崔佰吉，張秀榮，徐曉偉 (.延邊大學(xué)，吉林延吉 33000;.吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林吉林 303)

延燈滴丸是由燈盞花、延胡索、黃芪提取物，加入適當(dāng)比例的聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000制成的滴丸，具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、散寒解表、祛風(fēng)除濕等功效，主要用于治療冠心病、心絞痛等缺血性心血管疾病。中藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜，在提取過(guò)程中處方中有效成分往往會(huì)發(fā)生變化。本實(shí)驗(yàn)選取主要效標(biāo)物質(zhì)之一燈盞乙素的提取量作為指標(biāo)，考察其不同配伍條件下的變化規(guī)律。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20AT高效液相色譜(HPLC)儀，二極管陣列檢測(cè)器(DAD);CAP225D電子天平(Sartorius);HWZ-2B微波真空干燥器(廣州興興微波能設(shè)備有限公司)。

乙腈、甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑為分析純。燈盞乙素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為:1108422200605。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent TC-2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH 3.0)，梯度洗脫(0→15→25→45→55→75 min，10%→10%→22%→22%→50%→50%乙腈);流速:0.8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):335 nm;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:20 μL［1］。

2.2 供試品溶液制備

按處方量精密量取各藥材置于500 mL原底燒瓶中，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取3 h，提取3次，提取液合并、濃縮、干燥，得提取物干膏粉末。精密稱取各處方項(xiàng)下提取物粉末0.2 g，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入25 mL甲醇，稱定重量，超聲(250 W，40 kHz)處理30 min，放至室溫，稱定重量，并用甲醇補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.3 處方中各藥材共煎相互影響實(shí)驗(yàn)

延燈滴丸原處方為:燈盞細(xì)辛-黃芪-延胡索(12∶10∶9)，分別采用不同的實(shí)驗(yàn)方案(見(jiàn)表1～3)，以每克燈盞花所提取出的燈盞乙素的量(mg/g)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，觀察不同提取方案下燈盞乙素的含量變化規(guī)律。

各實(shí)驗(yàn)方案出膏率及燈盞乙素含量分別見(jiàn)表1～3，方中藥材用量放大和縮小不同倍數(shù)，其燈盞乙素的含量變化情況見(jiàn)圖1，由各個(gè)實(shí)驗(yàn)方案數(shù)據(jù)分析可知，固定處方中3種藥材的任何一種，配比倍數(shù)對(duì)燈盞乙素的提取量都有一定的影響，但沒(méi)有呈現(xiàn)明顯的有規(guī)律變化。

表1 燈盞花劑量固定時(shí)燈盞乙素的含量變化

表2 黃芪劑量固定時(shí)燈盞乙素的含量變化

表3 延胡索劑量固定時(shí)燈盞乙素的含量變化

2.4 混料均勻設(shè)計(jì)

為考察方中各組分變化對(duì)燈盞乙素含量變化的影響，采用混料均勻設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，混料均勻設(shè)計(jì)方案、藥材組合及燈盞乙素含量見(jiàn)表4［2］。

數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)DPS9.50數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行逐步回歸，得回歸方程為:Y=7.171 211 58+2.670 314 346 9X1+2.889 486 924 9X3，其偏相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表5。由回歸方程可知，燈盞乙素提取量的變化與燈盞花和黃芪的量成正相關(guān)，且燈盞花影響較黃芪大，這與燈盞花本身用量增加的結(jié)果是相關(guān)的，但二者顯著性均不明顯;而燈盞乙素提取量的變化與延胡索沒(méi)有表現(xiàn)出相關(guān)性。

表4 混料均勻設(shè)計(jì)的方案及藥材配比組合(n=3)

表5 各項(xiàng)系數(shù)進(jìn)行偏相關(guān)分析結(jié)果

3 討論

黃芪藥材固定時(shí)，主要表現(xiàn)延胡索藥材對(duì)燈盞乙素提取量的影響，結(jié)果表明原處方配比情況下燈盞乙素提取量最大，而在0.75倍時(shí)提取量達(dá)到最小。延胡索藥材固定時(shí)，主要表現(xiàn)黃芪藥材對(duì)燈盞乙素的提取量的影響，結(jié)果表明黃芪藥材的變化對(duì)燈盞乙素提取量的影響比較緩慢，在原處方時(shí)提取量最小。而固定燈盞花藥材時(shí)，延胡索和黃芪藥材對(duì)燈盞乙素提取量的綜合影響較大，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)可控的規(guī)律性。鑒于以上的研究結(jié)果，對(duì)于原處方的評(píng)價(jià)著重放在藥理實(shí)驗(yàn)研究上，根據(jù)各個(gè)處方與藥理效應(yīng)的相關(guān)性來(lái)判定處方的配比情況。

研究中發(fā)現(xiàn)本方的出膏率較高，相對(duì)于一般的中藥材提取出膏率有很大的提高，其原因之一是提取方法采用3 h提取3次的方法，使提取盡可能進(jìn)行的完全;另一個(gè)原因考慮是黃芪本身含有大量多糖，提取溶劑為60%乙醇溶液，提取過(guò)程中有大量的多糖被提取。經(jīng)過(guò)初步藥理研究已經(jīng)證明，本方中燈盞乙素的含量與藥理效應(yīng)有明顯的正相關(guān)性，但是方中黃芪量的變化與燈盞乙素量變化的規(guī)律與藥理作用上有沒(méi)有存在差異，還是目前正在進(jìn)行的研究。

［1］崔佰吉，王麗娜，李亞薇，等.HPLC法測(cè)定延燈滴丸中有效成分含量的方法學(xué)研究［J］.藥物分析雜志，2009，29(10):1672-1676.

［2］馮開(kāi)泰，馬長(zhǎng)興.正交與均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)［M］.北京:科學(xué)出版社，2001:144-152.