有效提高生理學(xué)玻片法血型鑒定實(shí)驗(yàn)成功率和準(zhǔn)確度探析與實(shí)踐

朱錢(qián)鋒

（海寧衛(wèi)生學(xué)校，浙江 海寧 314400）

有效提高生理學(xué)玻片法血型鑒定實(shí)驗(yàn)成功率和準(zhǔn)確度探析與實(shí)踐

朱錢(qián)鋒

（海寧衛(wèi)生學(xué)校，浙江 海寧 314400）

生理學(xué)玻片法；血型鑒定實(shí)驗(yàn)；成功率；準(zhǔn)確度

ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)是生理學(xué)教學(xué)中一項(xiàng)實(shí)用而又能讓學(xué)生感興趣的實(shí)驗(yàn)，在實(shí)際臨床工作中的應(yīng)用度很高，開(kāi)展此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)有助于理論聯(lián)系實(shí)際，加深對(duì)血型理論知識(shí)的理解。學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程、準(zhǔn)確度或成敗的因素，為了確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，提高實(shí)驗(yàn)成功率與準(zhǔn)確度，筆者對(duì)多年的實(shí)驗(yàn)教學(xué)進(jìn)行探析，總結(jié)出做好這一實(shí)驗(yàn)的一些要領(lǐng)，以供本實(shí)驗(yàn)教學(xué)參考。

1 實(shí)驗(yàn)概況

血型鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖亲寣W(xué)生學(xué)會(huì)用玻片法鑒定ABO血型，加深理解血型分型的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)原理是根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，即當(dāng)紅細(xì)胞膜上的凝集原與其相對(duì)應(yīng)的凝集素（抗體）相遇時(shí)，發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，紅細(xì)胞被抗體凝集成一簇簇不規(guī)則細(xì)胞團(tuán)，形成肉眼或鏡下可見(jiàn)的細(xì)胞團(tuán)（結(jié)果判斷見(jiàn)表1）。實(shí)驗(yàn)用品包括標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清、玻片、小直徑記號(hào)筆、酒精消毒棉球、干棉球、牙簽、采血針、顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)方法主要步驟分為標(biāo)記玻片、滴加血清、消毒采血、觀察反應(yīng)和判斷結(jié)果5步。

表1 血型鑒定結(jié)果判斷依據(jù)

2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的影響因素及原因

2.1 玻片準(zhǔn)備不當(dāng)

由于玻片薄而透明，部分學(xué)生會(huì)反放玻片，使得兩個(gè)凹面朝下，造成標(biāo)準(zhǔn)血清滴在玻片平面上，造成血清流動(dòng)散開(kāi)。玻片放置不平也會(huì)使血清散溢。玻片潮濕，同樣會(huì)容易使血清散溢。玻片放置的背景顏色偏深會(huì)使觀察時(shí)對(duì)比度不明顯，增加判斷難度。有些學(xué)生會(huì)忘記或嫌麻煩不標(biāo)記玻片上的A和B符號(hào)，等到判斷時(shí)分不清抗A和抗B血清，導(dǎo)致結(jié)果無(wú)法判斷。

2.2 采血留樣失敗

成功采血留取樣本是實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。在采血過(guò)程中，筆者發(fā)現(xiàn)存在下述情況影響采血，表現(xiàn)為：（1）因怕疼不敢扎針，或扎針動(dòng)作慢、輕、猶豫，出現(xiàn)很長(zhǎng)時(shí)間采不成血。（2）扎針后因末梢血不豐富，擠不出一滴血。（3）血液擠出來(lái)后，血散開(kāi)在指腹上，看得到而取不到血。（4）暈血致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

2.3 血液血清配比失調(diào)

血液樣本過(guò)多或過(guò)少均會(huì)使結(jié)果難以判斷，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。過(guò)多會(huì)導(dǎo)致直接發(fā)生凝血而難以判斷結(jié)果，過(guò)少會(huì)讓人看不清有無(wú)凝集反應(yīng)。

