馬可心 羅輝

乳腺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害女性的身心健康。國外研究報道，許多實體瘤中血管生成都比較活躍，并且血管生成的活躍程度與其預后相關[1]，而乳腺癌也屬于實體瘤。VEGF-C可通過促進細胞增殖，抑制細胞凋亡及促進腫瘤血管生長等多種機制，參與調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程[2]。本研究通過術前觀察乳腺癌彩色多普勒血流表現(xiàn)，術后采用免疫組織化學技術檢測組織VEGF-C的表達，探討二者的相關性。

1 資料與方法

1.1 病例來源 病例來源于吉林婦產(chǎn)醫(yī)院2009年1月～2012年1月住院接受乳腺癌改良根治術或者保乳術的患者。

1.2 一般資料 50例乳腺癌患者年齡30～75歲，平均年齡(53.41±7.19)歲，均為女性單側(cè)患病，且術前均未做過任何化療或放療。組織學分級：1級14例、2級20例、3級16例。TNM分期：Ⅰ期16例、Ⅱ期20例、Ⅲ期14例。乳腺癌組織學類型：浸潤性導管癌35例、浸潤性小葉癌6例、粘液腺癌4例、導管內(nèi)癌3例、乳頭濕疹樣癌1例和管內(nèi)乳頭狀癌1例。腫塊直徑1.0～6.2cm。

1.3 血流檢測方法

儀器：日立HV7000彩色超聲診斷儀，探頭頻率為5～10MHz。檢測方法：受檢者取仰臥位，雙臂上舉，將雙側(cè)乳房充分暴露，然后用耦合劑涂抹探頭，采用直接掃查法。首先掃查乳房外上象限，探頭長軸要與乳腺導管走向一致，然后以乳頭為中心順時針掃查；再將探頭長軸與乳腺導管垂直，由乳頭開始向周邊掃查。常規(guī)探測雙側(cè)腋窩和胸骨旁淋巴結(jié)情況。彩色多普勒血流信號分級判定按Adler分級法[3]：腫塊內(nèi)未發(fā)現(xiàn)血流信號為0級；少量血流，可見1～2個點狀或短棒狀血流為1級；中量血流，可見3～4個點狀血管或一個較長的血管，其長度可接近或超過腫塊半徑為2級；多量血流，可見5個以上點狀血管或2個較長的血管為3級。

1.4 VEGF-C檢測方法

試劑：兔抗人VEGF-C抗體試劑盒均購于上海麗臣生物科技有限公司，SP檢測試劑盒和DAB顯色劑均購于福建邁新公司。實驗方法：所有乳腺組織石蠟塊均制成4μm厚組織切片，免疫組化染色采用SP法，操作步驟按照兔抗人VEGF-C抗體試劑盒說明書進行。在顯微鏡高倍鏡(400X)下對染色后的標本代表性的區(qū)域進行拍攝，每張標本拍攝五張照片，使用Image-Pro Plus 6.0軟件分別測量胞漿黃染區(qū)域累積光密度和面積，計算出平均積分光密度(OD)值。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包進行分析，多樣本均數(shù)比較采用方差分析檢驗，以P≤0.05時為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

本研究結(jié)果顯示，隨著乳腺癌組織中血流信號級別越高，其VEGF-C的表達越強，差異存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 乳腺癌組織中血流信號分級與VEGF-C表達OD值的關系

3 討論

乳腺癌是典型的血管依賴性腫瘤，其新生血管的存在又是彩色多普勒血流顯像的病理基礎，在超聲圖像上可宏觀顯示，可以準確判斷、評價其血管生長分布、血流數(shù)量、性質(zhì)、血流動力學參數(shù)等信息[4]。近年來，隨著科學技術的發(fā)展，使得彩色多普勒超聲對腫塊內(nèi)血流檢測的敏感性顯著提高，加上惡性腫瘤的生物特性(生長迅速、血供豐富及血管走行紊亂等)，其血流很易被檢出。本研究發(fā)現(xiàn)84.00%的患者，腫塊中顯示血流信號。VEGF-C與VEGFR-3結(jié)合，而VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信號軸是調(diào)控腫瘤淋巴管生成的主要信號通路，其通過蛋白激酶C依賴的促分裂原活化蛋白激酶和絲?蘇氨酸激酶信號傳導通路，從而促進淋巴內(nèi)皮細胞的存活與增殖[5]；VEGF-C還可誘導內(nèi)皮細胞分泌多種組織蛋白酶及組織因子，促進新生血管生成，而新生的血管又可作用于癌細胞，導致更多數(shù)量的癌細胞增殖，結(jié)果導致腫瘤加速生長，血管數(shù)量逐漸增加，形成惡性循環(huán)[6]。本研究結(jié)果顯示：不同血流分級的乳腺癌組織中VEGF-C表達不同，血流豐富的2級及3級乳腺癌組織中VEGF-C表達的OD值顯著高于0級及1級。結(jié)果表明隨著血流分級的增加，VEGF-C表達增強，VEGF-C過表達是促使腫瘤性血管生長的重要因子之一，同時，血流分級一定程度上反應了VEGF-C表達程度，側(cè)面反映了腫瘤的生物學特性。張晨瑤等[7]人也報道，乳腺癌術后復發(fā)患者術前血清VEGF含量明顯高于未轉(zhuǎn)移者其手術前血清VEGF含量，血清VEGF高含量預示著乳腺癌的高侵襲轉(zhuǎn)移能力。近年來，以腫瘤新生血管為靶點進行治療的研究十分熾熱，如應用抗VEGF及其受體的單克隆抗體，可以阻斷VEGF誘導的內(nèi)皮細胞信號傳導，抑制腫瘤血管的形成[8]。通過本研究結(jié)果，測定乳腺癌的彩色多普勒血流，可以為該治療方法提供重要的信息，如VEGF-C表達程度，是否適合采用VEGF受體抑制劑治療等。

綜上所述，彩色多普勒超聲可以較為準確地顯示乳腺癌組織的血供程度，結(jié)合VEGF-C的表達，有助于乳腺癌的臨床診斷、治療及預后判斷，具有重要的臨床意義。

[1]Duff SE,Jeziorska M,Kumar S,et al.Lymphatic vessel density,microvessel density and lymphangiogenic growth fator expression in colorectal cancer[J].Colorectal Dis,2007,12(9):793-800.

[2]張銀龍,游濤,王向昱,等.COX-2和VEGF-C與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關性研究[J].中國熱帶醫(yī)學,2007,7(8):1296-1297.

[3]Adler DD,Carson PL,Rubin JM,et al.Doppler ultrasound color flow imaging in the study of breast cancer: Preliminary findings[J].Ultrasound Med Biol,1990,16(6):553-559.

[4]王偉,黃偉良,王曉,等.乳腺癌彩色多普勒血流表現(xiàn)與VEGF表達的相關性[J].上海醫(yī)學影像,2008,17(2):153-154.

[5]Bamba H,Ota S,Kato A,et al.Prostaglandins,up-regulate vascular endotheliar growth factor production distict pathway in differentiated cells[J].Bio Chem Res,Commun,2000,273(2):487-491.

[6]李春海,李克勤.腫瘤微血管生成的機制與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[J].中華腫瘤雜志,2000,22(3):181-183.

[7]張晨瑤,王明娣,高昀.乳腺癌外周血管內(nèi)皮生長因子的表達及其意義[J].當代醫(yī)學,2011,17(22):92.

[8]秦雙,來俊英.COX-2、VEGF在乳腺癌組織中的表達及臨床意義[J].醫(yī)學信息手術學分冊,2007,20(8):675-677.