李寶春

（安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽(yáng)233100）

黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩的干燥根。其性寒味苦，歸肺、胃、膽、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效。中醫(yī)臨床用于治療肺熱咳嗽、高熱神昏、肝火頭痛、目赤腫痛、濕熱黃疸、瀉痢、胎熱不安等證［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芩具有抗菌、消炎、降壓、利尿、降血脂、抗變態(tài)反應(yīng)等作用，這些作用與黃芩中含有多種黃酮類衍生物有關(guān)［2－3］，如黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、木蝴蝶素等，其中黃芩苷為主要有效成分之一。黃芩有多種炮制方法［4］，不同方法炮制的黃芩飲片中黃芩苷含量存在一定差異［5］。本文采用高效液相色譜法分別測(cè)定生黃芩、酒炒黃芩、焦黃芩、黃芩炭中黃芩苷的含量，以比較不同炮制方法對(duì)黃芩中黃芩苷含量的影響。

1 材料

1.1 藥品及試劑 黃芩飲片，購(gòu)自安徽省鳳陽(yáng)縣回春靈大藥房，由安徽科技學(xué)院中藥教研室老師鑒定；炮制品按《中華本草》所規(guī)定的炮制方法炮制；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110715－200212。甲醇（色譜純），美國(guó)Tedia公司生產(chǎn)，批號(hào)：Lot305064；甲醇（分析純），徐州試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：040303；磷酸（分析純），上海興達(dá)化工試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：030208；水為超純水。

1.2 儀器 Waters 1525高效液相色譜儀（包括Waters 2484型紫外檢測(cè)器，Waters Breeze數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)），美國(guó) Waters公司制造；JL－360臺(tái)式超聲波清洗器，J ＆ L上海分公司制造；FA1004電子天平，上海精科天平廠制造；HH－4數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州國(guó)華電器有限公司制造；Millipore超純水器，法國(guó)Millipore Molsheim公司制造；368－A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海向陽(yáng)無(wú)線電元件廠制造；AG135電子天平，瑞典 Metter Toledo公司制造；粉碎機(jī)，安徽省明光市光明電器廠制造。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［6］色譜柱 Hypersil C18（5μm，150 mm×4.6mm id）；流動(dòng)相［7－9］：甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1mL／min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。

2.2 樣品溶液的制備

2.2.1 黃芩及其炮制品的制備（1）生黃芩：稱取干燥的黃芩飲片500g，去除雜質(zhì)和霉變品，篩去灰屑，備用。（2）酒黃芩：稱取生黃芩飲片100g，用10 mL黃酒拌勻，悶潤(rùn)至透，約6h左右，置熱鍋內(nèi)，用文火炒至深黃色時(shí)，取出攤開(kāi)放涼，篩去灰屑，備用。（3）焦黃芩：稱取生黃芩飲片100g，置熱鍋內(nèi)用中火炒至焦黃色，取出攤開(kāi)放涼，篩去灰屑，備用。（4）黃芩炭：稱取生黃芩飲片100g，置熱鍋內(nèi)，用武火炒至表面焦黑色，內(nèi)部焦黃色時(shí)，噴淋清水少許，滅盡火星，取出涼透，備用。

2.2.2 黃芩及其炮制品的粉碎 將生黃芩飲片和炮制好的黃芩飲片烘干，粉碎，過(guò)20目篩，待用。

2.2.3 樣品溶液的制備 稱取生藥粉末（60℃干燥4h）1g，置燒瓶中，加50%甲醇50mL，水浴回流加熱1h，趁熱過(guò)濾，以適量50%甲醇洗滌容器和殘?jiān)鼉纱危瑸V液全部并入100mL容量瓶中，然后再以50%甲醇補(bǔ)至100mL作為儲(chǔ)備液。精密吸取1.0 mL，置10mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，然后過(guò)0.45μm濾膜兩次，得黃芩生藥樣品溶液Ⅰ。其他3種炮制品也分別按生藥樣品溶液Ⅰ的制備方法處理，得酒炒黃芩樣品溶液Ⅱ、焦黃芩樣品溶液Ⅲ和黃芩炭樣品溶液Ⅳ。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品1mg，用50%甲醇溶解定容至10mL，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液A（0.1mg／mL）。取標(biāo)準(zhǔn)品溶液A適量，分別稀釋2倍、4倍、10倍、20倍，得標(biāo)準(zhǔn)品溶液 B（0.05mg／mL）、C（0.025mg／mL）、D（0.01mg／mL）、E（0.005mg／mL），均過(guò)0.45μm 濾膜1次，然后分別吸取A、B、C、D、E各20μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，峰面積積分值分別為12 996、6 315、3 179、1 312、658。以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y＝6391.863X＋9.651，r＝0.9986，線性范圍為0.1～2.0μg?？瞻捉M、標(biāo)準(zhǔn)品及樣品的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品和樣品的高效液相色譜圖

