大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白的表達(dá)及相關(guān)性研究

錢賢忠 施紅旗

大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白的表達(dá)及相關(guān)性研究

錢賢忠 施紅旗

目的 探討大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)的意義。 方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)80例大腸癌組織中Ezrin和PTEN蛋白的表達(dá)，并分析其與臨床和病理特點(diǎn)的關(guān)系。 結(jié)果 大腸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為77.5%（62/80），顯著高于正常大腸黏膜組織（P＜0.01）；PTEN蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率為46.3%（37/80），顯著低于正常大腸黏膜組織（P＜0.01）；Ezrin蛋白高表達(dá)PTEN蛋白低表達(dá)與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（均P＜0.01），而與年齡和組織學(xué)類型無(wú)關(guān)（均P＞0.05）；Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。 結(jié)論 Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)與大腸癌臨床病理特征和生物學(xué)行為有密切關(guān)系，聯(lián)合檢測(cè)Ezrin和PTEN蛋白的表達(dá)，可用于評(píng)估大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力，對(duì)大腸癌的預(yù)后判斷具有一定意義。

大腸腫瘤 腫瘤抑制基因 Ezrin蛋白 免疫組織化學(xué)

Colorectal neoplasms Tumor suppressor gene Ezrin Immunohistochemistry

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多階段和多基因改變的過(guò)程，其中抑癌基因的突變和原癌基因功能增強(qiáng)是主要的原因之一。大腸癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的重要因素，深入研究其機(jī)制對(duì)改善大腸癌患者總體預(yù)后有重要作用。因此，從抑癌基因和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因著手研究腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著重要意義。本研究對(duì)大腸癌組織中Ezrin蛋白和PTEN蛋白表達(dá)進(jìn)行了聯(lián)合檢測(cè)，比較了不同臨床和病理特點(diǎn)者Ezrin、PTEN的表達(dá)情況，并分析兩者的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集2009—2011我院80例大腸癌患者手術(shù)切除的石蠟包埋組織塊（術(shù)前已行化療或放療者除外），其中男63例，女17例；年齡28～72歲，平均58.9歲；高、中分化腺癌58例，低分化腺癌22例；有漿膜浸潤(rùn)55例，無(wú)漿膜浸潤(rùn)25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。臨床Dukes分期：A、B期38例，C、D期42例。另?yè)?5例正常大腸黏膜標(biāo)本作為對(duì)照。

1.2 檢測(cè)方法 免疫組化染色采用SP法。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟切片（厚4μm），HE染色。鼠抗人Ezrin免疫組化單克隆抗體（工作濃度1∶50）、兔抗人PTEN多克隆抗體（即用型）和SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司。以已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作空白對(duì)照。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)清晰棕褐色顆粒者為Ezrin或PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性。每例切片觀察5個(gè)高倍視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)的百分比。Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，≥10%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Kendall相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin和PTEN蛋白的表達(dá) 80例大腸癌中Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性62例（77.5%），15例正常大腸黏膜組織Ezrin蛋白表達(dá)均為陰性，兩者的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=33.4659，P＜0.01）。PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性 37例（46.3%），15例正常大腸黏膜組織PTEN蛋白表達(dá)均為陽(yáng)性，兩者的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.7296，P＜0.01）。不同臨床和病理特點(diǎn)的大腸癌患者Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)情況的比較，見(jiàn)表1及圖1-4（見(jiàn)插頁(yè)）。

表1 大腸癌患者Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)情況[例（%）]

從表1可見(jiàn)，不同年齡和組織學(xué)類型大腸癌患者Ezrin、PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；而不同Dukes分期、有無(wú)漿膜浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌患者，其Ezrin、PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。

2.2 Ezrin和PTEN蛋白表達(dá)的關(guān)系 Ezrin蛋白表達(dá)陰性者的PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為100%，Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性者的PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為30.6%，兩者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.582，P＜0.01）。

3 討論

Ezrin是ERM（Ezrin/Radixin/Moesin）家族的重要成員，對(duì)細(xì)胞膜區(qū)域的結(jié)構(gòu)和功能起到整合和穩(wěn)定的調(diào)控作用。Ezrin蛋白參與微絨毛形成，維持細(xì)胞形態(tài)，重塑細(xì)胞骨架，調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，并參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程[1-2]。有研究表明，Ezrin通過(guò)與腫瘤細(xì)胞表面的黏附分子發(fā)生作用來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的特性，影響腫瘤的分化、侵襲和轉(zhuǎn)移，被認(rèn)為是新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因[3]。本研究顯示，Ezrin蛋白在77.5%的大腸癌中呈陽(yáng)性表達(dá)，顯著高于正常大腸黏膜組織；Ezrin蛋白高表達(dá)與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表明Ezrin參與了大腸癌浸潤(rùn)和淋巴轉(zhuǎn)移的過(guò)程?？梢?jiàn)，Ezrin是一種具有正性調(diào)控的因子，Ezrin蛋白的異常表達(dá)賦予了腫瘤細(xì)胞的高轉(zhuǎn)移活性，通過(guò)改變腫瘤細(xì)胞極性與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞間黏附及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)黏附參與腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)而影響惡性腫瘤轉(zhuǎn)移[4]。

