖衣，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于對氨基水楊酸鈉35 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相使對氨基水楊酸鈉溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

檢測限確定:取間氨基酚的對照品貯備液，逐級稀釋進(jìn)樣，當(dāng)信噪比為3時，求得檢測限為0.012 μg/mL。結(jié)果見圖1。

圖1 間氨基酚的檢測限

線性關(guān)系考察:分別精密量取對照品貯備液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積 Y對質(zhì)量濃度 X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=25 291.23 X+181.5，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，間氨基酚質(zhì)量濃度在 0.365～1.825 μg/mL之間與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液，在擬訂的色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD為0.11%(n=5)，表明方法精密度良好。

破壞試驗:取本品1.0 g，置100 mL量瓶中，加流動相適量溶解并稀釋到刻度，搖勻，濾過。分別精密吸取3份續(xù)濾液各10 mL，置100 mL量瓶中，分別加1 mol/L的鹽酸溶液、1 mol/L的氫氧化鈉溶液、10%的雙氧水10 mL，室溫、避光放置1 h，再加流動相稀釋到刻度，分別作為酸、堿及氧化降解樣品溶液。再取本品2份各0.5 g，一份于(4 500±500)lx日光燈下放置6 h，另一份于105℃干燥6 h，各取0.1 g，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，分別作為光降解及熱降解樣品溶液。對以上5份供試品溶液分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖至主成分保留時間的4倍。結(jié)果降解產(chǎn)物峰與主峰分離度均符合要求，保留時間的3.5倍后再無雜質(zhì)峰出現(xiàn)。綜合考慮實際情況及原料標(biāo)準(zhǔn)的要求，故色譜圖應(yīng)記錄至主峰保留時間的3.5倍。破壞試驗結(jié)果見圖2。可見，對氨基水楊酸鈉在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、光照、氧化環(huán)境下均不穩(wěn)定，在高溫情況下比較穩(wěn)定。

圖2 對氨基水楊酸鈉破壞試驗色譜圖

穩(wěn)定性試驗:取間氨基酚對照品溶液，在擬訂的色譜條件下，分別于 0，2，4，8，12 h 進(jìn)樣。結(jié)果間氨基酚的 RSD 為 0.23%(n=5)，表明樣品至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:稱取去包衣樣品(批號為110302)細(xì)粉約0.05 g，共5份，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，測定有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果見表1。

表1 有關(guān)物質(zhì)重復(fù)性試驗結(jié)果

加樣回收試驗:分別精密稱取去包衣樣品(批號:110302)0.05 g，各3份，分別置50 mL容量瓶中，精密加入間氨基酚對照品貯備液(73.00 μg/mL)0.8，1.0，1.2 mL，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果間氨基酚平均回收率為98.7%，RSD為1.4% 。

2.4 樣品有關(guān)物質(zhì)檢測

稱取樣品0.05 g，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，按擬訂的色譜條件測定。結(jié)果見表2。根據(jù)有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果，參考2010年版《中國藥典(二部)》原料藥有關(guān)物質(zhì)的限度，確定本品已知雜質(zhì)間氨基酚量不得過對氨基水楊酸鈉標(biāo)示量的0.25%，其他雜質(zhì)量不得過0.2%，總雜質(zhì)量不得過1.0%，并將有關(guān)物質(zhì)檢查項收錄到標(biāo)準(zhǔn)中。3批樣品測定結(jié)果均符合規(guī)定。

表2 樣品有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果

3 討論

本試驗中，將間氨基酚配制成一定質(zhì)量濃度，以流動相為空白，在200～300 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在280 nm波長處有最大吸收，參考文獻(xiàn)[2]方法，選擇檢測波長為280 nm。此色譜條件下，間氨基酚及對氨基水楊酸鈉色譜峰分離度為7.5，遠(yuǎn)大于 1.5。

分別采用 Dionex Acclaim120－C18柱、Phenomenex Luna C18柱和Agilent Extend－C18柱3種色譜柱，結(jié)果主峰與各雜質(zhì)分離度均大于1.5，符合要求，主峰理論板數(shù)均大于5 000。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1995:3 257.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1 150，1 158.