田 楓，康愛君，鄭振輝，周淑佩

(北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，北京 100191)

疾病小鼠模型的引進及其繁育保種實踐

田 楓，康愛君，鄭振輝，周淑佩

(北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，北京 100191)

引進疾病小鼠模型是解決國內(nèi)迅速增長的科研需求的有效途徑之一。本文結(jié)合工作實際，介紹尋求目標疾病小鼠模型的途徑、引進疾病小鼠模型的程序及注意事項、小鼠模型繁育保種的一些體會。

疾病小鼠模型;引進;繁育

國際上已有幾千種疾病小鼠模型，特別是大量的基因修飾小鼠模型可供科研工作者使用。由于技術(shù)等方面的原因，中國現(xiàn)有的動物模型遠遠不能滿足迅速增長的科研需求，從國外引進動物模型是解決科研需求的有效途徑之一。

北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部自1997年先后從美國、日本、瑞士、加拿大、韓國等國家引進載脂蛋白E基因敲除動脈粥樣硬化小鼠、金屬硫蛋白基因敲除小鼠、乙型肝炎轉(zhuǎn)基因小鼠等疾病小鼠模型80余個品系，很大程度上滿足了校內(nèi)外的科研工作需求，同時積累了較為豐富的疾病小鼠模型引進及繁育保種經(jīng)驗。本文從如何尋求目標疾病小鼠模型、引進小鼠模型的程序及關(guān)鍵問題和小鼠模型的繁育保種技術(shù)3個方面進行了探討，以期為國內(nèi)其他單位的工作提供參考。

1 尋求目標疾病小鼠模型的途徑

研究者尋求小鼠模型的最主要的途徑是通過實驗動物相關(guān)網(wǎng)站，如美國杰克遜實驗室(The Jackson Laboratory)網(wǎng)站 http://www.jax.org;美國查理士利華實驗室(Charles River Laboratory)網(wǎng)站http://www.criver.com 等。

The Jackson Laboratory建立于1929年，是一個非贏利性的獨立研究機構(gòu)。作為全球小鼠模型資源中心，3，000多個品系由The Jackson Laboratory保種并向全世界科研機構(gòu)提供。通過 http://www.jax.org尋找所需要的模型小鼠，可通過以下步驟完成。

Charles River Laboratory是世界上最大的實驗大、小鼠商品化生產(chǎn)、銷售公司?？偛吭O(shè)在美國，歐洲、日本等地都有其子公司。1999年在北京設(shè)立代理公司，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司生產(chǎn)、代理該公司產(chǎn)品。有些 The Jackson Laboratory沒有的品系在該公司網(wǎng)站的Research Models and Services Mice(研究模型及小鼠服務(wù))欄目可以查到。

其它實驗動物模型相關(guān)網(wǎng)站也可供參考，如http://www.muridae.com/wmc/http://www.mattek.com/等。

除此之外，通過與國外研究機構(gòu)合作的方式亦可作為疾病小鼠模型引進的途徑。

2 我國引進疾病小鼠模型的程序及關(guān)鍵問題

進口實驗動物，進境檢疫要求包括檢疫審批、境外檢疫、進口報檢、口岸查驗、隔離檢疫、實驗室檢測、日常監(jiān)管、風險預警、應急處理等主要環(huán)節(jié)［1］。以從美國引進小鼠到北京為例，說明引進的一般程序。

2.1 引進程序和周期

2.1.1 隔離場檢查:引進小鼠需要在有隔離環(huán)境設(shè)施的隔離場地進行檢疫。填寫隔離場申請表和引進實驗動物用途說明(包括來源、用途、防疫措施等)，預約北京市出入境檢驗檢疫局(簡稱北京局)的檢疫員檢查隔離場地，場地合格后上交表格。

