抗乙型肝炎病毒中藥活性成分研究進展

金乾興，周 峰(.浙江省中醫(yī)院，浙江杭州30006;2.浙江中醫(yī)藥大學藥學院，浙江杭州30053)

病毒性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)引起的一種病程長，治愈困難的疾病，抗病毒治療是其關鍵。核苷類藥物如拉米夫定雖具較好療效，但停藥后復發(fā)率較高。干擾素作為目前治療乙肝首選藥物，也僅有30% ～40%的患者長期有效率。從中藥及天然藥物中尋找安全有效的抗乙型肝炎病毒活性成分是防治病毒性乙型肝炎的一個重要途徑。近年來國內(nèi)外學者對中藥及天然藥物進行了廣泛的抗HBV活性篩選，發(fā)現(xiàn)有許多中藥具有較強的抗HBV活性，如葉下珠Phyllanthus urinaria L.醇提取物在體外有較強的滅活HBV抗原作用［1］。采用酶聯(lián)免疫吸附檢測技術對300種中草藥水提物進行抗乙型肝炎病毒表面抗原的實驗研究中，夏枯草、荔枝核、穿破石、蘇木、蛇總管、爬山虎、吳茱萸、半枝蓮等均表現(xiàn)了較好作用［2］。張正等采用抑制HBV-DNA及降解HBV-DNA的體外實驗法，對臨床治療肝病用的60種中藥進行了研究，發(fā)現(xiàn)其中對DNA抑制率在50%以上的有茵陳、木瓜、北野菊、仙鶴草、夏枯草、梔子等28種。對部分中藥降解HBVDNA的實驗研究顯示，能降解25%以上定量HBVDNA的中藥有蒲公英、木瓜、蚤休、夏枯草、紫草等［3］。用ELISA法對250種中草藥水提物進行抗HBeAg的實驗研究，共篩選出7種有效藥物，以試驗的藥效指數(shù)排列，依次為丹參、皂莢、黃連、尋骨風、杜仲、葫蘆和藕節(jié)［4］。我國具有豐富的中草藥資源，在活性篩選的基礎上，對具有抗HBV活性的中草藥進行進一步的活性成分及作用機制進行進一步的深入研究，是獲得高效低毒的抗HBV候選藥物的一條重要途徑。本文對近年來抗乙型肝炎病毒的中藥活性成分進行綜述。

1 皂苷

1.1 甘草酸 甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖，具有補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥的功效。并被用于病毒性肝炎的治療。其主要的活性成分為甘草酸，其抗病毒的機理在于阻礙HBsAg的細胞內(nèi)過程，阻礙肝細胞HBV相關抗原的遞呈，使肝細胞的破壞抑制，并能增強機體免疫力，使唾液酸清除HBsAg的免疫原性增加［5］。

1.2 黃芪甲苷 黃芪甲苷為中藥黃芪的主要成分，具有抗腫瘤、抗疲勞以及抗病毒等多種藥理作用，含量約3%，體外實驗表明黃芪甲苷具有一定程度的抗 HBV作用，在 100 μg/ml用藥 9 d后，對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制率分別為23.6% 和22.9%，抑制作用優(yōu)于同組100 μg/ml的拉米夫定［6，7］。

1.3 土貝母皂苷 周艷萌等［8，9］通過體外實驗得出不同濃度的土貝母皂苷對HBsAg和HBeAg的分泌均有一定的抑制作用，藥物作用到48 h時對HB-sAg和HBeAg的抑制作用最強(P＜0.01)，且對HBeAg的抑制作用強于拉米夫定，在0.01 μg/ml濃度下無明顯細胞毒性作用，用DHBV-DNA陽性雛鴨做動物模型的體內(nèi)實驗，土貝母皂苷在1 mg/(kg·d)濃度下具有保肝作用。

1.4 六月青總皂苷 體外抗HBV活性試驗顯示，六月青總皂苷對HepG2.2.15細胞HBsAg、HBeAg及HBV-DNA的分泌均具有明顯的抑制作用，其中對 HBsAg 的 IC50為 9.45 μg/ml，而對細胞的 IC50為349.51 μg/ml，屬于低毒有效成分［10］。

