MiR-150特異調(diào)控胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟

鄭全輝 張愛(ài)紅 鄭愛(ài)華 陸 斌 張慶波 侯志宏 李 娟 陳淑媛

（河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，唐山 063000）

MiR-150特異調(diào)控胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟

鄭全輝 張愛(ài)紅①鄭愛(ài)華①陸 斌①?gòu)垜c波 侯志宏 李 娟 陳淑媛②

（河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，唐山 063000）

目的:探討miR-150在胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和恒定型自然殺傷性T細(xì)胞（iNKT）發(fā)育和成熟中的作用。方法:采用Real-time PCR檢測(cè)miR-150在胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞中的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-150基因敲除小鼠胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟。結(jié)果:miR-150在胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞中均有表達(dá)，且在iNKT細(xì)胞發(fā)育成熟過(guò)程中表達(dá)逐漸增加，缺失miR-150不影響傳統(tǒng)T細(xì)胞發(fā)育，但導(dǎo)致iNKT細(xì)胞發(fā)育和成熟障礙。結(jié)論:miR-150特異調(diào)控小鼠胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟。

miR-150;基因敲除;T細(xì)胞;自然殺傷性T細(xì)胞

Vα14恒定型自然殺傷性 T細(xì)胞（invariant NKT，iNKT）是一群CD1d限制性的T淋巴細(xì)胞亞群，起源于CD4+CD8+雙陽(yáng)性（DP）胸腺前體細(xì)胞。在受到CD1d呈遞的脂類(lèi)抗原如α-半乳糖神經(jīng)酰胺鞘氨醇（α-GalCer）活化后，iNKT細(xì)胞能在短時(shí)間內(nèi)大量產(chǎn)生IFN-γ、IL-4等細(xì)胞因子，在抗感染、維持自身耐受和腫瘤治療中發(fā)揮重要作用［1-3］。

在小鼠胸腺，表達(dá)Vα14-Jα18T細(xì)胞受體α鏈的DP胸腺前體細(xì)胞經(jīng)歷CD1d的陽(yáng)性選擇后，CD24表達(dá)降低并伴隨著CD44和NK1.1表達(dá)的逐漸增加，開(kāi)始一系列的發(fā)育和成熟過(guò)程。iNKT細(xì)胞在胸腺內(nèi)發(fā)育主要分為三個(gè)階段，初始階段iNKT細(xì)胞表現(xiàn)為 CD24－CD44－NK1.1－（Stage 1），此后CD44表達(dá)開(kāi)始增加，表現(xiàn)為CD24－CD44+NK1.1－（Stage 2），成熟階段的iNKT細(xì)胞NK1.1表達(dá)顯著增加，表現(xiàn)為 CD24－CD44+NK1.1+（Stage 3）［4］。成熟 iNKT細(xì)胞表現(xiàn)為活化/記憶細(xì)胞表型（CD62L－CD69+CD44+）并可進(jìn)一步分為 CD4+單陽(yáng)性和 CD4－CD8－雙陰性?xún)蓚€(gè)亞群［5］。

microRNAs（miRNAs）屬于短鏈非編碼RNAs，長(zhǎng)度為20～23nt，通過(guò)與靶mRNA 3'端非翻譯區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致靶mRNA降解或抑制其翻譯，負(fù)向調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)［6］。miR-150主要表達(dá)在成熟的T細(xì)胞和B細(xì)胞中，miR-150缺失導(dǎo)致B細(xì)胞異常擴(kuò)增，并導(dǎo)致體液免疫應(yīng)答顯著增強(qiáng)［7］。而miR-150是否調(diào)控傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟，目前還不清楚。我們的研究發(fā)現(xiàn):雖然miR-150在胸腺iNKT細(xì)胞中表達(dá)低于傳統(tǒng)T細(xì)胞，但miR-150缺失不影響胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞的發(fā)育，而特異性地使小鼠iNKT細(xì)胞減少，發(fā)育阻斷在終末成熟階段。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 小鼠 C57BL/6背景的miR-150基因敲除小鼠（miR-150KO）和野生型對(duì)照 C57BL/6小鼠（WT）由美國(guó)Qing-Sheng Mi實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)，并在河北聯(lián)合大學(xué)SPF級(jí)小鼠房繁殖、飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)選取6～10周齡、性別匹配小鼠進(jìn)行研究。小鼠實(shí)驗(yàn)操作按河北聯(lián)合大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)規(guī)定進(jìn)行。miR-150敲除小鼠基因型鑒定采用下列引物:上游:5'-CAAGGACAGGAACCCTTCAGCA-3';下游 5'-CCATGATGCCTGGAAGACATTTC-3'。miR-150KO小鼠產(chǎn)生262 bp片段，WT小鼠產(chǎn)生866 bp片段。

