曲正義，劉宏群，趙景輝，姚春林，王英平

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林 132109)

西洋參(Panax quinquefolius L)為五加科人參屬植物，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯，養(yǎng)血生津，寧神益智的功效，其主要的活性成分為人參總皂苷［1］。吉林省是我國(guó)人參、西洋參的主產(chǎn)區(qū)，為了評(píng)價(jià)吉林省不同產(chǎn)區(qū)西洋參的質(zhì)量，本文對(duì)吉林省6 個(gè)產(chǎn)地的西洋參進(jìn)行了人參總皂苷含量的測(cè)定及比較研究。

1 儀器與試藥

TU-1810 型紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);HH-6 型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司);N -1001 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司);電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);GF-254 型層析硅膠板(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠)。西洋參(4 年生)于2011 年9 月采于吉林省琿春、敦化、長(zhǎng)白、集安、臨江和撫松等地;人參皂苷Re 對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)110754 -201123);實(shí)驗(yàn)用水為自制蒸餾水;所用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re 對(duì)照品20.00 mg，置于10 ml 量瓶中，加甲醇適量使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得(含人參皂苷Re 2 mg/ml)。

2.1.2 供試品溶液的制備 西洋參樣品經(jīng)50 ℃烘干后粉碎(過(guò)40 目篩)，精確稱取供試品1.00 g，用中性濾紙包好，置索式提取器中，加入乙醚，在47 ℃左右微沸回流提取1 h，棄去乙醚液，揮干乙醚溶劑，加入甲醇浸泡過(guò)夜，次日再加入適量甲醇在89 ℃左右微沸回流提取，控制滴速100 ～120 滴/min，虹吸次數(shù)為5 ～6次/h，回流提取3 次，每次2 h，以人參皂苷提盡為準(zhǔn)(定性鑒別為陰性)。合并甲醇提取液，回收甲醇，少量提取液置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干。用蒸餾水溶解提取物，加蒸餾水30 ml 置分液漏斗中用水飽和的正丁醇50 ml 進(jìn)行萃取，共4 次。取上層液蒸干，加甲醇溶解后，轉(zhuǎn)移至10 ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 人參總皂苷提取定性鑒別［2］供試品回流提取3 次以后，取索式提取器中載供試品瓶中的溶液少量點(diǎn)于硅膠G 薄層(105 ℃活化10 min)板上，展開劑:氯仿-甲醇-水(65∶ 35∶ 10)10 ℃以下放置后的下層溶液，用10%硫酸乙醇顯色，將薄層板置通風(fēng)櫥內(nèi)，噴10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱，無(wú)紫紅色斑點(diǎn)(總皂苷陽(yáng)性應(yīng)為紫紅色斑點(diǎn))。結(jié)果表明，樣品中人參總皂苷已提取完全。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.3.1 8%香草醛乙醇試液和72%硫酸溶液的配制8%香草醛乙醇試液:取香草醛4.00 g，加無(wú)水乙醇定容至50 ml 量瓶中，溶解，搖勻，即得(配制溶液1 周內(nèi)可以使用［3］)。72%硫酸溶液:取硫酸720 ml，緩緩注入適量蒸餾水中，冷卻至室溫，加水稀釋至1 000 ml，搖勻，即得。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取人參皂苷Re 對(duì)照品10、30、50、60、80 和100 μl，置于磨口帶塞試管中，水浴蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇試液0.5 ml，72%硫酸試液5 ml，充分振搖混勻后置60 ℃恒溫水浴上加熱10 min，立即用冰水冷卻10 min，搖勻。以試劑作空白，于544 nm 波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)、濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:A=0.193 86 C-0.002 74(r=0.999 4)。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液30 μl 置于10 ml 磨口帶塞試管中，共6 份，按“2.3.2”項(xiàng)下方法顯色測(cè)定吸收度，連續(xù)測(cè)定6 次，記錄吸光度值，計(jì)算得其RSD 為0.02%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液20 μl 置于10 ml 磨口帶塞試管中，按“2.3.2”項(xiàng)下方法顯色，并分別在顯色后每隔10 min 測(cè)定一次吸光度，共測(cè)6 次，計(jì)算得其RSD 為0.53%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精確稱取藥材粉末5 份，每份1.00 g，按照“2.1.2 供試品溶液的制備”步驟，平行制備樣品溶液，各吸取20 μl 置于5 個(gè)10 ml 具塞試管中，按“2.3.2”項(xiàng)下方法顯色測(cè)定吸收度，通過(guò)回歸方程得到平均總皂苷的質(zhì)量濃度，其RSD 為0.93%。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 精確吸取已知含量的樣品溶液20 μl，平行5 份，分別置于5 個(gè)10 ml 磨口帶塞試管中，再分別精確加入人參皂苷Re 標(biāo)準(zhǔn)品溶液(2 mg/ml)10、20、30、40 和50 μl，按“2.3.2”項(xiàng)下方法顯色測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率為99.9%，RSD 為0.82%。

2.8 樣品的測(cè)定 精密吸取“2.1.2 供試品溶液的制備”方法中樣品溶液20 μl，共3 份。分別置于3 個(gè)10 ml 磨口帶塞試管中，按“2.3.2”項(xiàng)下方法顯色測(cè)定吸收度，由回歸方程計(jì)算總皂苷的平均含量，結(jié)果見表2。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)

表2 吉林省不同產(chǎn)地西洋參中總皂苷測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用甲醇熱回流索氏提取西洋參中人參總皂苷，通過(guò)薄層色譜定性鑒別，可將西洋參中的總皂苷提取完全。紫外-可見分光光度法測(cè)定西洋參中人參總皂苷含量，方法簡(jiǎn)便易行，精確度高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均較好。所測(cè)吉林省6 個(gè)產(chǎn)地的西洋參中人參總皂苷含量均大于6%，符合《中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究》［4］要求，對(duì)吉林省西洋參藥材質(zhì)量的控制具有參考意義。

1 王蕾，王英平，許世全，等.西洋參化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展. 特產(chǎn)研究，2007，3:73

2 中國(guó)藥典.一部. 2005:31 -32

3 趙花，劉強(qiáng)，張達(dá)正，等.香蘭素存放時(shí)間對(duì)測(cè)定人參總皂苷含量結(jié)果的影響.人參研究，2007，1:19

4 王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994:493 -497