1.5 荔枝核總皂苷 蔣蔚峰等對荔枝核總皂苷體外抗HBV的作用進行了研究，結(jié)果表明，荔枝核總皂苷均具有一定的抗HBV活性，對HepG2.2.15細胞分泌的 HBsAg、HBeAg及細胞外 HBV-DNA的IC50分別為 0.096、0.085 和 0.128 mg/ml［11］。

1.6 絞股藍總皂苷 從葫蘆科植物絞股藍Gynostemma penmphyllum(Thunb.)Makino中提取的有效部位，能抑制GPT上升和肝過氧化脂質(zhì)的增加，降低大鼠急性肝損傷，對肝細胞變性，炎性浸潤，壞死等均有明顯保護作用，促進肝細胞的再生。對免疫低下動物有顯著的免疫作用，降低小鼠溶血素含量，提高IGG，IGM含量，從而起到抗HBV 的作用［12］。

2 黃酮

2.1 野漆樹雙黃酮 Zembower等研究發(fā)現(xiàn)自漆樹科野漆Rhus succedameu分離得到的雙黃酮具有強烈抑HBV DNA復制作用，其半數(shù)有效濃度為0.25～1 mol/L，與拉米夫定和噴昔洛韋有明顯協(xié)同抗HBV作用，且高濃度時也未發(fā)現(xiàn)細胞毒性［13］。

2.2 黃芩素 黃芩素是中藥黃芩Scutellaria baicalensis的主要有效成分。Guo等［14］通過研究，證實了黃芩素對 HepG2.2.15細胞分泌 HBsAg、HBeAg及HBV DNA的抑制作用，其對 HBsAg及HBeAg 的 IC50均為 0.4 pg/ml，而 50 μg/ml黃芩素作用9 d后，其對HBV DNA的抑制作用要優(yōu)于同組10 μg/ml劑量拉米夫定。Huang通過測定對該細胞的HBV-DNA聚合酶的作用，認為黃芩中的漢黃芩素能抑制 HBsAg［15］。

2.3 瑞香狼毒 瑞香狼毒Stellera chamae jasme中的黃酮類化合物雁皮素A(sikokianin)、槲皮素和狼毒色原酮(chamaechromone)對HepG 2.2.15細胞分泌的HBsAg有較高抑制率，分別為71.9%、64.3%、34.0%，但是對HBeAg的抑制率較低，其中雁皮素無作用［16］。

2.4 芒果苷 芒果苷具有保肝利膽、平喘鎮(zhèn)咳、抗病毒等作用。體外實驗研究表明芒果苷對HepG 2.2.15細胞分泌的HBsAg和HBeAg有抑制作用，其半數(shù)細胞毒濃度為250 μg/ml，最大無毒濃度為125 μg/ml，芒果苷對2.2.15細胞HBeAg分泌有明顯抑制作用，其半數(shù)有效劑量為 37.6 μg/ml［17］。抑制2.2.15細胞中p-β-arrestins水平是芒果苷抗HBV和免疫調(diào)節(jié)作用的可能機制之一［18］。

2.5 水芹黃酮提取物 中藥水芹具有很好的保肝抗炎作用，Wang等［19］對其中的黃酮類化合物進行了提取。研究發(fā)現(xiàn)，水芹黃酮提取物對HBV具有很好的抑制作用，低劑量作用9 d，即可明顯抑制HepG2.2.15細胞HBsAg及HBeAg的分泌，其IC50分別為0.64 mg/ml和0.30 mg/ml。

2.6 荔枝核總黃酮 荔枝核總黃酮具有抗乙型肝炎病毒作用，能抑制HepG2.2.15細胞系HBsAg與HBeAg表達［20，21］。另有體外試驗表明荔枝葉的水提取物也有明顯的抗乙肝病毒作用，其生物活性物為木脂素苷類及黃酮苷類成分［22］。