2.4 精密度試驗(yàn) 取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液C，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次20μL，記錄峰面積分別為3 212、3 178、3 226、3 210、3 189，平均峰面積為3 203，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.60%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取樣品溶液Ⅰ20μL，每1.5h進(jìn)樣1次，共測(cè)定5次，記錄峰面積分別為8 632、8 709、8 669、8 605、8 674、8 658，平均峰面積為8 658，RSD為0.46%，表明樣品在7.5小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按樣品提取方法分別制備5份黃芩生藥樣品溶液，然后各取20μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積分別為8 693、8 637、8 715、8 667、8 612，平均峰面積為8 667，RSD為0.48%。

2.7 樣品含量測(cè)定 分別吸取樣品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各20μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算樣品溶液中黃芩苷含量，再重復(fù)操作2次，記錄結(jié)果，見(jiàn)表1。

由試驗(yàn)結(jié)果可知，不同炮制方法對(duì)黃芩中黃芩苷成分的影響較大，生黃芩、酒炒黃芩、焦黃芩、黃芩炭中黃芩苷的含量依次降低。

表1 黃芩及其炮制品中黃芩苷的含量（%）

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取5份已知黃芩苷含量的生藥粉末0.1g，分別加入精密稱定的黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品0.55mg，然后按樣品溶液制備方法處理，在同樣的色譜條件下測(cè)定其中黃芩苷的含量，并計(jì)算回收率和RSD，記錄結(jié)果，見(jiàn)表2。

表2 生黃芩中黃芩苷的回收率

3 討論

3.1 在一定溫度和濕度條件下，黃芩苷可被黃芩酶酶解成葡萄糖醛酸和黃芩苷元，而黃芩苷元不穩(wěn)定，易被氧化。

3.2 黃芩酶以冷水浸潤(rùn)時(shí)其活性最大，故炮制前不能用冷水浸潤(rùn)處理，應(yīng)沸水煮10min左右，以殺酶保苷。

3.3 黃芩苷遇光、熱易分解變化。因此，提取時(shí)應(yīng)控制受熱溫度、縮短受熱時(shí)間，提取液應(yīng)低溫避光保存。

3.4 測(cè)定黃芩苷含量，須選用快速準(zhǔn)確的測(cè)定分析方法－高效液相色譜法，既提高了黃芩苷的分離效果，與紫外分光光度計(jì)測(cè)定法相比，試驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精密度也得到提高。

3.5 黃芩苷有一定的脂溶性。在提取時(shí)采用醇作溶劑，大大增加了黃芩苷的溶出率。文獻(xiàn)報(bào)道黃芩中黃芩苷的提取，可用70%乙醇［10］或50%甲醇［8］作溶劑，前者回流提取時(shí)間約3h，后者約需1h，由于本試驗(yàn)所用流動(dòng)相中含有甲醇，所以選用50%甲醇為提取溶劑。

3.6 甲醇－磷酸水溶液為分離黃芩苷常用的流動(dòng)相，通過(guò)試驗(yàn)得出0.04%的磷酸水溶液即可有效分離黃芩苷，此法簡(jiǎn)便可靠，故本試驗(yàn)采用甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）作為流動(dòng)相，效果較好。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，生黃芩飲片中黃芩苷含量最高，酒炒黃芩、焦黃芩、黃芩炭飲片中黃芩苷含量依次下降，表明不同的炮制方法對(duì)黃芩中黃芩苷的含量有很大的影響。

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