1.1.2 試劑 MirVana miRNA提取試劑盒和Taq-Man MicroRNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Ambion公司。α-半乳糖神經(jīng)鞘氨醇（α-GalCer）/CD1d四聚體（CD1d-α-Galcer-tetramer）購(gòu)自日本麒麟公司，抗小鼠TCR-β 抗體（H57-597）、NK1.1 抗體（PK136）、CD44抗體（IM7）、CD3抗體（G4.18）、CD4抗體（RM4-5）、CD8 抗體（53-6.7）、CD25 抗體（PC61）、Biotin標(biāo)記 CD8抗體、抗 Biotin磁珠購(gòu)自 BD或eBioscience公司。磁珠分選系統(tǒng)購(gòu)自美天旎生物技術(shù)公司。細(xì)胞內(nèi)染色試劑盒購(gòu)自eBioscience公司。引物由上海生物工程服務(wù)公司合成。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞分選 分離WT C57BL/6小鼠胸腺細(xì)胞，PBS緩沖液重懸（1×PBS;2%FBS;2 mmol/L EDTA）。加入2.4 G2 至 20 μl/107細(xì)胞，4℃，30分鐘。采用抗小鼠 TCR-β抗體和CD1d-α-GalCer雙染色，AriaⅡ流式細(xì)胞儀（BD）分選胸腺 TCR-β+CD1d-α-GalCer－傳統(tǒng) T 細(xì)胞和 TCR-β+CD1d-α-Gal-Cer+總iNKT細(xì)胞。為分選足量不同發(fā)育階段iNKT細(xì)胞用于后續(xù)Real-time PCR分析，WT C57BL/6小鼠胸腺細(xì)胞首先與Biotin標(biāo)記抗小鼠CD8抗體孵育（1μl/107細(xì)胞），4℃，10分鐘。加入抗 Biotin磁珠（2μl/107細(xì)胞），4℃，15分鐘，PBS洗滌兩次后采用磁珠分選系統(tǒng)剔除小鼠 CD8+胸腺細(xì)胞（CD8SP和CD4+CD8+DP）。剩余細(xì)胞再采用抗小鼠 TCR-β 抗 體，CD1d-α-GalCer-tetramer、抗 小 鼠NK1.1和抗小鼠CD44抗體染色，流式分選不同發(fā)育階段胸腺iNKT細(xì)胞。

1.2.2 Real-time PCR 采用Ambion mirVana miRNA提取試劑盒分別提取、純化WT或miR-150KO小鼠胸腺細(xì)胞，胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞，總iNKT及不同發(fā)育階段iNKT細(xì)胞miRNA;各組細(xì)胞中MiR-150的表達(dá)首先采用ABImiR-150反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物熒光檢測(cè)采用ABI 7900 Realtime PCR系統(tǒng)進(jìn)行，同時(shí)檢測(cè)各組細(xì)胞中snoRNU202的表達(dá)作為內(nèi)參照，結(jié)果分析采用 ^CT值，并計(jì)算miR-150在WT和 miR-150KO小鼠各組細(xì)胞以及不同發(fā)育階段WT NKT細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)。

