劉紅娟 （齊魯動物保健品有限公司 山東 濟南 250100）

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濃縮對禽流感(H9N1型)病毒液中滅活劑甲醛含量的影響

劉紅娟 （齊魯動物保健品有限公司 山東 濟南 250100）

采用UV法測定了不同甲醛濃度滅活后禽流感(H9N1)病毒液濃縮前、中、后的甲醛含量。結果表明：濃縮對病毒液中甲醛含量影響不大。

甲醛是生物制品研究與制造中最主要的滅活劑，適當濃度的甲醛可使微生物喪失增殖力或毒性，保持抗原性和免疫原性。濃縮是疫苗生產中提高病毒含量通常采用的方法。尤其是多聯滅活疫苗的研制成功，更使得濃縮成為不可缺少的生產步驟。甲醛已經被WHO定為致癌和致畸物質，必須對制品中甲醛含量進行限制?！吨腥A人民共和國獸藥典》(2010年版)第三部中規(guī)定禽用滅活疫苗中甲醛含量應不超過0.2%(含40%甲醛)。為了確定濃縮對病毒液中甲醛含量的影響，為生產提供可靠的技術支持，本文以禽流感(H9N1)病毒液為例，按照《中華人民共和國獸藥典》(2010年版)第三部中甲醛殘留量測定方法對濃縮前后病毒液中甲醛含量進行了測定。

1 材料與方法

1.1 試藥與儀器 甲醛(含量36.0%)；醋酸、醋酸銨、乙酰丙酮、無水乙醇、UV2501分光光度計(島津公司)。中空纖維超濾膜截留分子量10KD(北京旭邦膜設備有限責任公司)。

1.2 樣品 禽流感(H9N1)病毒液三批：20110203、20110204、20110205，分別加0.1%、0.2%、0.3%病毒液滅活后，用北京旭邦截留分子量為10KD的中空纖維超濾膜進行4倍濃縮，取濃縮前、濃縮中、濃縮后、流出液前段、流出液中、流出液后共18個樣品。

2 試驗方法

（1）試驗原理：甲醛與乙酰丙酮及氨作用，生成黃色化合物二乙酰基二氫吡啶后，410nm下進行分光光度比色定量。（2）供試品溶液：用5.0ml移液管取供試品5.0ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

對照品溶液：準確稱取含量為35.9%的甲醛溶液0.2786g置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。（3）測定法：精密吸取對照品溶液和供試品溶液各0.5ml，分別加醋酸-醋酸銨緩沖液10ml，置60℃恒溫水浴15min，冷水冷卻5min，放置20min后，在410nm波長處測定吸光度，按照下式計算：

3 試驗結果

見附表。

附表 H9N1病毒液中滅活劑 (%)

批號濃縮前濃縮中濃縮后流出液前流出液中流出液后 201000160.110.130.120.140.110.12 201000170.190.210.220.210.230.20 201000180.300.320.310.290.310.31

4 討論

中空纖維超濾膜是超濾技術中最為成熟與先進的一種技術。孔徑以能截留物質的分子量表達，截留分子量可達幾千至幾十萬。被過濾液在中空纖維外側或內腔加壓流動，分別構成外壓式與內壓式。超濾是動態(tài)過濾過程，被截留物質可隨濃縮排除，不致堵塞膜表面，可長期連續(xù)運行。廣泛用于凈水、溶液分離和濃縮等領域。

甲醛分子量為30，和水分子量相差不多，均屬于小分子物質，遠遠小于10KD的截留分子量，和水分子一樣在溶液中呈隨機分布：一部分留在濃縮液中，一部分隨流出液排出。因此濃縮前后甲醛含量差異不大。

5 結論

濃縮前后病毒液中甲醛含量基本不變。濃縮不會造成病毒液中甲醛含量大幅上升，對于高倍濃縮疫苗或多聯苗的制備有很好的指導意義。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典編委會. 中華人民共和國獸藥典[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010.

（2012–05–24）

S852.65

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1007-1733(2012)09-0021-01