HPLC法測定蓮連膠囊中延胡索乙素的含量

宋 磊，紀(jì) 峰

(1.上海市長寧區(qū)中心醫(yī)院，上海 200336；2.上海市閘北食品藥品檢驗(yàn)所，上海 200436)

·藥物分析·

HPLC法測定蓮連膠囊中延胡索乙素的含量

宋 磊1，紀(jì) 峰2

(1.上海市長寧區(qū)中心醫(yī)院，上海 200336；2.上海市閘北食品藥品檢驗(yàn)所，上海 200436)

目的建立HPLC法測定蓮連膠囊中延胡索乙素含量的方法。方法采用高效液相色譜法，以該膠囊中的延胡索乙素為定量指標(biāo)，測定延胡索的含量。結(jié)果延胡索乙素在7.908～158.06 μg/ml范圍內(nèi)峰面積具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為 96.18%，RSD為 1.2% 。結(jié)論建立的定量方法具有專屬性好，準(zhǔn)確、靈敏和可靠的特點(diǎn)，可用于蓮連膠囊中延胡索乙素的含量測定及質(zhì)量控制。

蓮連膠囊；延胡索乙素；高效液相色譜法；含量測定

蓮連膠囊為上海市中醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由積殼、連翹、延胡索(醋制)、白及、白術(shù)(麩炒)、半枝蓮六味藥組成，具有清胃和中，消炎滅菌的作用。臨床上用于因幽門螺旋桿菌感染所致的胃、十二指腸球部潰瘍及慢性胃炎。本制劑已長期在臨床使用，療效好。然而本制劑的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測定項(xiàng)。為此作者根據(jù)醋延胡索為本方中的君藥，選擇延胡索藥材的主要有效成分延胡索乙素為質(zhì)量控制的指標(biāo)，本文參照《中國藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測定的有關(guān)文獻(xiàn)[1～4]，采用高效液相色譜法對其進(jìn)行了測定。該方法專屬性好，準(zhǔn)確、靈敏、可靠，為完善和提高蓮連膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilentt 1100型高效液相色譜儀(美國)；CP124S型電子天平(德國)；BRANSON超聲波儀(德國)；色譜柱(XDB-C18,4.6 mm×250 mm，5 μm)。

1.2試藥與試劑 延胡索乙素對照品(中國藥品生物制品檢定所, 批號：110726-200409)；乙腈為色譜純；水為重蒸水；其余試劑均為分析純；蓮連膠囊制劑和陰性對照品均有上海市中醫(yī)院提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：以乙腈-0.6%冰醋酸(三乙胺調(diào)PH至6.0)(40:60)為流動(dòng)相；檢測波長為280 nm；流速1.0 ml/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μl；理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2對照品溶液制備 精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1 ml含48 μg的溶液，即得。2.3供試品溶液的制備 取本品50粒，混合均勻，取約5 g，精密稱定，精密加入氨水-甲醇(1:20)混合溶液50 ml，稱定重量，水浴加熱回流1 h，放冷，稱定重量，用氨水-甲醇(1:20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25 ml，水浴濃縮至近10 ml，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g ，內(nèi)徑為1 cm)上，繼用甲醇50 ml洗脫，合并流出液和洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，定容至5 ml容量瓶中，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.4專屬性試驗(yàn) 按處方量配制缺延胡索的陰性對照樣品5 g，按照“2.3”項(xiàng)下的方法制備空白溶液，再按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，比較了供試品溶液，延胡索對照品溶液，陰性對照液的色譜圖。結(jié)果樣品中延胡索乙素與其他主分色譜峰能達(dá)到基線分離，陰性對照液在與延胡索乙素對照品相同的保留時(shí)間處未出現(xiàn)相同的色譜峰，故認(rèn)為測定無干擾。

2.5線性關(guān)系考察 精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.790 8 mg的溶液，作為母液。分別精密吸取0.5、1、3、5、6、10 ml置50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。按上述色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=17.671X-1.263 5，r=0.999 9.結(jié)果表明，延胡索乙素在7.908～158.06 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液20 μl，按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果延胡索乙素峰面積的RSD為0.49%。

