高繼緒

【摘 要】目的：探討CK19mRNA、CEA和CA199對(duì)結(jié)直腸癌預(yù)后判斷的價(jià)值及在隨診中的意義。方法：收集76例結(jié)直腸癌患者、35例結(jié)直腸良性疾病患者和20例健康獻(xiàn)血員的外周血細(xì)胞，分別抽提RNA，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定CK19mRNA水平；收集上述病例外周血血漿，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)CEA，CA199含量。 數(shù)據(jù)分別以t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果：三聯(lián)檢測(cè)的靈敏度、約登指數(shù)最高。結(jié)論：結(jié)直腸癌患者外周血CK19mRNA、CEA、CA199聯(lián)合檢測(cè)可起到互補(bǔ)作用，明顯提高檢測(cè)的靈敏度和約登指數(shù)，能較好的提高大腸癌患者的陽(yáng)性率，幫助臨床大夫選擇合理的治療方案，綜合判斷預(yù)后，在隨診中及早發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌；癌胚抗原；糖類(lèi)抗原CA199；預(yù)后

大腸癌是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率和死亡率均呈逐年上升趨勢(shì)， 且發(fā)病年齡明顯提前[1]。因此提高結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)診斷和預(yù)后判斷水平是腫瘤臨床工作的當(dāng)務(wù)之急。CK19是一種細(xì)胞角蛋白，常用作上皮細(xì)胞惡性腫瘤來(lái)源的標(biāo)志物，CEA和CA199常用作消化道腫瘤的標(biāo)志物。本文收集結(jié)直腸癌患者、結(jié)直腸良性疾病患者及健康獻(xiàn)血員外周血，檢測(cè)CK19mRNA和CEA、CA199水平，探討CK19mRNA、CEA和CA199對(duì)結(jié)直腸癌預(yù)后判斷的價(jià)值及在隨診中的意義。

1材料與方法

1.1臨床資料：選取2008年6月-2010年6月，術(shù)后病理檢查確診的大腸癌患者76例， 年齡在35-78 歲， 中位年齡54.3歲，其中，男45例，女31例。 手術(shù)分期按Dukes分期標(biāo)準(zhǔn)， 其中A期16 例， B 期22例， C 期38例， 管狀腺癌40例， 乳頭狀腺癌31例，其他5例。選取20例健康獻(xiàn)血員和35例結(jié)直腸良性疾病患者為對(duì)照，其中健康獻(xiàn)血員平均年齡37.6歲，男12例，女8例；結(jié)直腸良性疾病患者平均年齡43.2歲，男19例，女16例。

1.2研究方法

1.2.1 RT-PCR法測(cè)定外周血CK19mRNA表達(dá)水平 取空腹外周血5ml肝素抗凝，淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）后，按異硫氰酸胍（GIT）一步法提取總RNA。取2?g RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。并以β-actin作內(nèi)參對(duì)照與CK19分別進(jìn)行PCR：10μl-20μl RT反應(yīng)物加25mmol/l MgCl2 8μl ，4xdNTP 1μl ，上游引物P1 1μl ，下游引物P2 1μl， 10xPCR緩沖液10μl ，總反應(yīng)體積100μl .循環(huán)條件為94℃1min，58℃1min，72℃1min，循環(huán)35次，末次延長(zhǎng)7min[2]，取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μl行2%瓊脂糖凝膠電泳，CK19mRNA長(zhǎng)度為308bp。

1.2.2外周血腫瘤標(biāo)記物CEA及CA199的檢測(cè) 取外周血2ml分離血清。采用電化學(xué)發(fā)光法，檢測(cè)血清CEA及CA199水平，試劑盒推薦正常值如下：CEA<5.0ng/ml， CA199<30U/ml。本試驗(yàn)規(guī)定高于正常值為陽(yáng)性。

1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用spss13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間均數(shù)用X±s 表示、比較用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，以P <0.05 ，P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)直腸癌患者治療不同時(shí)間段CK19mRNA、CEA、CA199檢測(cè)結(jié)果如表1：各階段CK19mRNA、CEA、CA199三指標(biāo)聯(lián)檢陽(yáng)性率比單一指標(biāo)陽(yáng)性率有顯著性差異（P<0.05）， 綜合治療后結(jié)直腸患者陽(yáng)性率與術(shù)前有顯著性差異（P<0.05）；與術(shù)后一年復(fù)查無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)直腸癌患者術(shù)前、綜合治療后、術(shù)后一年的各指標(biāo)陽(yáng)性率與對(duì)照組有顯著性差異（P<0.05）。

3 討論

CK19是分布于上皮細(xì)胞的中間纖維絲，具有嚴(yán)格的組織分布，非上皮來(lái)源組織如正常血液不表達(dá)。在目前已經(jīng)鑒定出的二十多種角蛋白中，以CK8、CK18以及CK19在上皮細(xì)胞最有意義，常作為上皮細(xì)胞惡性腫瘤的有效標(biāo)志物。Saintigny等[3]以CK19CK7及MUC-1mRNA為指標(biāo)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR偵測(cè)大腸癌患者外周血認(rèn)為CK19mRNA在病患組有較高的表達(dá)，在健康志愿者外周血中低表達(dá)，并認(rèn)為CK19mRNA與大腸癌的發(fā)生有關(guān)。腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199目前均是在結(jié)直腸癌臨床診治中常用的標(biāo)志物之一， 二者均為糖蛋白，且均非結(jié)直腸癌的特異性腫瘤標(biāo)記物，二者在結(jié)直腸癌患者中均可升高，在結(jié)直腸癌的臨床診斷中起輔助作用[4]。研究顯示，腫瘤標(biāo)記物的聯(lián)合檢測(cè)可提高結(jié)直腸癌的檢出率[5]。

綜上所述，CK19mRNA、CEA和CA199三項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)較單一檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌的預(yù)后診斷和隨診價(jià)值更高，可使各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的不同優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，提高診斷的靈敏度，對(duì)結(jié)直腸癌的術(shù)后或化療后隨診動(dòng)態(tài)監(jiān)控及判斷預(yù)后有很好的臨床意義。

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