邱宏聰孟夏臨
1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院,廣西南寧530022;2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西南寧530022
HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量
邱宏聰1,2孟夏臨1
1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院,廣西南寧530022;2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西南寧530022
目的:建立老年咳喘片中甘草酸的HPLC含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法,色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 mm),流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液(35:65),流速為1.0 mL·min-1,檢測波長為237 nm;進(jìn)樣體積為10 mL。結(jié)果:該方法的線性范圍為0.098~1.97 mg,r=0.9998(n=5);平均回收率(n=6)為99.36%,RSD為1.81%。結(jié)論:該法簡便、準(zhǔn)確,可用于老年咳喘片的質(zhì)量控制。
老年咳喘膠囊;甘草酸;高效液相色譜法
老年咳喘膠囊是由黃芪、補(bǔ)骨脂、淫羊藿、甘草等七味藥材組成,具有滋陰壯陽,扶正固本之功效,可提高免疫能力,促進(jìn)病體康復(fù),用于老年慢性支氣管炎及各種體虛癥。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道通過測定黃芪甲苷[1]指標(biāo)物質(zhì),建立本品的質(zhì)量控制方法。為更全面的控制本品的質(zhì)量,保證用藥安全、有效,本文采用HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量。
日本島津公司LC-20A高效液相色譜儀;SPD-20A紫外檢測器;威瑪龍多媒體色譜數(shù)據(jù)工作站。甘草酸銨對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110731-200614,供含量測定用),老年咳喘膠囊(購自A公司,共三批)。乙腈為色譜純,水為重蒸水,其余試劑為分析純。
色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 mm),流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液(35:65),流速為1.0 mL·min-1,檢測波長為237nm;進(jìn)樣體積為10 mL;柱溫為室溫;理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
精密稱取甘草酸銨對照品,加流動相制成0.2 mg·mL-1的溶液,即得(甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.0207)[2]。
取本品20片,研細(xì),混勻,取約0.5 g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入流動相25 ml,稱定重量,超聲處理30 min,放冷,再稱定重量,用流動相補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
精密量取對照品溶液0.5、1、3、5、10ml,分別置10ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,按擬定色譜條件分別進(jìn)樣10ml,測定。以甘草酸對照品進(jìn)樣量(mg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸,回歸方程為:Y=706 453.8X+29 745.3,r=0.999 8,表明進(jìn)樣量在0.098~1.97 mg范圍內(nèi)時,進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
對同一供試品溶,按擬定色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定5次,結(jié)果峰面積平均值為325 491,RSD為1.37%,表明儀器精密度較好。
對同一供試品溶液分別在0,1,2,4,8,12、24 h按擬定色譜條件進(jìn)行測定,結(jié)果峰面積平均值為330 752,RSD為1.68%,表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
精密稱取同一批次樣品6份,制成供試品溶液,按擬定色譜條件測定,結(jié)果甘草酸含量的平均值為1.06 mg·g-1,RSD為1.89%,表明重復(fù)性較好。
精密稱取6份已知含量(1.06 mg·g-1)的樣品0.25 g,分別精密加入甘草酸銨對照品(11.76 mg·mL-1)25 mL,制成供試品溶液,按擬定色譜條件測定,計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率(n=6)為99.36%,RSD為1.81%,見表1,表明方法回收率較好。
圖1 HPLC色譜圖
取缺甘草的陰性樣品0.5g,按擬定方法提取,測定。結(jié)果陰性樣品在甘草酸出峰位置無吸收峰,表明處方中其他成分對測定無影響。見圖1。
分別取3批樣品,按擬定方法提取,測定,計(jì)算樣品中甘草酸的含量,結(jié)果分別為0.38 mg/粒,0.35 mg/粒,0.32 mg/粒。
方中的甘草為中國藥典收載品種,成分清楚。其主要成分甘草酸的含量較高,具有抗炎、解毒、保肝和增強(qiáng)免疫等作用[3],為處方中主要的藥效成分。因此,將其確定為含量測定項(xiàng),可更全面、有效的控制本品的質(zhì)量。
本試驗(yàn)對樣品提取溶劑進(jìn)行了篩選,曾采用70%乙醇、1%醋酸無水乙醇、40%甲醇及本試驗(yàn)流動相乙腈-0.05%磷酸溶液,結(jié)果流動相提取的樣品雜質(zhì)峰較少,峰型較好,因此采用流動相作為提取溶劑。試驗(yàn)還對超聲時間進(jìn)行了考察,結(jié)果樣品超聲30 min,甘草酸基本提取完全。通過含量測定的方法學(xué)考察,結(jié)果表明,用HPLC法測定老年咳喘膠囊中甘草酸的含量,方法簡便、準(zhǔn)確,可用于該制劑的質(zhì)量控制。
[1]覃軍,黃鳳婷,凌志敏,等.老年咳喘膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中藥材,2010,(6):1005-1007.
[2]中國藥典(一部)[S].2010:80-81.
[3]謝松梅,崔慧斐.甘草酸的研究進(jìn)展[J].食品與藥品,2006,8(03A):1.
Determination of Glycyrrhizic Acid in Laonian Kechuan Capsule by HPLC
QIU Hong-cong1,2,MENG Xia-lin1
1.Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences,Nanning 530022,China;2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Stardands,Nanning 530022,China
Objective:To establish a HPLC method for the determination of glycyrrhizic acid in Laonian Kechuan Capsule.Method:A HPLC method was developed.Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 mm)was adopted and the mobile phase consisted of acetonitrile and 0.05%phosphoric acid solution(35:65)with injection volume of 10 mL.The flow rate was 1.0 mL·min-1 and the UV detection was at 237 nm.Results:The linear ranges were 0.098~1.97 mg(r=0.9998,n=5),and the average recovery(n=6)was 99.36%with 1.81%of RSD.Conclusion:The method is simple,accurate,and suitable for the quality control of Laonian Kechuan Capsule.
Laonian Kechuan Capsule;glycyrrhizic acid;HPLC
R927.2
A
1007-8517(2012)20-0043-02
邱宏聰,碩士,助理研究員,研究方向:藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:qiuhongcong@163.com。
2012.08.27)