3 香豆素

從狹葉五味子Schisandra lancifolia中分離得到化合物扁枝杉香豆素(phyllocoumarin)和表兒茶酸具有一定的體外抗HBV活性，其細胞毒性非常小，IC50均大于200μg/ml。扁枝杉香豆素具有較強的抑制HBsAg和HBeAg分泌作用。陽性對照藥物阿德福韋酯也抑制HBsAg和HBeAg分泌，但在相同質(zhì)量濃度(1.6 μg/ml)下其抑制作用較扁枝杉香豆素弱［23］。

4 生物堿

4.1 苦參堿 豆科植物苦參Sophora flavescens中的苦參堿和氧化苦參堿有很強的抗病毒作用?？鄥A可減輕肝細胞變性、壞死，促進肝細胞的再生和修復，具有明顯的保肝作用［24］?？鄥⑺厥菑闹兴幙喽棺拥母刑崛〉挠行С煞郑渲?8%以上為氧化苦參堿，用于治療慢性乙肝，能抑制膠原纖維增生，具有抗大鼠免疫性肝損傷作用和抗纖維化作用，能保護肝細胞尤其是保護膜性結(jié)構，提高大鼠血清SOD活性，降低ALT，LN，HA水平，還可增加膽汁回流，消退黃疸?？梢种凭W(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，遲發(fā)型超敏反應，血清溶血素的生成具有免疫調(diào)控作用。體外實驗表明氧化苦參堿能直接抑制HepG2.2.15細胞內(nèi)HBV-DNA的復制，并且呈濃度依賴性。氧化苦參堿處理細胞后，鴨原代肝細胞培養(yǎng)上清及細胞內(nèi)的DHBV核酸明顯低于病毒感染對照組，病毒抑制率達91.6%，在病毒感染同時加藥對病毒的抑制率可達98.5%。感染后持續(xù)用藥能使不同培養(yǎng)天數(shù)的鴨肝細胞內(nèi)的DHBV核酸降低60.5%～96.6%;氧化苦參堿與DHBV共孵育后，可以使病毒感染力下降69.6%?？鄥⑺卦?50 mg/kg組對乙型肝炎病毒感染有可重復的顯著治療效果，300 mg/kg 組有較好的效果，75 mg/kg 組無抑制作用［25，26］。

4.2 槐定堿與槐果堿 槐定堿與槐果堿主要來源于豆科植物苦豆草Sophora alopecuroidos L.的地上部分，其在結(jié)構上只相差2個H原子。聶紅明等［27］對槐定堿與槐果堿體外抗HBV的活性研究結(jié)果表明，槐定堿對HBsAg和HBeAg的IC50分別為0.339 mmol/L和0.356 mmol/L，且毒性較低。而槐果堿對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg的IC50只有4.9 μmol/L，雖其對HBeAg的抑制活性不高，但明顯優(yōu)于拉米夫定［28］。

4.3 漢防己甲素 漢防己甲素是從防己Stephania tetrandra中提取的一種生物堿，它能抑制肝細胞內(nèi)DNA及膠原合成，不同劑量的漢防己甲素對四氯化碳所致肝纖維化大鼠治療后證實可防止肝損傷后肝細胞變性壞死，抑制成纖維細胞增生，減少ECM合成，而抗肝纖維化［29］。

4.4 小檗堿 Romero等對小檗堿體外抗HBV的活性進行了研究，發(fā)現(xiàn)作用21 d后，其對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg及HBV DNA的IC50分別為11 μmol/L和90 μmol/L，具有明顯的抑制作用。但小檗堿毒性相對較高，對細胞生長的半數(shù)抑制濃度為10 μM，屬于毒性較高的活性化合物［30］。

4.5 巖黃連總堿 研究表明從罌栗科植物石生黃堇Corydalis saxicola(巖黃連)中分得的巖黃連總生物堿具有抗HBV活性［31］。

5 多糖

5.1 豬苓多糖 從多孔菌科豬苓中提取的豬苓多糖具有提高機體免疫力促進肝細胞的再生和修復肝功能，并能抑制病毒的復制。豬苓多糖與其它藥物聯(lián)合使用時，可以提高療效［32］。