2.4 血清和樣本不慎混淆

任何使得兩種血清相互混淆或血清與手指上血液相接觸的情況均會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的錯(cuò)誤或?qū)嶒?yàn)失敗。表現(xiàn)在：（1）用牙簽攪拌樣本與血清的混合物時(shí)，同一端去攪拌兩處。（2）用牙簽一端取血后，接觸到血清，再用該牙簽這端返回取血，導(dǎo)致血清與手指上血液混淆。（3）指頭下垂，不慎使血滴過(guò)低碰到血清。

W4#=0.6(0.6415,0.1279,0.7428,0.1056,0.0961)+0.4(0.2509,0.2159,0,0,0)T=(0.4853,0.1631,0.4457,0.0634,0.0577)T

2.5 攪拌不充分與反應(yīng)時(shí)間不足

攪拌不充分或等待反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，使反應(yīng)結(jié)果不典型或難以判斷。

2.6 結(jié)果無(wú)法判斷或誤判

部分學(xué)生不能區(qū)分凝血現(xiàn)象和凝集現(xiàn)象，或不能判斷有無(wú)凝集反應(yīng)的現(xiàn)象，或出現(xiàn)誤判的現(xiàn)象，主要原因是對(duì)理論知識(shí)掌握不扎實(shí)，對(duì)反應(yīng)的觀察能力低。

2.7 其他存在的一些影響因素與現(xiàn)象

如存在血清失效、學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備不充分、出現(xiàn)凝血功能障礙等因素致實(shí)驗(yàn)失敗或結(jié)果錯(cuò)誤。

3 討論

上述現(xiàn)象是在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)的現(xiàn)象，注意這些環(huán)節(jié)，通過(guò)對(duì)學(xué)生加以指導(dǎo)，做出相應(yīng)的應(yīng)對(duì)措施完全可以避免這些情況的發(fā)生，從而保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行并達(dá)到預(yù)期效果。

在玻片的準(zhǔn)備上，首先要讓學(xué)生用餐巾紙反復(fù)擦拭，保證干燥清潔。放置之前要先用手感觸凹面并朝上放置，放置要保證水平，最好選用凹面相對(duì)深一點(diǎn)的玻片，這些都能保證血清不易溢出或散開(kāi)。同時(shí)要放在淺色的背景上，以便于觀察反應(yīng)情況。要求學(xué)生必須在玻片的兩端用小直徑記號(hào)筆標(biāo)記A和B，滴入的血清與之相對(duì)應(yīng)，這樣可避免出現(xiàn)無(wú)法辨認(rèn)哪一端是抗A或抗B的情況。

做好采血工作是實(shí)驗(yàn)成敗的前提條件。對(duì)于膽小害怕者，應(yīng)做好思想工作，解除緊張或恐懼心理。分兩個(gè)人一組互助采血，取無(wú)名指腹部位，嚴(yán)格消毒，要領(lǐng)是捏緊無(wú)名指末節(jié)的兩側(cè)，讓皮膚繃緊，干脆利落地以適當(dāng)力度扎針，杜絕輕、慢的動(dòng)作和猶豫的心態(tài)，因?yàn)檫@樣會(huì)更疼痛并使學(xué)生因更恐懼而不敢扎針采血。對(duì)于手指冰冷或蒼白者在扎針前先活動(dòng)手臂和手指，暖手、搓手或甩手，使手指末梢的血供豐富一點(diǎn)，以避免扎針后擠不出血。血液流出后立即讓指腹面朝下，避免指腹朝上或其他朝向，否則血會(huì)立即散溢開(kāi)來(lái)，因血液的粘滯性，一旦散溢就很難取到成滴的血液。