1.2.3 流式細(xì)胞儀分析 小鼠胸腺細(xì)胞首先用含2%小牛血清的PBS染色緩沖液洗滌兩次，加入封閉抗體2.4G2（10μl/106細(xì)胞），4℃ 30分鐘，然后直接加入熒光素標(biāo)記的α-GalCer/CD1d四聚體及其它相關(guān)抗體。4℃ 30分鐘。PBS染色緩沖液洗滌2次，1 000轉(zhuǎn)5 min/次。采用BD-LSRⅡ流式細(xì)胞儀收集標(biāo)本，CellQuest Pro（BD Biosciences）或FlowJo軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用GraphPad Prism v5.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果采用雙尾Student's t檢驗(yàn)，P＜0.05為組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 miR-150在iNKT細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中表達(dá)增加選取 WT C57BL/6小鼠，流式分選胸腺 TCR-β+CD1d-α-GalCer－傳統(tǒng) T 細(xì)胞 和 TCR-β+CD1d-α-GalCer r+iNKT細(xì)胞 （圖1A）。提取各組細(xì)胞總RNA，采用Real-time PCR檢測(cè)miR-150的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-150在胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞中均有表達(dá)，但miR-150在傳統(tǒng)T細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于iNKT細(xì)胞 （P＜0.01，圖1B）。利用抗CD44和抗NK1.1抗體進(jìn)一步流式分選Stage 1（CD44－NK1.1－），Stage 2（CD44+NK1.1－）和 Stage 3（CD44+NK1.1+）iNKT細(xì)胞，各群細(xì)胞分選純度在90%以上（圖1C）。Real-time PCR檢測(cè)不同發(fā)育階段iNKT中miR-150的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-150在所有發(fā)育階段的iNKT細(xì)胞中都有表達(dá)，但隨著胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育成熟，miR-150的表達(dá)逐漸增加，并在終末成熟階段Stage 3（CD44+NK1.1+）iNKT細(xì)胞中表達(dá)最高（圖1D）。

圖1 m iR-150在iNKT細(xì)胞發(fā)育成熟過(guò)程中表達(dá)增加Fig.1 Expression ofm iR-150 is upregulated during the development of iNKT cells

圖2 m iR-150敲除不影響胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞的發(fā)育和成熟Fig.2 m iR-150 knock-out does not affect the development and maturation of general T cells

2.2 MiR-150敲除不影響傳統(tǒng)T細(xì)胞發(fā)育 為觀察miR-150對(duì)小鼠胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞發(fā)育的影響，我們采用 miR-150基因敲除（miR-150KO）小鼠?；蜩b定及Real-time PCR結(jié)果顯示:miR-150KO小鼠基因型正確（圖2A），胸腺細(xì)胞中miR-150的表達(dá)較WT小鼠顯著降低（圖2B）。對(duì)WT和miR-150KO小鼠胸腺細(xì)胞進(jìn)行抗-CD4和抗-CD8抗體染色，比較胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞各發(fā)育階段包括CD4－CD8－（DN），CD4+CD8+（DP），CD4+（SP），CD8+（SP）細(xì)胞比率的變化，發(fā)現(xiàn)兩組間比較無(wú)顯著性差異（圖2C）。細(xì)胞計(jì)數(shù)比較WT和miR-150KO小鼠胸腺細(xì)胞數(shù)量的變化，兩組間無(wú)顯著性差異（圖2D）。早期胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞在CD4－CD8－DN階段，經(jīng)歷 CD44+CD25－（DN1），CD44+CD25+（DN2），CD44－CD25+（DN3）和 CD44－CD25－（DN4）發(fā)育為CD4+CD8+DP細(xì)胞。通過(guò)分析CD44和 CD25在CD4－CD8－DN細(xì)胞中的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)miR-150KO小鼠早期胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞的發(fā)育正常（圖2E）。以上結(jié)果表明，miR-150基因缺失不影響胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞的發(fā)育和成熟。

