黃迪海，劉 霞，張?jiān)佥x，徐秀榮，張 華，楊 波，曹利丹，秦卓明，3

(1．山東省健牧生物藥業(yè)有限公司，濟(jì)南 250100;2．濟(jì)南市動(dòng)物生物藥品工程技術(shù)研究中心，濟(jì)南 250100;3．山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，濟(jì)南 250100)

乳酸環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin Lactate)為喹諾酮類(lèi)抗菌藥，具有高效、廣譜的抗菌活性，對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、克雷伯氏桿菌、巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、金黃色葡萄球菌、支原體和衣原體等均有良好作用［1－3］，且對(duì)大多數(shù)菌株的 MIC均低于1μg/mL，對(duì)敏感菌具有明顯的抗菌后效應(yīng)(PAE)［4］。乳酸環(huán)丙沙星注射液在畜牧養(yǎng)殖中用于治療畜禽細(xì)菌性疾病和支原體感染［5］，但存在藥物有效濃度維持時(shí)間短、使用次數(shù)多等問(wèn)題。為克服此難題，我們利用骨架緩釋技術(shù)成功研發(fā)出緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液，在實(shí)驗(yàn)室獲得了較好的試驗(yàn)效果?，F(xiàn)將該產(chǎn)品對(duì)16株畜禽常見(jiàn)致病菌的體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下:

1 材料

1．1 試驗(yàn)藥品 緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)緩釋環(huán)丙沙星)中試產(chǎn)品，規(guī)格為10 mL:0．4 g，批號(hào)分別為20111101、20111102和20111103;乳酸環(huán)丙沙星注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)環(huán)丙沙星)，規(guī)格為10 mL:0．2 g，批 號(hào) 分 別 為 20111101、20111102 和20111103;恩諾沙星注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)恩諾沙星)，規(guī)格為10 mL:0．25 g，批號(hào)分別為 20111101、20111102和20111103。以上產(chǎn)品均由山東省健牧生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1．2 試驗(yàn)菌株 金黃色葡萄球菌等16株菌株(包括標(biāo)準(zhǔn)菌株及流行菌株)。其中，大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、巴氏桿菌、綠膿桿菌由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所提供，豬胸膜肺炎放線桿菌、雞鼻氣管鳥(niǎo)桿菌由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)提供，金黃色葡萄球菌由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供。

1．3 試驗(yàn)菌液 標(biāo)準(zhǔn)菌株活化后，接種于Mueller－Hinton(MH)肉湯，與37℃下培養(yǎng)6～12 h，再用MH肉湯稀釋至2×105CFU/mL的濃度，備用。

1．4 培養(yǎng)基 Mueller－Hinton(MH)肉湯培養(yǎng)基。

2 方法

2．1 試驗(yàn)藥物原液 取上述1．1所述各批次三種試驗(yàn)藥品，分別稀釋至藥物濃度1280μg/mL，并用孔徑為0．22μm的細(xì)菌濾器過(guò)濾。

2．2 采用常量肉湯稀釋法 將三種藥物9批原液分別用MH培養(yǎng)基稀釋成11個(gè)濃度(128、64、32、16、8、4、2、1、0．5、0．25、0．125 μg/mL)，各組均設(shè)不加藥物的空白對(duì)照。

2．3 加入藥物的培養(yǎng)基 放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中24 h，觀察無(wú)污染方可供試驗(yàn)應(yīng)用。

2．4 將含不同藥量的1 mL培養(yǎng)基加入已培養(yǎng)24 h各相應(yīng)菌液1 mL，加入菌液后各管與空白對(duì)照管的透明度無(wú)明顯差異，各組均設(shè)不加藥物的細(xì)菌接種對(duì)照管。

2．5 試管在室溫條件下放置(20℃)2 h，移入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)30 h，分別在24 h和30 h觀察、記錄試驗(yàn)結(jié)果(觀察藥物管、空白管、接種管)。