2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(批號為110101)的樣品6份，分別按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，結(jié)果平均含量為 0.083 2 mg/g，RSD為0.62%。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，按含量測定方法，分別在0、4、8、12、24 h進(jìn)行測定。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。RSD為0.54%，可滿足檢測時(shí)間的需要。

2.9準(zhǔn)確度試驗(yàn)(回收率試驗(yàn)) 采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品(批號110101，含量0.083 2 mg/g)6份，每份2.5 g，精密稱定，分別精密加入延胡索乙素溶液(0.050 79 mg/ml)4.0 ml,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，即得加樣回收溶液，按“2.1”項(xiàng)下的方法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10樣品測定結(jié)果 按擬定的含量測定方法，對3批樣品進(jìn)行含量測定，計(jì)算延胡索乙素含量結(jié)果見表2。

表2 延胡索乙素含量測定(n=3)

3 討論

3.1提取方法的選擇 試驗(yàn)中考察回流提取、超聲提取、索氏提取，結(jié)果回流提取效果較理想，其結(jié)果與索氏提取相當(dāng)，考慮到回流提取的方法更符合在實(shí)際操作中使用，故選擇回流提取方式。本實(shí)驗(yàn)中提取液經(jīng)過中性氧化鋁柱子以后，雜質(zhì)對主成分干擾比較少，也有利于對色譜柱的保護(hù)。

3.2流動(dòng)相的選擇 本試驗(yàn)考察了不同的流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH至6.0)(55:45)，乙腈-0.6%冰醋酸(三乙胺調(diào)pH至6.0)(40:60)。發(fā)現(xiàn)采用“2.1”的流動(dòng)相時(shí)，延胡索乙素的保留時(shí)間適中，峰形好，分離度好，無雜質(zhì)干擾。故采用此流動(dòng)相。

3.3色譜柱的選擇 實(shí)驗(yàn)中選擇了Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)和(4.6 mm×250 mm，5 μm)。結(jié)果表明，(4.6 mm×250 mm，5 μm)延胡索乙素分離效果更好，本實(shí)驗(yàn)選擇Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.4本實(shí)驗(yàn)所得的方法簡單準(zhǔn)確，重現(xiàn)性及分離度好，能較好地測定蓮連膠囊中延胡索乙素的含量，為完善和提高蓮連膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

[1] 中國藥典2010版.一部[S].2010：130.

[2] 吳 堅(jiān).高效液相法測定安胃片中延胡索乙素的含量[J].江西醫(yī)藥，2011，46(7)：659.

[3] 藍(lán)明雄.醋制延胡索顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國中醫(yī)咨詢，2011，3(20)：66.

[4] 王 慧，費(fèi) 楊，黃玉鳳，等.反相高效液相法測定烏金膠囊中的延胡索乙素[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，32(9)：1040.

DeterminationoftetrahydropalmatineinLianliancapsulebyHPLC

SONG Lei1, JI Feng2

(1.Changning District Central Hospital, Shanghai 200336，China; 2. Institute for Drug and Food Control of Zhabei District, Shanghai 200436，China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for tetrahydropalmatine in Lianlian capsule.MethodThe determination method of Lianlian capsule was carried out by HPLC, which quantitative index was represented with tetrahydropalmatine.ResultThe calibration curves was linear in the rage of 7.908～158.06 μg/ml for tetrahydropalmatine. The average recovery was 96.18 %(RSD1.2%).ConclusionThe method was exclusive, accurate and reliable, which could be used for improvement of quality control in Lianlian capsule.

Lianlian capsule; tetrahydropalmatine; HPLC; assay

宋 磊(1972-)，女，主管藥師.Tel：13661829392，E-mail:denis199969@qq.com.

R927

A

1006-0111(2012)05-0376-03

10.3969/j.issn.1006-0111.2012.05.016

2012-03-11

[修回日期]2012-04-25