麥芪益肺合劑質(zhì)量標準的研究

王申東， 陳培麗， 胡 斯， 李江奇， 孟琳懿

（上海交通大學附屬兒童醫(yī)院，上海 200040）

麥芪益肺合劑是我院自制中藥制劑。由麥冬、黃芪、陳皮、烏梅、白術(shù)、五味子等八味藥材組成，用于治療小兒呼吸道反復(fù)感染，應(yīng)用于臨床30余年，療效確切，安全性好。已對處方中君藥黃芪制定了黃芪甲苷定量測定［1］，此次對本品質(zhì)量標準做進一步提高。處方中陳皮能行散肺氣壅遏，用于痰多咳嗽等癥［2-3］。所含主要成分橙皮苷已證明具有較多的生理活性［4］，與陳皮的藥理作用息息相關(guān)。因此本實驗采用高效液相色譜法對陳皮中主要成分橙皮苷進行測定。同時研究白術(shù)［5］、烏梅［6］、五味子［7］的有效成分，分別建立TLC鑒別方法，得到的色譜斑點清晰，陰性對照無干擾。提高后的質(zhì)量標準，可有效地控制本品質(zhì)量，保證臨床療效。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀(紫外檢測儀)；MERCK G60及 GF254薄層板；Sartorius BP211D天平；BRANSON B5500S-MT超聲儀；橙皮苷對照品(批號110721-200613)、五味子甲素對照品(批號110764-200107)、熊果酸對照品(批號110742-9908)、白術(shù)對照藥材(批號120925-200206)、五味子對照藥材(批號120922-200304)、烏梅對照藥材(批號121208-0101)均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為超純水。麥芪益肺合劑由上海市兒童醫(yī)院提供。

2 薄層鑒別

2.1 白術(shù)的薄層鑒別［2，8-9］取本品25 mL，加正己烷20 mL振搖提取，正己烷液低溫揮干，殘渣加正己烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。同時制備不含白術(shù)的陰性制劑，同法制成陰性對照溶液。取白術(shù)對照藥材0.25 g，加正己烷20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(中國藥典2010年版一部附錄VI B)，吸取上述溶液各20 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(5∶1)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性制劑無干擾，見圖1。

圖1 白術(shù)薄層鑒別色譜圖

2.2 烏梅的薄層鑒別［2，10-11］取本品25 mL，加甲醇30 mL，超聲處理 30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚(30～60℃)浸泡兩次，每次2 min，每次15 mL，傾去石油醚，殘渣加無水乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。同時制備不含烏梅的陰性制劑，同法制成陰性對照溶液。另取烏梅對照藥材4 g，同法制成對照藥材溶液。再取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液(v/v)，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性制劑無干擾，見圖2。

圖2 烏梅薄層鑒別色譜圖

2.3 五味子的薄層鑒別［2，12-13］取本品20 mL，加三氯甲烷20 mL，搖勻，加熱回流30 min，取三氯甲烷液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。同時制備不含五味子的陰性制劑，同法制成陰性對照溶液。另取五味子對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-乙酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性制劑無干擾，見圖3。

圖3 五味子薄層鑒別色譜圖

3 定量測定

3.1 色譜條件 Agileng XDB-C18色譜柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流動相為甲醇-水-乙酸(25∶71∶4)；體積流量1 mL/min；柱溫30℃；檢測波長283 nm；進樣量10 μL。

3.2 標準曲線的制備 取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.128 mg的溶液，作為對照品貯備溶液，分別精密吸取對照品貯備溶液 2、4、6、8、10 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件分別進行測定，以進樣量(C)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程 A=2969.13C－16.29(r=0.9999)，橙皮苷在0.256～1.28 μg范圍內(nèi)進樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

3.3 供試品溶液制備 精密量取供試品溶液20 mL置于分液漏斗中，加乙醚20 mL振搖提取，棄去乙醚液，水液再用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解，置20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

3.4 干擾性試驗 取不含陳皮的陰性制劑，按樣品溶液制備項下的方法處理，進樣。結(jié)果，陰性制劑在橙皮苷對照品色譜峰處無干擾峰出現(xiàn)，表明處方中其它成分對測定無影響。結(jié)果見圖4。

圖4 HPLC色譜圖

3.5 精密度試驗 精密吸取供試品溶液，重復(fù)進樣6次，以橙皮苷峰面積計RSD為0.47%。表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液，分別在0、2、4、8、16.5、24.5 h測定，RSD 為0.56%。

3.7 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備項下的方法處理，測定，橙皮苷質(zhì)量濃度為0.09492 mg/mL，RSD為1.31%。

3.8 回收率試驗 精密量取樣品10 mL，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.328 mg/mL的橙皮苷溶液2.5、3.0、3.5 mL，分別平行處理3份，按供試品溶液制備項下的方法處理，置20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測定。計算加樣回收率，結(jié)果橙皮苷的平均回收率為99.1%，RSD為2.64%。

3.9 樣品測定 取3批自制樣品(批號為110320、110324和110328)，依法測定，計算橙皮苷的質(zhì)量濃度分別為0.1064、0.1048、0.0950 mg/mL。

4 討論

4.1 在制定白術(shù)、烏梅、五味子的TLC方法時，發(fā)現(xiàn)由于本品為水煎液，成分較復(fù)雜，基質(zhì)干擾較嚴重，通過查閱文獻，選擇合適的提取方法及展開劑，使得基質(zhì)干擾消除；得到的色譜斑點清晰，陰性對照無干擾，方法專屬性較強。

4.2 陳皮中橙皮苷的測定方法較多［14-17］，經(jīng)過比較，選擇了應(yīng)用較廣的HPLC法對本品中橙皮苷進行了測定；同時對流動相系統(tǒng)進行了摸索，經(jīng)對乙腈-磷酸系統(tǒng)及甲醇-乙酸(冰醋酸)系統(tǒng)分別考察，發(fā)現(xiàn)甲醇-乙酸系統(tǒng)更有利于本品中橙皮苷與其他成分的分離。

4.3 常用的橙皮苷提取方法為先石油醚去雜再用甲醇提取，或采用甲醇直接提取。本品為水煎液，且所含成分較多，對橙皮苷的測定造成了較大的干擾，通過摸索，現(xiàn)采用乙醚去除雜質(zhì)后再用乙酸乙酯提取的方法，使得供試品色譜中橙皮苷與其他成分得到有效分離，陰性對照無干擾。

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