3 結(jié)果

三種不同注射液體外24 h和30 h對(duì)16株菌株的抑菌效果詳見(jiàn)表1。

表1 緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液的體外抗菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示:緩釋環(huán)丙沙星和環(huán)丙沙星的MIC均小于恩諾沙星。緩釋環(huán)丙沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星注射液的MIC范圍在24h的MIC范圍分別為0．125 ～0．5 μg/mL、0．167 ～0．5 μg/mL 和 0．25 ～4．0 μg/mL;在30h分別為 0．125 ～0．667 μg/mL、0．25 ～1．0 μg/mL 和 0．416 ～8．0 μg/mL。比較而言，緩釋環(huán)丙沙星在24h對(duì)金黃色葡萄球菌等12菌株的MIC均略小于環(huán)丙沙星，二者僅在大腸桿菌O78、雞白痢沙門(mén)氏菌C79－13、沙門(mén)氏菌和鴨巴氏桿菌4株菌株的MIC一致。而在30h時(shí)，二者僅在沙門(mén)氏菌的MIC一致，其余，緩釋環(huán)丙沙星的MIC均低于環(huán)丙沙星和恩諾沙星。通過(guò)上述抗菌活性比較證實(shí):緩釋環(huán)丙沙星維持時(shí)間長(zhǎng)，抑菌效果好。三者的抑菌是:緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液≥乳酸環(huán)丙沙星注射液≥恩諾沙星注射液。

4 討論

國(guó)內(nèi)有利用環(huán)丙沙星注射液進(jìn)行奶牛乳腺炎的治療報(bào)道［6］，但缺乏對(duì)緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液的研究。本文通過(guò)對(duì)緩釋環(huán)丙沙星體外抗菌活性的試驗(yàn)證實(shí)，該藥對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌均有較好的體外抑菌效果和較長(zhǎng)的藥物維持時(shí)間，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。乳酸環(huán)丙沙星對(duì)綠膿桿菌的抑菌效果(MIC=0．25μg/mL)明顯優(yōu)于恩諾沙星(MIC=4．0μg/mL)，提示本品在防治畜禽及毛皮動(dòng)物綠膿桿菌病可作為首選藥物使用。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，藥物與菌液混合培養(yǎng)時(shí)，乳酸環(huán)丙沙星緩釋注射液抗菌活性明顯優(yōu)于其普通注射液，并且30h的效果比24h更加明顯。原因主要是緩釋制劑的藥物分子緩慢釋放，藥效更加持久。

乳酸環(huán)丙沙星因其良好的療效［7－8］，其粉劑和普通注射液在我國(guó)畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中廣為應(yīng)用。但是，頻繁的用藥，較短的藥效期，加大了人們的工作量。為此，我們研制了緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液，目的是想通過(guò)延長(zhǎng)藥物的有效血藥濃度維持時(shí)間，進(jìn)而減少每日用藥次數(shù)，降低勞動(dòng)強(qiáng)度，并降低藥物的毒副作用。試驗(yàn)證實(shí)緩釋乳酸環(huán)丙沙星注射液比乳酸環(huán)丙沙星擁有用藥次數(shù)少、藥效維持期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。該藥品的研制成功將有助于畜禽常見(jiàn)細(xì)菌性疾病的防治，并大大降低勞動(dòng)強(qiáng)度。

［1］ 郭建華，李天真，苗 剛，等．乳酸環(huán)丙沙星等對(duì)金黃色葡萄球菌的體外抑菌試驗(yàn)［J］．畜禽業(yè)，2011，6:59－60．

［2］ 馬建麗，王世嶺，周 亮，等．氟羅沙星葡萄糖注射液與乳酸環(huán)丙沙星注射液隨機(jī)對(duì)照治療細(xì)菌性感染69例［J］．解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000，16(6):335－338．

［3］ 陳紹?。樗岘h(huán)丙沙星與其它抗菌藥聯(lián)用體外抗菌效果［J］．當(dāng)代畜牧，2009，2:50－51．

［4］ 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，中國(guó)獸藥典獸藥使用指南(化學(xué)藥品卷)2010年版［S］．

［5］ 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2003年版［S］．

［6］ 田文儒，劉大海，張雪清．乳酸環(huán)丙沙星治療奶牛乳房炎的效果觀察［J］．黑龍江畜牧獸醫(yī)，1995，10:28－30．

［7］ 金國(guó)星．復(fù)方乳酸環(huán)丙沙星治療仔豬黃白痢試驗(yàn)［D］．杭州:浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，2009．

［8］ 李孝文，董 偉，陳小軍，等．復(fù)方環(huán)丙沙星乳劑的研制及體外抑菌試驗(yàn)［J］．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2011，(10):79－80．