PTEN是第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)具有磷酸酶活性的抑癌基因，它的主要功能是使第二信使PIP3去磷酸化、抑制整合素下游分子焦點(diǎn)黏附激酶（Focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）及FAK下游分子P130Cas的酪氨酸磷酸化使細(xì)胞因子誘導(dǎo)的細(xì)胞分裂素活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）磷酸化水平明顯下降而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，從而抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[5-6]。本研究顯示，PTEN蛋白在46.3%的大腸癌中呈陽(yáng)性表達(dá)，顯著低于正常大腸黏膜組織；PTEN蛋白低表達(dá)與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表明PTEN蛋白陰性表達(dá)的腫瘤更具有侵襲性和轉(zhuǎn)移性。文獻(xiàn)報(bào)道[7]PTEN蛋白高表達(dá)的大腸癌細(xì)胞系，其黏附和遷移能力顯著降低，在PTEN缺失的細(xì)胞內(nèi)重新轉(zhuǎn)染PTEN，可抑制細(xì)胞的遷移和鋪展。PTEN抑制黏著斑形成可能主要通過(guò)抑制FAK-P130通路及通過(guò)改變細(xì)胞內(nèi)PI3，4，5P3的水平從而影響?zhàn)ぶ叩慕Y(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

本研究還發(fā)現(xiàn)，Ezrin蛋白表達(dá)陰性的18例大腸癌中PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為100%，而Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性的62例大腸癌中 PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為30.6%，兩者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01），提示在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，Ezrin和PTEN具有反向協(xié)同作用，共同參與大腸癌的發(fā)病機(jī)制和演進(jìn)過(guò)程。最近有學(xué)者[8]認(rèn)為，Ezrin和PTEN可能通過(guò)FAK相互影響。FAK是與細(xì)胞黏附關(guān)系密切的非受體型酪氨酸激酶，在整合素及生長(zhǎng)因子受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路中起樞紐作用。而過(guò)度表達(dá)的Ezrin蛋白能促進(jìn)FAK磷酸化位點(diǎn)的自動(dòng)磷酸化；另外，Ezrin蛋白還通過(guò)活化FAK和MAPK途徑，促進(jìn)黏著斑形成及腫瘤細(xì)胞與其他細(xì)胞黏附，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移[9]。另一方面，PTEN通過(guò)逆轉(zhuǎn)FAK的磷酸化或作用于FAK下游的效應(yīng)分子來(lái)調(diào)控細(xì)胞的遷移[10]。可見(jiàn)，Ezrin和PTEN均可通過(guò)黏著斑相互聯(lián)系，可通過(guò)共同的信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)生作用，影響腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。由此認(rèn)為：大腸癌組織中Ezrin蛋白的高表達(dá)和PTEN蛋白的低表達(dá)可能通過(guò)黏著斑和細(xì)胞骨架連接參與細(xì)胞表面復(fù)合物的形成，共同影響腫瘤細(xì)胞的遷徙能力；Ezrin通過(guò)促進(jìn)酪氨酸磷酸化后，其FAK能部分對(duì)抗PTEN的作用，而PTEN也通過(guò)這種負(fù)性調(diào)控FAK介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，發(fā)揮其抑癌作用，Ezrin和PTEN正是通過(guò)改變細(xì)胞黏附及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力等途徑參與大腸癌發(fā)生、發(fā)展的全過(guò)程。因而，聯(lián)合檢測(cè)Ezrin和PTEN蛋白的表達(dá)可作為判斷大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的一項(xiàng)客觀指標(biāo)，對(duì)大腸癌的預(yù)后判斷具有重要意義。

[1]Brambilla D,Fais S.The Janus-faced role of ezrin in"linking"cells to either normal or metastatic phenotype[J].Int J Cancer,2009, 125(10):2239-2245.

[2]Niggli V,Rossy J.Ezrin/radixin/moesin:versatile controllers of signaling molecules and of the cortical cytoskeleton[J].Int J Biochem Cell Biol,2008,40(3):344-349.

