正交試驗法研究酸牛奶制石決明的炮制工藝△

陳少麗 王磊磊 張志杰 張艷玲* 朝格圖

(1.內(nèi)蒙古大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，呼和浩特 010021; 2.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

石決明為鮑科動物雜色鮑Haliotis diversicolor Reeve、皺紋盤鮑H.discus hannai Ino、羊鮑H.ovina Gmelin、澳洲鮑H.ruber(Leach)、耳鮑H.asinina Linnaeus或白鮑H.laevigata(Donovan)的貝殼［1］，其性寒，味咸，歸肝經(jīng)，具有平肝潛陽、清肝明目的功能，主要用來治療頭痛眩暈、目赤翳障、視物昏花、清盲雀目等癥［2－4］。由于石決明為動物的貝殼，質(zhì)地堅硬，難于粉碎和煎出有效成分，因此多炮制后使用。2010年版藥典收載的為明煅法。然而煅法溫度太高，使石決明含有的多種氨基酸及其他少量的有機成分部分或完全損失。因此，需要更好的炮制方法，使之既能易于粉碎和煎出有效成分，又不會使其所含成分有太多損失［5－7］。牛奶炮制石決明是我國民族醫(yī)在長期醫(yī)療實踐過程中形成的獨特的炮制方法。牛奶不僅含有豐富的營養(yǎng)價值，而且牛奶是一種膠體溶液，具有一定的特殊性。牛奶用于石決明的炮制，可以起到凈化藥材、便于粉碎、易于吸收、提高臨床療效的作用［8］。然而，牛奶炮制石決明的工藝缺乏科學(xué)的規(guī)范，而且牛奶炮制石決明的作用機理并不清楚。

牛奶炮制石決明的過程涉及諸多因素，如牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度和干燥時間等。本論文擬利用正交實驗設(shè)計方法，以酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度和干燥時間為考察因素，利用原子吸收分光光度法測定Ca2+含量，以石決明酸牛奶各炮制品中總Ca2+含量、水煎液Ca2+含量以及人工胃液Ca2+溶出量為評價指標(biāo)，對酸牛奶炮制石決明工藝進行優(yōu)化，以期對酸牛奶炮制石決明的機理進行初步闡釋，并為規(guī)范蒙藥石決明的炮制工藝提供參考依據(jù)。

1 實驗儀器與材料

1.1 藥材:石決明(購于呼和浩特市京遠大藥房)，挑出雜質(zhì)，用篩子過濾，選出10～40目的樣品，備用。

1.2 儀器:AA7003型原子吸收分光光度計(北京東西電子);DF－101XP集熱式測速磁力攪拌器(金壇正基);QE－200克萬能粉碎機(浙江屹立);AR224CN電子天平(美國奧豪斯);電熱恒溫干燥箱(天津華北)。

1.3 試劑:鈣單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW(E)080118，標(biāo)準(zhǔn)值1000μg/mL，中國計量科學(xué)研究院);胃蛋白酶(豬源，規(guī)格型號1:3000，瓶裝25g，上海晶純實業(yè)有限公司)。

2 試驗方法

2.1 炮制工藝考察因素及水平:選擇酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度和干燥時間4個因素，每個因素各選3個水平，見表1。

2.2 試驗方法

2.2.1 炮制方法:取10～40目石決明樣品，稱取。根據(jù)表1設(shè)計的實驗條件，分別將石決明和酸牛奶按一定的質(zhì)量比混合，放入錐形瓶中，在集熱式水浴加熱，溫度為80℃，。隨后將樣品按一定的溫度和時間在烘箱中進行干燥。

表1 酸牛奶制石決明正交實驗因素水平設(shè)計

2.2.2 石決明生品與制品中總Ca2+含量的測定

2.2.2.1 分別移取 300、400、500、600、700、800μL 的 Ca2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容至25mL，配置系列濃度Ca2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定其吸光度值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程:Y=40.0729X+1.3868，r=0.9994。

2.2.2.2 分別稱取石決明各酸牛奶炮制品約1g，置于100mL燒杯里，先加入5mL蒸餾水，再加入10mL稀鹽酸，固體表面起泡沫，不斷攪拌。待反應(yīng)完畢后，用漏斗過濾至25mL比色管里，再向燒杯內(nèi)加入2次5mL蒸餾水洗滌燒杯內(nèi)剩余固體后，過濾至比色管里，定容至25mL。

2.2.2.3 分別移取上述溶液各 25μl，定容至 25mL。測定各樣品的吸光度值，根據(jù)上述建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各樣品中Ca2+的含量(表2)。

表2 酸牛奶炮制石決明正交實驗Ca2+含量測定結(jié)果

2.2.3 石決明生品與制品水煎液Ca2+含量的測定

2.2.3.1 分別移取 0、100、200、300、400、500μl的 Ca2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容至25mL，配置系列濃度Ca2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定其吸光度值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程:Y=140.7537X－29.0038，r=0.9997。

