姜 波 周 萌 王 濤
(1.山東省濟南市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心,濟南 250002;2.山東省濟南市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心,濟南 250002;3.山東省濟南市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,濟南 250002)
畜產(chǎn)品質(zhì)量安全已成為我國乃至世界共同關(guān)注的話題。如何控制藥物殘留,確保畜產(chǎn)品質(zhì)量安全,保證人們吃到“放心肉”,監(jiān)督和檢測環(huán)節(jié)至關(guān)重要。畜產(chǎn)品質(zhì)量安全包括“肉、蛋、奶”等多方面,其中“瘦肉精”的添加使用備受關(guān)注。國家對“瘦肉精”的控制使用、監(jiān)督檢查和檢測方面都投入了大量人力、物力。監(jiān)督檢測部門需要更科學(xué)、高效、準(zhǔn)確的檢測方法來監(jiān)督監(jiān)測藥物殘留。下面介紹3種最常見的“瘦肉精”及其快速檢測方法。
“瘦肉精”包括很多種,一般最常見、最常添加的“瘦肉精”主要包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇3種,它們是一種人工合成的β-腎上腺素能興奮劑,具有擴張支氣管的作用。當(dāng)其應(yīng)用劑量達到治療量的5~10倍時,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉淀減少。因此,將其俗稱為“瘦肉精”。在畜牧業(yè)生產(chǎn)過程中,一些非法使用者將其作為一種生長促進劑添加到動物飼料中,用以改善酮體的品質(zhì),同時也造成食物中“瘦肉精”的殘留。當(dāng)人們食用含有這些殘留的產(chǎn)品后,會出現(xiàn)心動過速,低血鉀,低磷酸鹽血癥,肌肉震顫,頭暈,口干,失眠等癥狀,嚴重的會出現(xiàn)癱瘓。
快速檢測試紙分別是用鹽酸克倫特羅單克隆抗體、萊克多巴胺單克隆抗體和沙丁胺醇單克隆抗體為基礎(chǔ),根據(jù)現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)設(shè)計組裝。待測尿樣在層析過程中,樣品中的“瘦肉精”與NC膜上的檢測線(T線)上“瘦肉精”——蛋白偶聯(lián)復(fù)合物共同競爭金標(biāo)特異性抗體。以試紙上T線的顏色變化與質(zhì)控線(C線)比較判定樣品中的“瘦肉精”含量。
試紙條是一種快速篩選檢測的方法,能快速檢測出動物尿液中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇,對監(jiān)督檢查“瘦肉精”工作提供了便利條件。為防止“瘦肉精”的非法使用,保證食品安全提供了一種高效的檢測手段。
2.3.1 檢測步驟
(1)取出所需試紙置于平面,并與樣品對應(yīng)編號;
(2)在試紙加樣孔中加入100μL或3滴待檢樣品,開始記時;(3)5 min內(nèi)觀察記錄結(jié)果,10 min以內(nèi)判斷結(jié)果。
2.3.2 結(jié)果判定
(1)T線和C線都出現(xiàn)棕紅色條帶,結(jié)果為陰性,樣品中“瘦肉精”的含量小于其對應(yīng)的檢測靈敏度。
(2)T線不出現(xiàn)棕紅色條帶,C線出現(xiàn)一條棕紅色條帶,結(jié)果為陽性,樣品中“瘦肉精”的含量大于或等于其對應(yīng)的檢測靈敏度,其陽性結(jié)果可用酶聯(lián)免疫法進行進一步測定。
(3)若T線和C線都沒有出現(xiàn)棕紅色條帶,說明操作不當(dāng)或者是檢測試紙失效。
注:鹽酸克倫特羅的檢測靈敏度:3 ng/ml(ppb);萊克多巴胺的檢測靈敏度:8 ng/ml(ppb);沙丁胺醇的檢測靈敏度:10 ng/ml(ppb)。
結(jié)果如圖所示:
(1)由于動物尿樣樣品的個體差異,受年齡、品種、性別和養(yǎng)殖環(huán)境的影響,抽取動物尿液樣品有差異,在檢測過程中,可能會影響檢測線顏色偏淡,一般并不影響結(jié)果的判斷,只要檢測線出現(xiàn)條帶,不論深淺,就可以判定為陰性。
(2)澄清的動物尿樣樣品不需要特殊的處理,可以直接用于檢測;如果尿樣中污染有雜物或呈渾濁狀時必須經(jīng)離心或者過濾后再用于檢測,嚴重污染或渾濁者不可用于檢測。
(3)檢測時,檢測溫度、濕度和檢測時間都會對實驗結(jié)果有所影響。試驗過程中,環(huán)境的溫度盡量控制在20℃左右進行;試紙條從拆封到檢測,時間盡量控制在每個樣品10 min之內(nèi),以保證試紙條不受潮,減少對檢測結(jié)果的影響因素??焖贆z測試紙條一般存放溫度控制在4~30℃之內(nèi),密封、干燥、避光存放,嚴防受潮。
(4)如果動物尿液樣品為冷凍狀態(tài),應(yīng)使其化凍回溫再進行檢測,以免影響檢測結(jié)果,必須保證尿液樣品在常溫之內(nèi)。
(5)尿液樣品吸管不可混用,以免交叉感染;如果尿樣中污染有雜物或呈渾濁狀時要經(jīng)離心或者過濾后再用于檢測,嚴重污染或渾濁者不可用于檢測。
(6)由于各種原因,動物尿樣樣品檢測時有可能會出現(xiàn)假陽性,對可疑樣品或陽性樣品,可重復(fù)實驗(每支試紙只能使用1次),也可用酶聯(lián)免疫法做進一步確定。實驗后的廢棄物要妥善處理。
動物尿液中“瘦肉精”快速檢測的優(yōu)勢是動物尿樣不需要特殊處理,可直接用于檢測,監(jiān)督檢查人員和檢測人員可進行現(xiàn)場檢測,快速高效判斷結(jié)果,節(jié)省大量人力、物力,提高了工作效率。但由于是快速檢測,其結(jié)果受溫度、濕度等環(huán)境和其他影響較多,若出現(xiàn)陽性或假陽性結(jié)果,還需做進一步實驗確定。