5.2 香菇多糖 從香菇子實體中分離出來的活性多糖可用于乙肝治療，主要與其免疫調(diào)節(jié)作用有關。采用藻酸雙酯鈉與香菇多糖治療乙肝結(jié)果HBsAg陰轉(zhuǎn)率8%，HBeAg陰轉(zhuǎn)率67%，HBcAb IgM陰轉(zhuǎn)率50% ，HBV-DNA 陰轉(zhuǎn)率 62% ，且作用持久［33，34］。

5.3 大蒜多糖 近來研究表明從大蒜球根中提取分離出大蒜多糖A、B、C均有護肝作用且安全、低毒，均可抑制HepG2.2.15細胞分泌HBsAg并成劑量依賴性。但對HBeAg的分泌則均無明顯抑制作用［35］。

5.4 海藻多糖 紫球藻培養(yǎng)液通過離心、濃縮、透析、醇析、脫蛋白、冷凍干燥等步驟從中分離出胞外多糖，采用ELISA顯示紫球藻胞外多糖對HepG2.2.15細胞分泌的HBeAg有不同程度的抑制作用［36］。羊棲菜多糖、人參多糖、云芝多糖、黃芪多糖等也可通過提高機體免疫來達到抑制乙肝病毒作用［37］。此外山豆根多糖進硫酸化修飾能提高對乙型肝炎病毒細胞轉(zhuǎn)染的HepG2.2.15細胞培養(yǎng)液中HBeAg、HBsAg 的抑制作用［38］。

6 其他成分

訶子為蒙醫(yī)中的常用藥物，訶子中的活性成分沒食子酸和訶子酸有抗病毒作用。使用酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)技術對沒食子酸水溶液進行了抗HBsAg和HBeAg的實驗研究，通過 P/N(陰性/陽性)比值變化，證實了沒食子酸的確具有抗HBsAg和 HBeAg 作用［39］。獐牙菜中的內(nèi)酯［40，41］、狹基線紋香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus中的雙萜化合物isolophanthins A-D［42］等也具有抗HBV活性。

由中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍等陰干全皮中提取的水溶性制劑華蟾素能促進肝細胞修復，保護肝細胞膜。研究表明華蟾素提高機體免疫力，抑制HBV mRNA表達從而抑制HBV復制，具有較強的抗病毒作用［43，44］。

7 展望

病毒性乙型肝炎作為一種病毒感染性疾病，主要與病毒感染和免疫力低下有關。病毒復制是發(fā)病的條件，機體免疫力低下是病情持續(xù)的重要原因。作為治療的措施策略主要包括免疫調(diào)節(jié)和抗病毒治療。中藥及天然藥物具有多環(huán)節(jié)、多靶點作用的優(yōu)勢。目前已從天然藥物中篩選獲得許多有抗HBV活性的化合物及有效部位，并且具有免疫調(diào)節(jié)活性，如多糖、皂苷類化合物。當前需要解決的問題是盡快明確這些抗HBV中藥的活性物質(zhì)基礎及其作用機制，并與已有的抗HBV藥物進行比較，結(jié)合高通量篩選體系，尋找高效安全的抗乙型肝炎病毒的活性成分，必要時根據(jù)傳統(tǒng)組方進行組分配伍研究。隨著現(xiàn)代生物技術的發(fā)展并與祖國醫(yī)藥日益緊密結(jié)合，中藥防治病毒性乙型肝炎將會有更好的前景。

［1］賀浪沖，岐 琳.陜西葉下珠藥用開發(fā)研究Ⅲ:提取物體外滅活 HBV 抗原作用［J］.西北藥學雜志，1996，11(1):11.

［2］鄭民實，陳永康.ELISA技術檢測中草藥抗HBsAg［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1990，10(9):560.