2.1.2 檢疫審批:用電子鑰匙在網(wǎng)上向北京局提交申請，該局受理后將材料轉(zhuǎn)給國家出入境檢驗檢疫局(簡稱國家局)，國家局審批需20個工作日。如通過審批，將《進境動植物檢疫許可證》寄回。(有進出口經(jīng)營權(quán)的單位可申請電子鑰匙，如果沒有進出口經(jīng)營權(quán)的單位一般沒必要申請電子鑰匙，可以委托代理公司完成引進工作。)

2.1.3 出口國家需提供的文件:提供給中方合同、形式發(fā)票等必要的報關(guān)文件，關(guān)鍵文件是美國農(nóng)業(yè)部的動物衛(wèi)生證書(animal health certificate)，而且應與我國《進境動植物檢疫許可證》上規(guī)定的檢疫條件相符合。在運輸前需提供運單。

2.1.4 進口報檢:動物到達北京前1周至北京局辦理報檢手續(xù)。

2.1.5 口岸查驗:動物到達當日與檢疫員共同去機場進行現(xiàn)場檢疫。經(jīng)檢疫合格，完成通關(guān)手續(xù)，可將引進的小鼠運抵隔離場。

2.1.6 隔離檢疫:動物于隔離場隔離30 d。

2.1.7 放行:隔離檢疫30 d后到北京局辦理放行手續(xù)，動物方可進行科研應用。

2.2 需要注意的關(guān)鍵問題

2.2.1 通常科研單位不具備進出口權(quán)，所以委托代理公司完成引進工作是較為理想的選擇。如北京維通利華實驗動物技術(shù)公司開展代理引進動物的業(yè)務(wù)，該公司已幫助多家科研單位完成基因修飾小鼠的引進。

2.2.2 引進小鼠不建議在夏季或冬季進行，由于高溫或低溫對動物的健康極其不利，也不符合行業(yè)倡導的動物福利原則［2］。

2.2.3 從國外引種的小鼠較為珍貴，數(shù)量較少，引種數(shù)量至少應在2對以上，小鼠引進到隔離場所時的周齡最好在6～20周齡，因為此階段小鼠健康狀況相對較好，由于在隔離檢疫期內(nèi)的小鼠是不允許進行繁殖的，當一個月隔離檢疫期滿后，小鼠正處于繁殖旺盛期。如果引進的小鼠超過8月齡，且從未進行過繁殖，雄性尚有繁殖能力，但9月齡的雌性小鼠的繁殖能力很差，即使妊娠產(chǎn)子，也無能力哺乳，可能產(chǎn)生斷種的后果［3］。

2.2.4 小鼠到達隔離場的驗收環(huán)節(jié)要特別注意。小鼠到達檢疫隔離場后，首先檢查包裝是否破損，如果有破損說明可能存在野蠻裝卸，動物可能受到過驚嚇;在超凈工作臺內(nèi)打開包裝后，如果看到墊料、飼料都集中到一側(cè)，說明動物在運輸過程中肯定受到過驚嚇，可能會對該批動物的保種造成不利影響。其次，驗收時還要記錄引進日期，引種來源、微生物控制等級、品種品系的名稱、出生日期、性別、數(shù)量、是否有耳號及健康狀況等。

3 疾病小鼠模型的飼養(yǎng)及繁育

3.1 疾病小鼠模型的飼養(yǎng)條件

疾病小鼠模型可能抗病能力相對較低、體質(zhì)較差，應在屏障環(huán)境中飼育，而保種群要通過剖宮產(chǎn)取得，確保保種用動物達到 SPF(specific pathogen free，無特定病原體)級標準。

飼料需供給全價營養(yǎng)飼料。對于某些特殊動物模型，應使用特殊飼料。如BALB/c遺傳背景的模型小鼠喜食高蛋白飼料，可加喂高壓滅菌雞蛋，但量要適中。如飼育載脂蛋白E基因敲除動脈粥樣硬化小鼠時，常給予高脂飼料，但飼料較酥，小鼠可能會得不到及時磨牙，牙會長長，可在鼠盒中加入一消毒木塊，防止小鼠因牙齒過長吃不到食物的現(xiàn)象。苯丙酮尿癥小鼠喜含脂類飼料，在飼喂過程中每周加5粒滅菌瓜子，對動物生長有幫助［4］。

