廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院(510663) 楊鳳瓊 羅憲堂 葉殷殷 陳桂江

廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院在研的復(fù)方治障明眼液主要由決明子、密蒙花、燈盞花等中藥組成，臨床用于預(yù)防和治療白內(nèi)障。為有效控制該制劑的質(zhì)量，除對方中君、臣等數(shù)味藥分別進(jìn)行理化定性鑒別及薄層色譜鑒別外，還用HPLC法對主藥決明子的有效成分大黃酚進(jìn)行了含量測定，暫定復(fù)方治障明眼液中大黃酚含量不低于0.05mg/ml。本實驗參考文獻(xiàn)報道的方法[1～3]對含量進(jìn)行的精密度、重復(fù)性、回收率實驗均獲得滿意結(jié)果，為制訂復(fù)方治障明眼液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可行的依據(jù)。

1 儀器和試藥

附圖1 各種溶液的HPLC譜圖

附圖2 大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線

UltiMate3000高效液相色譜儀(德國戴安) chromeleon色譜工作站；紫外檢測器；Satorius BP211D電子分析天平(Satorius Co.Ltd.Germany,d=0.01mg)； CQ-200超聲清洗儀 (上海音波聲電科技公司)。 大黃酚對照品(110796-200716，中國藥品生物制品檢定所)；復(fù)方治障明眼液(廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院實驗室提供)；色譜級甲醇（Merck公司），試驗所用水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取大黃酚對照品適量，加甲醇制成每毫升含大黃酚0.1502mg的對照液作為儲備液。對照品色譜圖及陰性對照見附圖1。

2.2 供試品溶液制備 精密量取復(fù)方治障明眼液10ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH3～4，加CHCl3萃取三次（15ml、10ml、10ml），在水浴上蒸干，用甲醇溶解，定容至10ml容量瓶中即得。

2.3 復(fù)方治障明眼液含量測定

2.3.1 色譜條件色譜柱：Hypersil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸-（85︰15）；柱溫25℃；流速：1.0ml?min-1；檢測波長：254nm；進(jìn)樣量：對照品溶液與供試品溶液各進(jìn)10μl。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性范圍考察 精密量取2.1項下混合對照品儲備液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、2.0ml各定容成10ml，0.45μm微孔濾膜過濾，分別吸取上述各溶液10μl進(jìn)樣，測定各濃度下的峰面積，試驗結(jié)果見附表1。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，得附圖2。以峰面積(y)對濃度(x)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=4048.2x+6319.4，線性范圍：3.004～30.04μg，相關(guān)系數(shù)γ是0.9994，表明在此范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系好。

2.4 精密度實驗 取同一對照溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測定大黃酚峰面積。試驗結(jié)果如附表2，所測大黃酚峰面積RSD為1.4%，表明該儀器精密度良好。

附表1 大黃酚線性關(guān)系考察實驗結(jié)果

附表2 大黃酚對照品精密度試驗結(jié)果

附表3 含量測定重復(fù)性實驗

附表4 加樣回收率試驗

附表5 樣品含量測定表

2.5 重復(fù)性實驗 照“含量測定”方法，對同一批樣品，分別制備6份供試品溶液，進(jìn)行HPLC測定，結(jié)果見附表3，結(jié)果表明，本方法重復(fù)性較好。

2.6 回收率實驗 采用加樣回收測定方法，照“含量測定”方法制備，供試品溶液進(jìn)行HPLC法測定，結(jié)果見附表4，結(jié)果表明，本法的回收率高。

2.7 樣品的測定 按上述測定方法，對三批復(fù)方治障明眼液樣品進(jìn)行大黃酚的含量測定，結(jié)果見附表5，根據(jù)上述測定結(jié)果，暫定本品大黃酚含量不少于0.05mg/ml

3 討論

3.1 本實驗根據(jù)文獻(xiàn)報道，在254nm波長處測得最大吸收，故選擇254nm作為檢測波長，取得較好效果。

3.2 本實驗以甲醇-0.1%磷酸(85︰15)為流動相，調(diào)節(jié)pH值為2.8，在此條件下，對照品和供試品中大黃酚出峰時間基本一致，且供試品周圍無其它雜質(zhì)峰干擾，峰形和分離效果均較好。實驗過程中確實體會到流動相的pH值對分離效果有較大影響。因此，只有選擇合適的流動相和合適的檢測波長，并且確保標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系好，才能定量準(zhǔn)確。

3.3 本實驗建立了中藥復(fù)方滴眼劑中大黃酚的HPLC方法的含量測定，該方法簡單、準(zhǔn)確、可靠，為今后生產(chǎn)出高效、優(yōu)質(zhì)的中藥復(fù)方滴眼劑提供了可靠的質(zhì)量保證。