［3］張 正，許向東，杜紹財，等.60種中草藥抗乙型肝炎病毒的實驗研究［J］.北京醫(yī)科大學學報，1988，20(3):23l.

［4］鄭民實，邱健輝.使用ELISA技術檢測中草藥抗HBeAg的實驗研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1995，7(1):10.

［5］宋星宏.甘草甜素治療慢性乙肝療效觀察［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17(8):494.

［6］Liu H，Wei W，Sun WY，et al.Protective effects of astragaloside IV on porcine-serum-induced hepatic fibrosis in rats in vitro effects on Hepatic stellate cells［J］.J ethnophamacol，2009，122(3):502.

［7］張 娟，陳建宗，張金平，等.黃芪甲苷體外抗乙型肝炎病毒的作用［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2007，24:2291.

［8］周艷萌，吳中明.土貝母皂苷對HBV轉(zhuǎn)染的HepG2 2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用［J］.遵義醫(yī)學院學報，2005，28(02):112.

［9］周艷萌，吳中明，向曉波，等.土貝母皂苷體內(nèi)抗乙型肝炎病毒的實驗研究［J］.遵義醫(yī)學院學報，2007，30(03):232.

［10］林 興，黃權芳，張士軍，等.六月青總皂苷對HepG2.2.15細胞HBV復制的抑制作用［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20(11):2728.

［11］蔣蔚峰，陳建宗，張 娟，等.荔枝核總皂苷體外抗乙型肝炎病毒的作用［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2008，29(2):100.

［12］趙英仁，李 興，張樹林，等.絞股藍總皂苷治療慢性乙肝及其機制的體內(nèi)外研究［J］.陜西中醫(yī)學院學報，1997，20(4):31.

［13］Zembower DE，Lin YM，F(xiàn)lavin MT，et al.Robustaflavone，a potential non-nucleoside anti-hepatitis B agent［J］.Antiviral Res，1998.39(2):81.

［14］Guo Q，Zhao L，You Q，et al.Anti-hepatitis B virus activity of wogonin in virtro and in vivo［J］.Antiviral Res，2007，74(1):16.

［15］Huang RL，Chen CC，Huang HL，et al.Anti-hepatitis B virus effects of wogonin isolated from Scutellaria baicalensis［J］.Planta Med，2000，66(8):694.

［16］楊國紅.瑞香狼毒等三種藥用植物的生物活性成分［D］.復旦大學博士學位論文，2005，81.

［17］鄭作文，鄧家剛，楊 柯.芒果苷在2215細胞培養(yǎng)中對乙肝病毒 HBsAg、HBeAg分泌的影響［J］.中醫(yī)藥學刊，2004，22(9):1645.

［18］鄧家剛，鄧 靜，周文強，等.芒果苷對HepG2.2.15細胞βarrestins信號通路影響的研究［J］.中藥藥理與臨床，2011，2(2):22.

［19］Wang WN，Yang XB，Liu HZ，et al.Effects of Oenanthe javanica flavone on human and duck hepatitis B virus infection［J］.Acta pharmacol Sin，2005，26(5):587.

［20］徐 慶，宋蕓娟，陳全斌，等.荔枝核黃酮類化合物對HepG2.2.15細胞系HBsAg與HBeAg表達及HBV-DNA含量的影響［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2004，24(7):1862.

［21］徐 慶，宋蕓娟，李麗亞，等.荔枝核總黃酮的抗鴨乙型肝炎病毒作用［J］.世界華人消化雜志，2005，13(17):2082.

［22］黃紹軍，黃秋玲，義祥輝，等.荔枝葉的化學成分研究［J］.中草藥，2007，38(9):1313.

［23］饒腎高，肖偉烈，楊柳萌，等.狹葉五味子中化合物扁枝杉香豆素和(-)-表兒茶酸體外抗乙型肝炎病毒活性研究［J］.中草藥，2009，40(2):248.

［24］蔡 雄，王國俊，瞿 瑤，等.苦參堿注射液治療慢性乙型肝炎臨床療效分析［J］.第二軍醫(yī)大學學報，1997，18(1):47.