3.2 疾病小鼠模型的繁育保種

疾病小鼠模型在繁育保種過程中，可能會出現(xiàn)癲癇、毛發(fā)脫落、皮膚松弛、反應遲鈍、早衰、白內(nèi)障、視網(wǎng)膜變性、潰瘍、皮疹、脫肛等眾多癥狀。而這些癥狀往往都是品系本身的固有特征。飼養(yǎng)管理人員要注意觀察不應把具有品系特征的早發(fā)癥狀視為異常而淘汰。

疾病小鼠模型在選種、育種時要特別注意不能一味地選擇繁殖能力強、體格健壯的個體，這種個體往往丟掉了原來特定的基因，或者可能是轉(zhuǎn)進的基因丟失，或是敲除的基因復位，或是突變基因發(fā)生回復突變。因此在繁殖過程中，常選擇2～4胎作為選種、育種的對象，同時要考慮在對其繁殖力無影響或影響較小的情況下，盡可能選擇胎次多的仔鼠育種。

對于6～8月齡年齡較大的模型鼠若要進行繁殖，應抓緊在繁殖末期的繁殖機遇，尋找同期提前1～2 d產(chǎn)仔且母性強的品系作為代乳母，最好代乳母的顏色與模型鼠的顏色不一致，并需在代乳母預產(chǎn)期前1周轉(zhuǎn)運到與該模型鼠生長環(huán)境一致的飼養(yǎng)室，一旦錯過繁殖末期則無補救措施。

疾病小鼠模型的母性較弱，易驚嚇，常會吃掉幾乎所有頭胎仔鼠。另外，因哺乳能力較差，出生后1周內(nèi)的仔鼠的死亡率較高。因此應將妊娠后期的孕鼠換窩后，加足水，添足料，1周內(nèi)不再驚動它，則能有效提高哺乳仔鼠的成活率［5］。

綜上所述，從國外引進疾病小鼠模型對拓寬國內(nèi)科研工作思路很有必要，同時在飼育模型小鼠的過程中注意觀察各品種品系特征，應盡可能確保維持疾病小鼠模型遺傳穩(wěn)定，保證種群穩(wěn)定繁殖，為科學研究奠定良好基礎(chǔ)。

［1］林祥梅，李志輝.實驗動物與出入境檢驗檢疫［J］.中國比較醫(yī)學雜志，2011，21(10，11):34－38.

［2］孫德明，李根平，陳振文，等.實驗動物從業(yè)人員上崗培訓教材［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2011.76－80.

［3］鄭振輝，周淑佩，彭雙清.實用醫(yī)學實驗動物學［M］.北京:北京大學醫(yī)學出版社，2008.370.

［4］周淑佩，鄭振輝，賈光.人類疾病動物模型管理要點［J］.中華醫(yī)學科研管理雜志，2012，25(2):129－130，封四.

［5］鄭振輝，周淑佩，彭雙清.實用醫(yī)學實驗動物學［M］.北京:北京大學醫(yī)學出版社，2008.371.

Introduction of Disease Mouse Models and its Breeding Technology

TIAN Feng，KANG Ai-jun，ZHENG Zhen-hui，ZHOU Shu-pei
(Department of Laboratory Animal Science，Health Science Center，Peking University，Beijing，100191，China)

As an efficient way，introduction of disease mouse models could provide support for scientific research in China.The practices about conservation and breeding of disease mouse models were reviewed in the article.It will be useful to guarantee the quality of imported disease mouse models.

Disease mouse model;Import introduction;Breeding

R332

A

1671-7856(2012)09-0084-03

10.3969.j.issn.1671.7856.2012.009.019

2012-08-25

國家自然科學基金項目(31000609)。

田楓(1973－)女，副主任技師，博士，主要從事實驗動物研究。

周淑佩(1963－)女，副研究員，學士，主要從事實驗動物管理及研究。