紫外分光光度法測定西藏野生和人工種植喜馬拉雅紫茉莉中總黃酮含量△

索朗其美 達(dá)瓦潘多 劉 青 央 美 頓珠次仁 仁 增

(西藏藏醫(yī)學(xué)院，西藏 拉薩 850000)

喜馬拉雅紫茉莉(巴朱)為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉 Mirabilishimalaica(Edegw.)Heim.的干燥根［1］，該藏藥具有溫腎、益腎滋補(bǔ)、生肌、利尿、排石等功效，用于胃寒、腎寒、下身寒、陽萎浮腫等［1－3］。喜馬拉雅紫茉莉作為藏藥使用歷史悠久，在藏醫(yī)藥名著《四部醫(yī)典》和《晶珠本草》均有記載［2，4］。目前國內(nèi)外對紫茉莉根的研究主要集中在紫茉莉蛋白(MAP)上，對其它化學(xué)成分研究較少。除報(bào)道紫茉莉根含有多種甜菜素、氨基酸、有機(jī)酸、三萜、甾體、脂肪酸、葫蘆巴堿(Trigonelline)和半乳糖等之外，Yang，Shu－Wei等從其植物細(xì)胞培養(yǎng)中分離得到多個(gè)黃酮和魚藤酮類成分，并發(fā)現(xiàn)它們對真菌有一定的抑制作用［5、6］，目前已發(fā)現(xiàn)的紫茉莉化學(xué)成分中以黃酮類為主，還有一些其他成分［7］。本研究采用紫外分光光度法對西藏野生和人工種植喜馬拉雅紫茉莉中總黃酮的含量中總黃酮含量進(jìn)行了測定，旨在為西藏人工種植喜馬拉雅紫茉莉的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

梅特勒AE20O電子天平;ASI0200BDT超聲波清洗器(250w，天津奧特賽恩斯儀器有限公司);UV－2100紫外可見分光光度計(jì)(北京萊伯泰科技儀器有限公司)。甲醇(色譜純)、亞硝酸鈉(分析純)、硝酸鋁(分析純)、氫氧化鈉(分析純);優(yōu)普超純水機(jī)(蒸餾水自制)。蘆丁(中國藥品生物制品檢定所，批號:110811－200502)。喜馬拉雅紫茉莉野生和人工種植品由西藏藏醫(yī)學(xué)院研究所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備:精確稱取在105℃條件下干燥至恒定質(zhì)量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品14.48mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇搖勻，稀釋至刻度，得濃度為0.2896mg/ml的蘆丁對照品溶液，低溫保存，備用。

2.2 供試品溶液的制備精確稱取喜馬拉雅紫茉莉粉末約1.0000g，置于250mL容量瓶中，加入 200mL甲醇，20℃超聲處理(功率250W，頻率55kHz)超聲提取30min共3次。靜置后定容。吸上清液2mL，用甲醇定容到10mL容量瓶中，即得樣品溶液。

2.3 測定波長的選擇:精確量取對照品溶液和供試品溶液各0.5mL，分別置于10mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.5mL，搖勻，放置 6min，加入 10%硝酸鋁溶液 0.5mL，搖勻，放置6min，加入10%氫氧化鈉溶液3.0mL，再加入水至刻度，搖勻，放置15min，在波長為200～600nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果2種溶液均在328nm、352nm處有最大吸收，其他成分對測定無干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制［8］:分別精確吸取蘆丁對照品溶液0、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0(mL)置于 10mL 容量瓶中，向容量瓶中依次加入3.0mL蒸餾水，依次加入5%亞硝酸鈉溶液0.5mL，搖勻，放置 6min，加入 10%硝酸鋁溶液 0.5mL，搖勻，放置6min，加入10%氫氧化鈉溶液3.0mL，加入蒸餾水至刻度，搖勻，放置15min，進(jìn)樣，于波長為352nm處測定吸收值(用不含蘆丁的空白管對照調(diào)零)。得回歸方程:Y=21.262952x+0.006124(r=0.9991)，結(jié)果表明，測定蘆了濃度在16～80范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