2.3 MiR-150敲除致胸腺iNKT細(xì)胞發(fā)育和成熟障礙 采用抗-TCR-β抗體和CD1d-α-Galcer染色，流式分析比較miR-150KO小鼠與WT小鼠胸腺iNKT細(xì)胞的變化（圖3A），發(fā)現(xiàn)與 WT小鼠相比，miR-150KO小鼠胸腺iNKT細(xì)胞比例（P＜0.01）和數(shù)量（P＜0.05）均顯著降低（圖3B）。與傳統(tǒng)T細(xì)胞相似，iNKT細(xì)胞在胸腺陽(yáng)性選擇后，經(jīng)歷一系列發(fā)育階段成為成熟CD44+NK1.1+iNKT細(xì)胞。通過(guò)抗小鼠 CD44和 NK1.1抗體染色，流式分析 miR-150KO小鼠胸腺iNKT細(xì)胞各發(fā)育階段的變化（圖3C）。發(fā)現(xiàn)與WT小鼠相比，miR-150KO小鼠胸腺成熟NK1.1+CD44+iNKT細(xì)胞比率顯著降低（P＜0.01）。而處于中間成熟階段CD44+NK1.1－iNKT細(xì)胞比率則顯著增加（P＜0.05），但早期非成熟CD44－NK1.1－iNKT細(xì)胞比率與對(duì)照組相比沒(méi)有變化（圖3D）。細(xì)胞數(shù)量分析表明:成熟階段CD44+NK1.1+iNKT細(xì)胞總數(shù)與對(duì)照組相比顯著降低（P＜0.01），但 CD44+NK1.1－和非成熟 CD44－NK1.1－iNKT細(xì)胞總數(shù)與WT小鼠相比，沒(méi)有顯著性變化（圖3E）。以上結(jié)果表明，MiR-150缺失不但影響胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育，而且阻礙其成熟。

3 討論

根據(jù)T細(xì)胞受體（TCR）的表達(dá)差異，NKT主要分為兩型，Ⅰ型NKT細(xì)胞表達(dá)恒定型TCRα鏈（小鼠:Vα14-Jα18，人:V α24-Jα18）和 Vβ 鏈（小鼠:Vβ8.2，Vβ7，Vβ2，人:Vβ11），因此又稱(chēng)為恒定型NKT細(xì)胞（iNKT）。iNKT細(xì)胞能被CD1d四聚體荷載的半乳糖?；拾贝迹é?GalCer-CD1dtetramers）特異性識(shí)別。Ⅱ型NKT細(xì)胞表達(dá)多樣性TCRα鏈，但由于缺乏特異的識(shí)別試劑而研究較少［8］。

圖3 m iR-150敲除小鼠胸腺iNKT細(xì)胞發(fā)育和成熟缺陷Fig.3 Defective iNKT cell development and maturation in m iR-150KO m ice

來(lái)自骨髓的T細(xì)胞前體細(xì)胞進(jìn)入胸腺后，經(jīng)歷CD4－CD8－DN、CD4+CD8+DP 階段后發(fā)育為成熟的CD4+SP和CD8+SP T細(xì)胞，然后進(jìn)入外周并在一定細(xì)胞因子環(huán)境下分化為T(mén)h1、Th2等具有特異細(xì)胞因子分泌功能的輔助性T細(xì)胞亞群。同CD4+和CD8+T細(xì)胞一樣，iNKT細(xì)胞也是一個(gè)胸腺依賴(lài)的T細(xì)胞亞群。iNKT細(xì)胞起源于胸腺CD4+CD8+DP T細(xì)胞。其前體細(xì)胞識(shí)別周?chē)鶦D4+CD8+DP T細(xì)胞上由CD1d呈遞的鞘糖脂類(lèi)抗原，經(jīng)歷一系列的發(fā)育和成熟過(guò)程后成為具有多種細(xì)胞因子分泌功能的 iNKT細(xì)胞，成熟的小鼠 iNKT細(xì)胞表現(xiàn)為CD4+或CD4－CD8－，而人iNKT細(xì)胞表現(xiàn)為CD4+、CD8+或 CD4－CD8－［5］。

