高效液相色譜法測定鹽酸川芎嗪注射液的含量

江蘇省泰州市食品藥品檢驗所（225300）帥玲

鹽酸川芎嗪注射液（Ligustrazine Hydrochloride Injection）臨床用于閉塞性腦血管疾病?，F(xiàn)行大多采用紫外吸收系數(shù)法測定其含量，專屬性差。本文采用高效液相色譜法測定含量，操作簡便，專屬性強。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters2996二極管陣列檢測器；島津UV－2550紫外分光光度計；鹽酸川芎嗪對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110817-200305）；鹽酸川芎嗪注射液（上?，F(xiàn)代哈森藥業(yè)有限公司，規(guī)格：2ml∶40mg，批號：11032912）；水為娃哈哈純化水，甲醇為色譜純。

附表1 回收率試驗結(jié)果（n＝6）

附表2 樣品含量測定結(jié)果（標示量/%）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：waters symmetry C18柱（150mm×4.6mm,3.5μm）；流動相：甲醇－水（40∶60）（用三乙胺調(diào)pH值至7.0）；流速0.8ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：280nm；進樣量：20μl。

2.2 溶液的制備 對照品溶液：精密稱取鹽酸川芎嗪對照品19.51mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液：精密量取樣品1ml（約相當于鹽酸川芎嗪20mg），置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。取注射用水作為空白溶液。

2.3 專屬性考察 分別取對照品溶液、供試品溶液、空白溶液，按“2.1”項下色譜條件試驗。結(jié)果空白溶液無干擾，且鹽酸川芎嗪峰與相連峰的分離度符合規(guī)定，理論板數(shù)按鹽酸川芎嗪計算約為10000。

2.4 標準曲線的制備 精密量取對照品儲備液1，2，3，4，5ml，分別置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按照“2.1”項下色譜條件試驗，記錄色譜圖。以峰面積（A）對質(zhì)量濃度（C）進行線性回歸，方程為A=51996C+11096（r＝1.000）。結(jié)果表明，鹽酸川芎嗪質(zhì)量濃度在9.755～48.78mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度與重復性實驗 取對照品溶液（19.51mg/L），重復進樣5次，測定峰面積RSD為0.25%(n＝5)；取供試品，平行制備5份供試品溶液，分別測定。鹽酸川芎嗪的平均含量為102.5%，結(jié)果RSD為0.40%（n＝5），表明本方法重復性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品，分別于0、6、12、18、24h進樣20μl，記錄峰面積，RSD分別為0.42%，表明其在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 精密量取已測知含量的樣品1ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品儲備液；精密量取供試品儲備液5ml置50ml量瓶，共6份，分別精密加入對照品儲備液4.0，4.0，5.0，5.0，6.0，6.0ml，加水稀釋至刻度，按樣品含量測定項下方法測定，計算回收率（見附表1）。

2.8 樣品含量測定 取對照品溶液與樣品溶液各20μl，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄鹽酸川芎嗪峰面積，按外標法計算含量，并與紫外-可見分光光度法測定結(jié)果作比較（見附表2）。

3 討論

在試驗中，參照文獻[1][2]中的流動相，采用甲醇－水（40∶60）（用三乙胺調(diào)pH值至7.0）為流動相時，出峰時間適宜，峰形較好。利用Waters 2996檢測器對供試品溶液和對照品溶液在200～350nm進行3D圖譜掃描，結(jié)果在280nm處有最大吸收，據(jù)此選擇280nm為測定波長。結(jié)果顯示，高效液相法專屬性強，測定結(jié)果準確，而紫外-可見分光光度法吸收系數(shù)法專屬性差，且易受外界干擾。