一般由教師事先給學(xué)生滴備好血清，量以兩大滴左右為宜。當(dāng)血液成滴后，分別往兩個(gè)凹面內(nèi)血清中滴入一小滴即可，注意滴血清與滴血液時(shí)間不能間隔過(guò)長(zhǎng)，血液樣本不能過(guò)多或過(guò)少。間隔過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致凝集反應(yīng)不典型；血液過(guò)多則血清抗體量相對(duì)不足，混合物發(fā)生血液凝固，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失??；血液樣本過(guò)少，則看不到任何凝集現(xiàn)象導(dǎo)致無(wú)法判斷。量的匹配恰當(dāng)是實(shí)驗(yàn)成功的一個(gè)關(guān)鍵，所以一定要在這個(gè)環(huán)節(jié)上做到恰如其分。盡量不要用牙簽去刮血，容易導(dǎo)致血清碰觸到指腹部血液，造成血清與指腹部血液相互混淆，致使實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。如果要用，必須確保牙簽一端只用一次，可避免出現(xiàn)混淆現(xiàn)象。因此在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段要備好足夠量的牙簽，每人最好有5～6根以上。

在成功取血后，立即用牙簽進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，目的是讓血液與血清充分混合，利于發(fā)生凝集反應(yīng)。確保牙簽一端只攪拌一處，務(wù)必遵循“一次性”原則，否則實(shí)驗(yàn)就因血清相互混淆而不準(zhǔn)確了。注意等待時(shí)間控制在10～15分鐘左右，保證有足夠的反應(yīng)時(shí)間，過(guò)短往往會(huì)引起誤判。也不能超過(guò)1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間再去觀察反應(yīng)現(xiàn)象和判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)因風(fēng)、干燥、變性等影響因素而不能正確反映凝集現(xiàn)象。

在結(jié)果的判斷上，典型凝集反應(yīng)表現(xiàn)為肉眼可見(jiàn)的泥沙樣沉淀，周?chē)难鍎t變得透明清亮；凝血反應(yīng)表現(xiàn)為滴入血液量多，血液凝成塊，干積在凹面處；不發(fā)生凝集反應(yīng)則表現(xiàn)為一團(tuán)混濁的、呈紅色的、不凝固的混合液（反應(yīng)現(xiàn)象的判斷見(jiàn)圖1）。若在足夠時(shí)間后，此時(shí)仍不易判斷則可再次用牙簽稍作攪拌，部分會(huì)出現(xiàn)清楚表現(xiàn)。一般肉眼能夠判斷，若實(shí)在難以判斷，可借助顯微鏡進(jìn)行觀察。

圖1 ABO血型結(jié)果判斷（反應(yīng)表現(xiàn)）

對(duì)于其他存在的一些影響因素，可通過(guò)實(shí)驗(yàn)前加強(qiáng)準(zhǔn)備與指導(dǎo)加以避免。實(shí)驗(yàn)前可通過(guò)班主任了解學(xué)生的健康情況，對(duì)于有暈血或血液系統(tǒng)疾病者應(yīng)事先做到心中有數(shù)，做好相關(guān)預(yù)防工作，避免出現(xiàn)因采血暈倒、傳染疾病等情況的發(fā)生，特殊情況可準(zhǔn)予不做。指導(dǎo)學(xué)生正確地消毒和止血，保證實(shí)驗(yàn)安全無(wú)事故。血清要盡可能在實(shí)驗(yàn)前近期去采購(gòu)，并正確保存在冰箱內(nèi)冷藏，防止因血清失效引發(fā)錯(cuò)誤或失敗。因采血再加上檢測(cè)自己的血型原因，學(xué)生都表現(xiàn)得比較興奮和好奇，盡管再三要求安靜，但事實(shí)上還會(huì)很嘈雜，實(shí)驗(yàn)要選在離其他班級(jí)較遠(yuǎn)的地方，避免因聲音嘈雜影響其他班級(jí)上課。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后無(wú)論成敗與否，要求每名學(xué)生認(rèn)真書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)總結(jié)。課后組織學(xué)生對(duì)班內(nèi)血型分布情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，要求與當(dāng)?shù)厝巳哼M(jìn)行對(duì)比。

G424.31

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1671-1246（2012）10-0099-02