microRNAs作為一種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制在造血細(xì)胞中呈發(fā)育階段和細(xì)胞特異性表達(dá)［9］。Dicer是一種RNA酶，在幾乎全部microRNAs的生成過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵所用［10］。采用lck啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cre酶在T細(xì)胞發(fā)育早期階段（CD4－CD8－DN）刪除Dicer導(dǎo)致胸腺傳統(tǒng)αβT細(xì)胞顯著下降，而采用CD4啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cre酶在T細(xì)胞發(fā)育晚期刪除Dicer則導(dǎo)致αβT細(xì)胞輕微下降但向 Th1型細(xì)胞分化增加［11，12］。同時(shí)，Zhou 等［13］發(fā)現(xiàn) Dicer 敲除小鼠胸腺iNKT細(xì)胞發(fā)育和成熟受阻，細(xì)胞數(shù)量顯著降低。以上研究表明:microRNAs作為一個(gè)整體在胸腺CD4+、CD8+傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟中發(fā)揮重要作用。然而，特異microRNA在胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟中的作用目前所知甚少。在此研究中我們發(fā)現(xiàn)，雖然胸腺iNKT細(xì)胞和傳統(tǒng)胸腺T細(xì)胞均表達(dá)miR-150，且miR-150在傳統(tǒng)T細(xì)胞中的表達(dá)高于iNKT細(xì)胞，但miR-150敲除并不影響CD4+和CD8+傳統(tǒng)T細(xì)胞的發(fā)育、成熟和CD4－CD8－DN T細(xì)胞的早期發(fā)育。相反，miR-150敲除導(dǎo)致胸腺iNKT細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目減少，發(fā)育阻滯在終末成熟階段。

miR-150已被鑒定為在淋巴細(xì)胞特異表達(dá)的microRNA［14］。與在iNKT細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式相似，miR-150在 T、B細(xì)胞的發(fā)育成熟過(guò)程中表達(dá)顯著增加［7，15］。Zhou 等［7］的研究表明:過(guò)表達(dá)miR-150對(duì)CD4+SP和CD8+SP細(xì)胞的產(chǎn)生沒(méi)有影響，而成熟B細(xì)胞的產(chǎn)生顯著減少，細(xì)胞的發(fā)育阻滯在祖B細(xì)胞向前B細(xì)胞的過(guò)度階段。有意思的是，最近Bezman等［16］在野生型（WT）-miR-150混合骨髓移植嵌合體小鼠模型中發(fā)現(xiàn):miR-150敲除胸腺iNKT細(xì)胞的數(shù)量較WT來(lái)源的iNKT細(xì)胞有輕微程度的下降（1.5±0.2倍），其細(xì)胞下降的主要部分為成熟CD44+NK1.1+iNKT細(xì)胞，雖然該研究結(jié)果與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，但是，Bezman等沒(méi)有檢測(cè)到這一降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可能的原因在于:（1）實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)不同，我們采用的是miR-150敲除小鼠模型，而B(niǎo)ezman等采用是小鼠混合骨髓移植模型;（2）與Dicer敲除丟失幾乎所有microRNAs相比，miR-150基因單獨(dú)敲除引起的胸腺iNKT細(xì)胞數(shù)量降低和發(fā)育障礙并不十分顯著，而在Bezman等的骨髓移植實(shí)驗(yàn)中，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組3到4只小鼠可能不足以檢測(cè)出這一差異。同時(shí)也提示，除miR-150外，可能還有多個(gè)未知的特異miRNAs調(diào)控iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟。

總之，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明:雖然miR-150在胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞和iNKT細(xì)胞中均有表達(dá)，且miR-150隨二者的發(fā)育、成熟表達(dá)增加，但miR-150缺失并不影響胸腺傳統(tǒng)T細(xì)胞的發(fā)育，而導(dǎo)致胸腺iNKT細(xì)胞數(shù)量降低，且發(fā)育主要阻滯在終末成熟階段（從CD44+NK1.1－到 CD44+NK1.1+）。因此，miR-150特異地調(diào)控胸腺iNKT細(xì)胞的發(fā)育和成熟。而miR-150在傳統(tǒng)T細(xì)胞中的作用以及對(duì)iNKT細(xì)胞功能的影響仍需進(jìn)一步探討。

1 Tupin E，Kinjo Y，Kronenberg M et al.The unique role of natural killer T cells in the response tomicroorganisms［J］.Nat Rev Microbiol，2007;5（6）:405-417.

2 Lehuen A，Diana J，Zaccone P etal.Immune cell crosstalk in type 1 diabetes［J］.Nat Rev Immunol，2010;10（7）:501-513.

3 Dhodapkar M V，Geller M D，Chang D H et al.A reversible defect in natural killer T cell function characterizes the progression of premalignant to malignant multiple myeloma［J］.J Exp Med，2003;197（12）:1667-1676.

