HPLC測(cè)定細(xì)辛腦注射液有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

賈樹(shù)娟

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬二院，遼寧 沈陽(yáng)110034）

HPLC測(cè)定細(xì)辛腦注射液有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

賈樹(shù)娟

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬二院，遼寧 沈陽(yáng)110034）

增加細(xì)辛腦注射液的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，以甲醇-水（70：30）（每1000mL水中含磷酸二氫鈉1.56g，十二烷基磺酸鈉1.2g）為流動(dòng)相；方法簡(jiǎn)便易行、重現(xiàn)性好，與雜質(zhì)可達(dá)到良好分離。本文所采用的方法可以作為細(xì)辛腦注射液的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法。

細(xì)辛腦注射液；有關(guān)物質(zhì)；高效液相

細(xì)辛腦（又名α-細(xì)辛腦、α-細(xì)辛醚；化學(xué)名：2，4，5-三甲氧基-1-丙烯基苯），主要存在于石菖蒲等植物的揮發(fā)油中。中藥石菖蒲，能“豁痰開(kāi)竅、醒腦”，具有止咳平喘的作用[1]。石菖蒲的揮發(fā)油中有效成分細(xì)辛腦可拮抗氣管致痙劑組胺和5-羥色胺引起的支氣管收縮，其作用與氨茶堿相似，尚能減少咳嗽次數(shù)。細(xì)辛腦注射液國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中均未對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查，為了使研究工作更加完善，本研究采用高效液相色譜法[2]對(duì)本品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，經(jīng)考察經(jīng)方法學(xué)考察，重現(xiàn)性、精密度、回收率、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果良好，可以作為本品終產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，希望以此控制終產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試劑

儀器：檢測(cè)器：日本島津（LC-10ATVP）；輸液泵：日本島津（SPD-10ATVP）；色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，Diamonsil（鉆石）-C18（250mm×4.6mm，5μm）。試藥：細(xì)辛腦注射液（衡陽(yáng)恒生制藥有限公司，批號(hào)：20110801規(guī)格：2mL：8mg）；甲醇（色譜純）；水（二次蒸餾水）；磷酸二氫鈉，十二烷基磺酸鈉（均為分析純?cè)噭?/p>

2 色譜條件的選擇

經(jīng)試驗(yàn)，以甲醇-水（70∶30）（每1000mL水中含磷酸二氫鈉1.56g，十二烷基磺酸鈉1.2g）為流動(dòng)相，主峰保留時(shí)間合適，與β-細(xì)辛腦分離度良好，柱效高，而且，配制流動(dòng)相時(shí)方便溶解，不易析出。檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm，流速1.0mL/min。

3 峰位的確定

精密稱定α-細(xì)辛腦對(duì)照品12mg，置200mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

精密稱定β-細(xì)辛腦對(duì)照品12mg，置200mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

由結(jié)果可知，β-細(xì)辛腦保留時(shí)間為7.742min，α-細(xì)辛腦保留時(shí)間為9.408min。

4 系統(tǒng)適用性考察

4.1 熱分解產(chǎn)物分離

精密量取樣品1.5mL置試管中，100℃加熱30min，放冷后，用水稀釋并全部轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，精密吸取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的4倍。主要分解產(chǎn)物保留時(shí)間為3.725min與7.400min，與細(xì)辛腦主峰（tR＝8.667min）獲得良好分離。

4.2 酸分解產(chǎn)物分離

精密量取樣品1.5mL置試管中，加入0.1mol/L的鹽酸溶液1mL，100℃加熱30min，放冷，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，用水稀釋并全部轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，精密吸取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的4倍。主要分解產(chǎn)物保留時(shí)間為3.733min與7.450min，與細(xì)辛腦主峰（tR＝8.742min）獲得良好分離。

4.3 堿分解產(chǎn)物分離

精密量取樣品1.5mL置試管中，加入0.1mol/L的氫氧化鈉溶液1mL，100℃加熱30min，放冷，用0.1mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，用水稀釋并全部轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，精密吸取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的4倍。主要分解產(chǎn)物保留時(shí)間為7.442min，與細(xì)辛腦主峰（tR＝8.725min）獲得良好分離。

4.4 氧化分解產(chǎn)物分離

精密量取樣品1.5mL置試管中，加30%過(guò)氧化氫溶液1mL，100℃加熱30min，放冷，用水稀釋并全部轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，精密吸取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的4倍。主要分解產(chǎn)物保留時(shí)間為2.300min與7.450min，可見(jiàn)分解產(chǎn)物與細(xì)辛腦（tR＝8.742min）主峰獲得良好分離。

4.5 光照破壞

精密量取樣品1.5mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，至4500Lx±500Lx的光照箱中照射24h，精密吸取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的4倍。主要分解產(chǎn)物保留時(shí)間為4.000min與7.683min；可見(jiàn)分解產(chǎn)物與細(xì)辛腦（tR＝8.933min）主峰獲得良好分離。

4.6 結(jié)論

由圖譜可知，酸堿破壞，氧化破壞，熱分解及光照破壞都有明顯的分解產(chǎn)物峰，但分解產(chǎn)物均與主峰有良好的分離度。由此可見(jiàn)，本方法適合細(xì)辛腦注射液有關(guān)物質(zhì)檢查。

5 精密度

精密吸取樣品1.5mL置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。精密吸取配制好的溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。連續(xù)進(jìn)樣六次，以主峰的峰面積計(jì)算RSD值為0.38%。由結(jié)果可見(jiàn)，本方法精密度良好。

6 重復(fù)性

精密吸取樣品1.5mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，共配制六次，即得。分別精密吸取配制好的溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以主峰的峰面積計(jì)算RSD值0.75%。由結(jié)果可見(jiàn)，本方法重復(fù)性良好。

7 靈敏度

取本品適量，加水溶解后，再用水逐步定量稀釋，測(cè)得本法最低定量濃度為30ng/mL（S/N≈10），進(jìn)樣量為0.60ng（20μL）。最低檢出濃度為10ng/mL（S/N≈3）進(jìn)樣量0.20ng（20μL）。

8 溶液穩(wěn)定性

精密吸取樣品1.5mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。分別于0，2，4，6，8h精密吸取配制好的樣品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以主峰的峰面積計(jì)算RSD值。0.66%。由結(jié)果可見(jiàn)，溶液8h內(nèi)穩(wěn)定。

9 測(cè)定法

9.1 供試品溶液的配制：精密吸取樣品1.5mL，置100mL量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻，即得。

9.2 對(duì)照溶液的配制：精密吸取配制好供試品溶液1mL置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

9.3 精密吸取對(duì)照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度。使主成份峰的峰高約為滿量程的10%～20%。再精密吸取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的2倍。

經(jīng)市售品檢驗(yàn)，結(jié)果為β-細(xì)辛腦0.56%，其他有關(guān)物質(zhì)為0.16%。

10 討 論

本研究制定的細(xì)辛腦有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法簡(jiǎn)單可行，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法可用于細(xì)辛腦注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。

[1] 中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977.

[2] 中華人民共和國(guó)藥典,二部附錄[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

R286

B

1671-8194（2013）16-0114-02