張智軍 崔 華 馬久太

(1陜西省彬縣食品藥品監(jiān)督管理局，陜西省彬縣西大街老政府院內，713500;2陜西摩美得制藥有限公司;3陜西步長制藥有限公司)

膚疾洗劑由苦參、百部、花椒、白鮮皮、硼砂、雄黃等6味中藥組成，具有解毒殺蟲、止癢收斂、活血祛瘀的功能，主治疥瘡、濕疹、脂溢性皮炎、瘙癢性皮膚病及花斑癬［1］。為了更好地控制產品質量，我們在其原質量標準的基礎上，對苦參堿的含量測定方法，進行了方法學研究。報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC－20AD)，色譜工作站(島津LC－solution)，紫外檢測器(島津SPDM20A)，電子天平(梅特勒－奧豪斯AR1140)。

1.2 試劑 苦參堿對照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號110805－200906)，膚疾洗劑(陜西摩美得制藥有限公司生產，批號 110305、110307、110309、110311、110313)，乙腈為色譜純，用水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;檢測波長220nm;0.016mol·L－1磷酸二氫鉀溶液－0.016mol·L－1十二烷基硫酸鈉溶液－乙腈(30︰30︰35)為流動相;流速1.0mL·min－1;理論塔板數以苦參堿計算應不低于3000。上述色譜條件下供試品分離度高，陰性無干擾。

2.2 供試品溶液的制備 精密吸取膚疾洗劑10mL，用稀鹽酸調pH值至3～4，以石油醚(60℃ ～90℃)萃取3次，每次20mL，棄去石油醚液，水層用0.5%氫氧化鈉溶液調pH值至9～10，用三氯甲烷萃取3次，每次20mL，合并三氯甲烷層，加無水硫酸鈉脫水，三氯甲烷液蒸至3mL，過中性氧化鋁柱(100～200目，10g，內徑1cm)，以三氯甲烷50mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至10mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察 精密稱取苦參堿對照品10.30mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對照品備用液。精密吸取備用液各0.25mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得苦參堿對照品溶液。吸取對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，結果見表1。

表1 苦參堿線性關系考察

以C代表進樣量、A代表峰面積，計算回歸方程為A=1427718.13C+148727.67，r=0.9999;苦參堿在0.515～5.15μg之間有良好的線性關系，標準曲線見圖1。

圖1 苦參堿標準曲線

2.4 精密度試驗 吸取苦參堿對照品溶液(濃度0.103mg·mL－1)20μL，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀中，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結果見表2。

表2 精密度試驗

結果表明對照品溶液峰面積RSD為1.23%，本方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取樣品(批號110305)，按照上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別于0、2、4、8、16h時注入液相色譜儀中，進樣量10μL，記錄峰面積，結果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗

結果表明供試品溶液峰面積在16h內RSD為1.42%，本方法穩(wěn)定性良好。

2.6 重現性試驗 精密吸取樣品(批號110305)10mL 5份，制備供試品溶液，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀中，進樣量10μl，記錄峰面積，結果見表4。

表4 重現性試驗

結果表明樣品含量的RSD為1.31%，本方法重現性良好。

2.7 回收率試驗 精密吸取樣品(批號110305)10mL 6份，分別精密加入樣品中含量80%、100%和120%的苦參堿對照品，制備供試品溶液，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀中，記錄峰面積，結果見表5。

表5 回收率試驗結果

結果表明平均回收率為98.73%，RSD為1.01%，本方法回收率良好。

2.8 樣品測定 按照上述方法制備供試品溶液，參照上述色譜條件操作，測定苦參堿含量，結果見表6。

表6 膚疾洗劑中苦參堿含量測定

藥品的質量受藥材、生產設備、工藝等多種因素影響，根據5批膚疾洗劑的含量測定結果，在其含量平均值0.118mg·mL－1的基礎上，以70%轉移率計算，暫定膚疾洗劑中苦參堿含量限度為每1mL不得低于0.08mg。

3 結論

膚疾洗劑中的君藥苦參，含有多種生物堿，其中苦參堿、氧化苦參堿具有抗腫瘤、抗炎、抑制皮膚過敏反應等作用［2］。原質量標準中沒有含量測定項目，為了更好地控制產品質量，我們對苦參中的有效成分進行了含量測定。苦參堿含量測定方法有薄層掃描法［3］、高效液相色譜法［4］等，本產品采用高效液相色譜法對膚疾洗劑中苦參堿的含量進行了測定，結果表明方法準確、簡便、快速，平均回收率為 98.73%，RSD為1.01%。

試驗中曾考察了苦參堿不同的提取方法［4－5］，結果以萃取提取所得到的苦參堿含量高于蒸干后回流提取法，這與苦參堿遇熱不穩(wěn)定有很大關系。同時由于本品為復方制劑，所含成分復雜，為有效去除雜質，我們采用了萃取加過中性氧化鋁小柱方法，排除了干擾。實驗中［4，6－8］曾選用乙腈 － 無水乙醇 －3% 磷酸溶液(80∶10∶10)、甲醇 － 水 － 三乙胺(105∶95∶0.04)、0.016moL·L－1磷酸二氫鉀 － 0.016moL·L－1十二烷基硫酸鈉－乙腈(30∶30∶35)為流動相，結果前兩個條件未能達到滿意的分離效果，后者分離度好，陰性無干擾，所以實驗最終選用后者為流動相。

在含量測定研究過程中，發(fā)現膚疾洗劑中的氧化苦參堿幾乎檢測不到，可能是氧化苦參堿在藥品生產過程中分解或轉化為苦參堿，這與文獻報到是基本一致的［3，9－10］，所以后期沒有對氧化苦參堿進行含量測定的方法學研究。

［1］膚疾洗劑質量標準(標準編號WS3－B－2918－98).中華人民共和國衛(wèi)生部部頒標準《中藥成方制劑》第十五冊［S］.1998:111.

［2］苗抗立，張建中，董穎.苦參的化學成分及藥理的研究進展［J］.天然產物研究與開發(fā)，2000，13(2):69 －73.

［3］賈敏鴿，孫文基.苦參及其復方中苦參堿與氧化苦參堿的轉化研究［J］.藥物分析雜志，2003，23(2):90.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.化學工業(yè)出版社:188－189.

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