［Abs］=KO+KI*［C］+K2*［C］2

K0=0.006124 K1=21.262952 K2=0.000000 R=0.999132

Y=21.262952x+0.006124(r=0.9991)

2.5 精確度實(shí)驗(yàn):取對照品溶液于352nm波長處測定吸收值5次.結(jié)果示平均吸收值為0.3658，RSD為0.91%(n=5)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn):取供試品溶液，于 0、1、2、4、8、24(h)時(shí)測定吸收值。結(jié)果表明，總黃酮與鋁離子形成的紅色絡(luò)合物在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為2.056%(n=6)。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn):精密吸取5份樣品溶液1mL于10mL容量瓶內(nèi)，按以上方法制備并進(jìn)行含量測定，重復(fù)3次，考察其重現(xiàn)性，測定結(jié)果表明RSD為1.35%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn):分別精密吸取已知濃度的樣品溶液各3組(2mL/組)，各組分別精密加入已知含量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0.5mL(組 1)、1.0mL(組 2)、2.0mL(組 3)，按照“蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”方法顯色后，以不含樣品的溶液作為空白對照，進(jìn)行含量測定，重復(fù)3次，并計(jì)算回收率，結(jié)果:加樣回收率為100.92%，RSD為2.10%

2.9 樣品的測定:精確稱取研碎的樣品野生原藥材(1.0092g)、人工種植原藥材(1.0072g)，各置于250mL容量瓶中，按照2.2項(xiàng)下方法制備樣品供試液，同法平行制備3份。精確吸取供試品溶液2mL，按照2.4項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，在波長為352nm處測定供試液的吸收值，按回歸方程進(jìn)行計(jì)算處理，總黃酮占生藥百分比野生7.53%、人工種植 9.53%。

表4 樣品測定結(jié)果(n=6)

3 討論

黃酮類化合物廣泛分布于植物界，而且生理活性多種多樣，目前研究主要生理活性表現(xiàn)在:(1)對心血管系統(tǒng)的作用;(2)抗肝臟毒作用;(3)抗炎作用;(4)雌性激素樣作用;(5)抗菌及抗病毒作用;(6)瀉下作用;(7)解痙作用。對于西藏喜馬拉雅紫苿莉野生和人工種植藥材的研究中，對其所含黃酮類成分的藥理作用目前研究甚少，以蘆丁為對照品，以硝酸鋁、亞硝酸鈉及氫氧化鈉為顯色劑，利用紫外分光光度計(jì)對西藏喜馬拉雅紫茉莉野生和人工種植藥材中總黃酮的含量進(jìn)行測定的方法具有簡便易行及結(jié)果穩(wěn)定可靠，為下一步野生品和人工種植藥材的研究，提供基礎(chǔ)理論。本實(shí)驗(yàn)方法線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R=0.9991，精密度，重現(xiàn)性、回收率均符合要求，穩(wěn)定性好，以此法擬制訂的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能有效的控制其質(zhì)量。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).藏藥［S］.第一冊.1995:104

［2］中國科學(xué)院西北高原生物研究所.藏藥志［M］.西寧:青海人民出版社，1991:461

［3］青海省藥品檢驗(yàn)所，青海省藏醫(yī)藥研究所.中國藏藥［M］.第一卷.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1996:303

［4］宇妥.元丹貢布等著，馬世林等譯.四部醫(yī)典［S］.1987:165

［5］王琳，楊德成，等.紫苿莉?qū)僦参锏幕瘜W(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展［J］.中國民族民間醫(yī)藥，31－33

［6］鄺嘉樂，張德志.紫茉莉根化學(xué)成分研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，23(1):1 －2

［7］鄺嘉樂.紫茉莉根治療糖尿病化學(xué)成分研究［D］.2007年:3

［8］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［M］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社出版，2005.