2.2.3.2分別稱取石決明各制品約1g，置于100mL燒杯中，加入20mL蒸餾水，水浴加熱40min，適時加入蒸餾水，然后冷卻過濾至25mL比色管里。再加入10mL蒸餾水，條件不變，繼續(xù)加熱20min.冷卻，過濾，用適量蒸餾水洗滌小燒杯，將比色管內(nèi)液體定容至25mL。

2.2.3.3 分別移取上述水煎液各10mL，定容至25mL。測定各樣品的吸光度值，根據(jù)上述建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各樣品中Ca2+的含量(表2)。

2.2.4 石決明生品與制品人工胃液Ca2+溶出量的測定

2.2.4.1 分別移取 0、50、100、150、200、250μl的 Ca2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容至25mL，配置系列濃度Ca2+標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定其吸光度值，測得線性回歸方程:Y=33.0035X –0.2377，r=0.9987。

2.2.4.2 分別稱取石決明各制品約 2.5g，用 15mL 人工胃液在36.5℃左右的恒溫水浴箱里反應(yīng)20分鐘，過濾至25mL比色管，定容。

2.2.4.3 分別移取100μL液體樣品，定容至25mL。測定各樣品的吸光度值，根據(jù)上述建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到各樣品中Ca2+的含量(表2)。

3 結(jié)果與討論

3.1 石決明酸牛奶制品中總Ca2+含量分析。石決明酸牛奶制品中總Ca2+含量見表2所示。從表2可以直觀看出各因素的影響規(guī)律是:D＞A＞C＞B，最佳炮制工藝為:A1B3C3D1?？芍?，在酸牛奶炮制樣品與稀鹽酸反應(yīng)的實驗中，對實驗影響最大的因素依次是干燥時間、酸牛奶用量、干燥溫度、煎煮時間。又由A、D組的P ＜0.05(表3)，可知酸牛奶用量和干燥時間對實驗結(jié)果有顯著性影響。

3.2 石決明酸牛奶制品水煎液Ca2+含量分析。石決明酸牛奶制品水煎液Ca2+含量結(jié)果如表2所示。從表2可以直觀看出各因素的影響規(guī)律是:A＞D＞B＞C，最佳炮制工藝為:A3B1C3D2?？芍谒逡赫糁髮嶒炛?，對實驗影響最大的因素依次是酸牛奶用量、干燥時間、煎煮時間、干燥溫度。又由方差分析表，A、B、C、D 組的P ＞0.05(表3.5)，可知酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度、干燥時間對實驗結(jié)果沒有顯著性影響。

3.3 石決明酸牛奶制品人工胃液Ca2+溶出量分析。石決明酸牛奶制品人工胃液Ca2+溶出量如表2所示。從表2可以直觀看出各因素的影響規(guī)律是:D＞A＞B＞C，最佳炮制工藝為:A1B2C3D3。可知，在酸牛奶炮制樣品與人工胃液反應(yīng)的實驗中，對實驗影響最大的因素依次是干燥時間、酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度。又由方差分析表，A、B、C、D組的P ＞0.05(表3.7)，可知酸牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度、干燥時間對實驗結(jié)果沒有顯著性影響。

表3 酸牛奶炮制石決明工藝方差分析表

4 結(jié)論

本研究利用正交試驗法，對酸牛奶炮制石決明的4個因素(牛奶用量、煎煮時間、干燥溫度、干燥時間)進行了考察，以石決明酸牛奶制品中總Ca2+含量、水煎液Ca2+含量、人工胃液Ca2+溶出量作為評價指標(biāo)，利用原子吸收分光光度法對其分別進行了測定。對測定結(jié)果分別進行直觀分析和方差分析，結(jié)果顯示，在酸牛奶炮制石決明的工藝條件中，酸牛奶用量A、干燥時間D對結(jié)果會產(chǎn)生主要的影響。尤其是石決明樣品與稀鹽酸的反應(yīng)中，A、D為顯著性因素，相對而言，在整個實驗中，煎煮時間B、干燥溫度C對測定Ca2+含量的影響比較小。從而，確定酸牛奶炮制石決明的最佳工藝條件為:石決明與酸牛奶用量(g:g)為1:1，煮制6h，于 180℃烘干 1h。

石決明主含碳酸鈣，尚含氨基酸等其他多種有機和無機成分。本研究只考察了酸牛奶炮制前后石決明中主成分Ca2+含量的變化。酸牛奶炮制前后石決明的其他有機和無機成分發(fā)生了哪些變化，其藥理作用和臨床效果又有了哪些改變，這些都有待我們進一步探索。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版第一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010，84－85.

［2］肖培根.新編中藥志 (第四卷)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002，48－55.

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［5］趙澤義，胡 健.淺談石決明的煅制法［J］.蚌埠醫(yī)藥，1995，13(4):21.

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［8］田華詠.中國民族藥炮制集成［M］.北京:中醫(yī)古籍出版社，2000，130－131.