4 Hammond K J，Uldrich A P，Pellicci D G et al.A natural killer T（NKT）cell developmental pathway involving a thymus-dependent NK1.1（－ ）CD4（+）CD1d-dependent precursor stage［J］.JExp Med，2002;195（5）:835-844.

5 Lantz O，Bendelac A.An invariant T cell receptor alpha chain is used by a unique subsetofmajor histocompatibility complex class I-specific CD4+and CD4282 T cells in mice and humans［J］.J Exp Med，1994;180（3）:1097-1106.

6 Bartel D P.MicroRNAs:genomics，biogenesis，mechanism，and Function ［J］.Cell，2004;116（2）:281-297.

7 Zhou B，Wang S，Mayr C et al.miR-150，amicroRNA expressed in mature B and T cells，blocks early B cell development when expressed prematurely［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2007;104（17）:7080-7085.

8 Godfrey D I，MacDonald H R，Kronenberg M etal.NKT cells:what's in a name?［J］.Nature Rev Immunol，2004;4（3）:231-237.

9 Kuchen S，Resch W，Yamane A et al.Regulation ofmicroRNA expression and abundance during lymphopoiesis［J］.Immunity，2010;32（6）:828-839.

10 Czech B，Malone CD，Zhou R et al.An endogenous small interfering RNA pathway in Drosophila［J］.Nature，2008;453（7196）:798-802.

11 Cobb B S，Nesterova T B，Thompson E et al.T cell lineage choice and differentiation in the absence of the RNAseⅢenzyme dicer［J］.JExp Med，2005;201（9）:1367-1373.

12 Muljo SA，Ansel K M，Kanellopoulou C et al.Aberrant T cell differentiation in the absence of Dicer［J］.J Exp Med，2005;202（2）:261-269.

13 Zhou L，Seo K H，He H Z etal.Tie2cre-induced inactivation of the miRNA-processing enzyme Dicer disrupts invariant NKT cell development［J］ .Proc Natl Acad Sci USA， 2009;106（25）:10266-10271.

14 Allantaz F，Cheng D T，Bergauer T etal.Expression profiling of human immune cell subsets identifies miRNA-mRNA regulatory relationships correlated with cell type specific expression［J］.PLoS One，2012;7（1）:e29979.

15 Ghisi M，Corradin A，Basso K et al.Modulation ofmicroRNA expression in human T-cell development:targeting of NOTCH3 by miR-150［J］.Blood，2011;117（26）:7053-7062.

16 Bezman N A，Chakraborty T，Bender T etal.miR-150 regulates the development of NK and iNKT cells［J］.J Exp Med，2011;208（13）:2717-2731.

［收稿2012-08-21 修回2012-09-10］

（編輯 張曉舟）

MiR-150 specifically regulates the development and maturation of invariant NKT cells

ZHENGQuan-Hui，ZHANGAi-Hong，ZHENGAi-Hua，LUBin，ZHANGQing-Bo，HOUZhi-Hong，LIJuan，CHENShu-Yuan.CollegeofBasicMedicalScience，HebeiUnitedUniversity，Tangshan063000，China

Objective:To explore the role ofmiR-150 in the developmentandmaturation of general thymus T cells and invariant NKT cell（iNKT）.Methods:Expression ofmiR-150 was detected by Real-time PCR.The quantity and phenotype changes of thymus general T cells and iNKT cells in miR-150 knock outmice were detected by flow cytometry.Results:miR-150 expressed in both general thymus T cells and iNKT cells，and expression ofmiR-150 increased gradually during the developmentandmaturation of iNKT cells.Deletion ofmiR-150 did not affect the development of general T cells but resulted in the decreased number and developmental defect of iNKT cells.Conclusion:miR-150 specially regulates the development and maturation of thymus iNKT cell in mice.

miR-150;Gene knock-out;T cell;iNKT cell

R392.11

A

1000-484X（2013）02-0130-06

10.3969/j.issn.1000-484X.2013.02.004

①河北省唐山市工人醫(yī)院，唐山063000

②河北省唐山市人民醫(yī)院，唐山063000

鄭全輝（1973年－），男，博士，講師，主要從事NKT細(xì)胞發(fā)育和功能的分子調(diào)控機(jī)制方面的研究，E-mail:zquanhui@yahoo.com。