[3]Wald F A,Oriolo A S,Mashukov A,st al.Atypical protein kinase C(iota)activates ezrin in the apical domain of intestinal epithelial cells[J].J Cell Sci,2008,121(Pt5):644-654.

[4]Yeh T S,Tseng J H,Liu N J,et al.Significance of celluar distribution of ezrin in pancreatic cystic neoplasms and ductal adenocarcinoma[J].Arch Surg,2005,140(12):1184-1190.

[5]Wang Y,Romigh T,He X,et al.Resveratrol regulates the PTEN/ AKT pathway through androgen receptor-dependent and independent mechanisms in prostate cancer cell lines[J].Hum Mol Genet,2010,19(22):4319-4329.

[6]Wang Y B,Chen A M,Guo F J,et al.Expression and clinical significance of PTEN protein in osteosarcoma[J].Chinese-German Journal of Clinical Oncology,2008,7(5):296-299.

[7]Bowen K A,Doan H Q,Zhou B P,et al.PTEN loss induces epithelial-mesenchymal transition in human colon cancer cells[J]. Anticancer Res,2009,29(11):4439-4449.

[8]van Nlmwegen M J,van de Water B.Focal adhesion kinase:a potential target in cancer therapy[J].Biochem Pharmacol,2007, 73(5):597-609.

[9]Birukov K G,Leitinger N,Bochkov V N,et al.Signal transduction pathways activated in human pulmonary endothelial cells by Ox-PAPC,a bioactive component of oxidized lipoproteins[J]. Microvase Res,2004,67(1):18-28.

[10]Langlosis M J,Bergeron S,Bernatchez G,et al.The PTEN phosphatase controls intestinal epithelial cell polarity and barrier function:role in colorectal cancer progression[J].PLOS One, 2010,5(12):el5742.

（本文編輯：胥昀）

《浙江醫(yī)學(xué)》對(duì)作者署名的一般要求

同時(shí)具備以下3項(xiàng)條件者方可署名為作者：（1）參與選題和設(shè)計(jì)或資料的分析與解釋者；（2）起草或修改論文中關(guān)鍵性理論或其他主要內(nèi)容者；（3）能對(duì)編輯部的修改意見(jiàn)進(jìn)行核修，在學(xué)術(shù)界進(jìn)行答辯，并最終同意該文發(fā)表者。僅參與研究項(xiàng)目資金的獲得或收集資料者不能列為作者，僅對(duì)科研小組進(jìn)行一般管理者也不宜列為作者。對(duì)文章中的各主要結(jié)論，均必須至少有1位作者負(fù)責(zé)。作者中如有外籍作者，應(yīng)征得其同意，并在投稿時(shí)向編輯部提供相應(yīng)證明材料。集體署名的文稿，在題名下列出署名單位，于文末列出整理者姓名，并須明確該文的主要負(fù)責(zé)人，在論文首頁(yè)腳注通訊作者姓名、單位、郵政編碼及E-mail地址。通信作者一般只列1位，由投稿者確定。如需注明協(xié)作組成員，則于文末參考文獻(xiàn)前列出協(xié)作組成員的單位及姓名。作者的具體排序應(yīng)在投稿前即確定，在編排過(guò)程中不應(yīng)再改動(dòng)，確需改動(dòng)時(shí)必須出示單位證明。

本刊編輯部

2012-03-09）

321000 金華市中心醫(yī)院肝胰膽外科

【 Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of Ezrin and PTEN proteins in colorectal adenocarcinoma and its significance.Methods The expression of Ezrin and PTEN proteins was examined immunohistochemically with SP method in 80 cases of colorectal adenocarcinoma,and the relationships of the expression with clinicopathological characteristics of tumor was analyzed. Results The positive rates of Ezrin and PTEN protein expression in 80 cases of colorectal adenocarcinoma were 77.5% (62/80)and 46.3%(37/80)respectively.They were not correlated with age or histological type(P＞0.05).The high level of Ezrin protein expression and the low level of PTEN protein expression were correlated significantly with the Dukes'stage,serosa infiltration, lymph node metastasis of colorectal adenocarcinoma(P＜0.01).The expressions of Ezrin protein was negatively correlated with that of PTEN protein(P＜0.01).Conclusion The expressions of Ezrin and PTEN are correlated with the clinicopathological characteristics and biologic behaviors of colorectal adenocarcinoma.The combined detection of Ezrin and PTEN proteins may be helpful in evaluation of prognosis and aggressive potential of colorectal adenocarcinoma.