［25］徐文勝，王國俊，繆曉輝，等.氧化苦參堿HepG2.2.15細胞中乙型肝炎病毒DNA表達量的影響［J］.第二軍醫(yī)大學學報，2002，23(1):72.

［26］許 斌，周雙殘，黃玉仙，等.氧化苦參堿在鴨原代肝細胞中抗鴨乙肝病毒(DHBV)作用的研究［J］.病毒學報，2006，22(5):369.

［27］聶紅明，陳建杰，高月求，等.槐定堿體外抗乙肝病毒的實驗研究［J］.北京中醫(yī)，2007，26(10):678.

［28］聶紅明，王靈臺，陳建杰，等.槐果堿體外對HepG2.2.15細胞分泌 HBsAg HBeAg的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2006，33(11):1478.

［29］何玉先，徐克沂，張啟云，等.漢防己對大鼠實驗性肝纖維膠原蛋白合成的抑制作用［J］.中國中藥雜志，1996，21(3):177.

［30］Romero MR，Efferth T，Serrano MA，et al.Effect of artemisinin artesunate as inhibitors of hepatitis B virus production in an in vitro replicative system［J］.Antiviral Res，2005，68(2):75.

［31］Li HL，Han T，Liu RH，et al.Alkaloids from Corydalis saxicola and their anti-hepatitis B virus activity［J］.Chem Biodivers，2008，5(5):777.

［32］白 鵠，梅存金.胸腺肽聯(lián)合豬苓多糖及乙肝疫苗治療慢性乙型肝炎療效觀察［J］.河北醫(yī)學，1999，5(3):20.

［33］盛劍秋，楊淑英，段芳齡，等.香菇多糖的免疫調(diào)節(jié)作用研究進展［J］.胃腸學和肝病學雜志，1998，7(1):92.

［34］黃永森，逢金聚，王有義，等.藻酸雙酯鈉聯(lián)合病毒唑病毒和香菇多糖分段治療慢性乙肝與其它幾種療法的比較［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，1998，8(1):41.

［35］鄭 敏，盧葵花，吳基良，等.大蒜多糖體外抗乙型肝炎病毒作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2005，21(3):29.

［36］黃 鍵，陳必鏈，游文朗.紫球藻胞外多糖的分離及體外抗乙肝病毒活性的初步研究［J］.中國海洋藥物，2005，24(5):18.

［37］岑穎洲，馬夏軍，王凌云，等.羊棲菜多糖的制備及其對HepG2 細胞的抑制作用［J］.中國海洋藥物，2005，24(1):21.

［38］張 玉，蔣小豐，張名洋，等.山豆根多糖硫酸化修飾及其體外抗HBV活性測定［J］.中國臨床藥學雜志，2011，20(3):151.

［39］鄭民實，孔庚星，張 鑫，等.沒食子酸抗HBsAg/HBeAg的實驗研究［J］.實用中醫(yī)藥雜志，1998，14(1):5.

［40］Geng CA，Jiang ZY，Ma YB，et al.Swerilactones A and B，anti-HBV new lactones from a tradtional Chinese herb:Swertia mileensis as a treatment for viral hepatitis［J］.Org Lett，2009，11(18):4120.

［41］Yang LB，Li L，Huang SX.et al.Anti-hepatitis B virus and cytotoxic diterpenoids from var.Gerardianus［J］.Chem Pharm Bull，2011，59(9):1102.

［42］Geng CA，Wang LJ，Zhang XM，et al.Anti-hepatitis b virus active lactones from the traditional chinese herb:Swertia mileensis［J］.Chemistry-A European Journal，2011，17(14):3893.

［43］Cui X，Inagaki，Y，Xu H，et al.Anti-hepatitis B virus activities of cinobufacini and its active components bufalin and cinobufagin in HepG2.2.15 Cells［J］.Biol Pharm Bull，2010，33(10):1728.

［44］徐向男，荊培棠，李永華，等.華蟾素治療慢性活動性乙肝臨床療效觀察［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1993，13(8):473.