陳玉秀　李光鋒??

【摘要】 目的 考察國產(chǎn)市售蜂膠提取物中部分黃酮的含量。方法 采用高效液相色譜法分析測定不同蜂膠提取物中白楊素與高良姜素，進(jìn)行含量比較。結(jié)果 只有30%的樣品符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論 應(yīng)重視蜂膠對照藥材的代表性與各指標(biāo)成分之間的比例。

【關(guān)鍵詞】 國產(chǎn)蜂膠；白楊素；高良姜素；含量測定

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.06.040 文章編號：1004-7484（2013）-06-2898-01

蜂膠是西方蜜蜂（Apis mellifera）采集某些植物嫩芽分泌物或傷處流出的油脂、粘液、樹脂、橡膠等，并混入蜂蠟和其它分泌物，經(jīng)咀嚼加工而成的黏稠物質(zhì)。根據(jù)植物源不同，蜂膠分為巴西型蜂膠和歐洲型蜂膠[1]，前者僅存在于巴西；后者則在歐洲、亞洲及非洲都有分布。我國原產(chǎn)的中華蜜蜂幾乎不產(chǎn)蜂膠，國產(chǎn)蜂膠的來源一般是意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica），植物源主要是楊樹。

蜂膠含樹脂約50%-60%，蜂蠟30%，芳香揮發(fā)油10%和一些花粉等夾雜物。主要有黃酮類、酚類、內(nèi)酯、香豆精類、醛、酮、甾類化合物，還含有維生素，礦物質(zhì)等[2]，具有豐富的營養(yǎng)價值以及藥用價值。由于蜂膠在采集過程中摻雜有大量的雜質(zhì)，不能直接供藥用。因此，國內(nèi)蜂膠供應(yīng)廠家采用乙醇對蜂膠進(jìn)行提純，以蜂膠塊或者蜂膠粉的形式作為原料銷售。

中國藥典自2005版開始將蜂膠收錄為法定中藥材[3]。但尚未對提純蜂膠質(zhì)量做進(jìn)一步的要求。本文搜集了國內(nèi)主要蜂膠提取物供應(yīng)商提供的樣品進(jìn)行了含量測定，為進(jìn)一步制定蜂膠提取物的標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料與儀器

1.1 材料 不同來源的蜂膠樣本從市場購得，分別來自河南、浙江、廣東、云南等地。河南省蜂膠加工廠家最多，所以來源于河南省的樣本占絕對多數(shù)。將采集的蜂膠粉碎過40目篩，混勻保存。

1.2 儀器與試劑 Agilent1260高效液相色譜儀，包括四元泵、脫氣機(jī)、紫外檢測器、柱溫箱。甲醇（色譜純）、磷酸（分析純）、水（超純水）。高良姜素與白楊素購自中國食品藥品檢定研究院（含量測定用）；蜂膠對照藥材購自中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4] 色譜柱：AgilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm），流動相：甲醇-0.15%H3PO4（二者比例64：36），流速0.8ml·min-1，進(jìn)樣量10μL（定量環(huán)）。檢測波長268nm。理論塔板數(shù)不低于6000。

2.2 對照品溶液制備 對照品溶液的配制：分別稱取5mg干燥至恒重的對照品，用甲醇溶解，配制成1.0mg·ml-1對照品儲備溶液，避光保存。使用前稀釋至0.03mg·mL-1（白楊素）與0.02mg·ml-1（高良姜素）。

2.3 樣品溶液制備 蜂膠溶液的制備：取樣品粉末約0.1g，精密稱定，置索式提取器中，加丙酮100ml，加熱回流至提取液無色，提取液回收溶劑至干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10l，測定白楊素（C15H10O4）和高良姜素（C15H10O5）的含量。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 將對照品溶液，按2.1色譜條件，分別以2l，4l，8l，10l，16l依次進(jìn)樣。根據(jù)各對照品進(jìn)樣質(zhì)量與峰面積分別繪制對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：白楊素：Y=222.4x-10.2，r=0.9992；高良姜素：y=214.3x+12.06，r=0.9994相關(guān)系數(shù)表明，在線性范圍內(nèi)各對照品質(zhì)量與峰面積相關(guān)性良好。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗 取同一份蜂膠樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，考察測定峰相對保留時間和相對峰面積的一致性，結(jié)果表明，各測定色譜峰保留時間的RSD均在0.5%以內(nèi)，相對峰面積的RSD均在1.0%以內(nèi)。

2.5.2 穩(wěn)定性試驗 取同一份蜂膠樣品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測得各特征色譜峰的相對保留時間的RSD均在0.8%以內(nèi)，相對峰面積RSD均在1.1%以內(nèi)，表明樣品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.3 重復(fù)性試驗 取同一批蜂膠樣品溶液5份，按供試品溶液的制備方法，分別制成供試品溶液，結(jié)果表明，測得各色譜峰的相對保留時間的RSD均在0.6%以內(nèi)，相對峰面積RSD均在3.5%以內(nèi)。

2.6 含量測定結(jié)果 見表1。

3 討 論

3.1 蜂膠質(zhì)量問題是近年來保健品行業(yè)的一個熱點。2010版藥典對蜂膠含量測定項目的要求是白楊素不得少于2.00%，高良姜素不得少于1.00%[4]。根據(jù)本實驗的測定，不少廠家的蜂膠尚達(dá)不到含量測定要求，甚至中國食品藥品檢驗研究院提供的蜂膠對照藥材也不合格，鑒于市場上銷售的蜂膠實際上均是提純后的制品，建議有關(guān)部門考慮對照藥材的代表性。

3.2 有文獻(xiàn)指出市售蜂膠很多實際上是楊樹膠并提出了鑒別的方法，主要原理是通過觀測指紋雜峰的位置與比例對摻偽情況進(jìn)行判定[5-6]。本文認(rèn)為亦要觀察白楊素/高良姜素的比例變化。根據(jù)本文對蜂膠質(zhì)量測定結(jié)果以及其他研究者提供的數(shù)據(jù)分析，正常情況下蜂膠中這兩種成分的含量應(yīng)在0.5-2：1的范圍內(nèi)，過高或者過低都提示不正常。建議將白楊素/高良姜素的含量比例納入監(jiān)控范圍。

參考文獻(xiàn)

[1] 玄紅專，胡福良.不同地區(qū)蜂膠抗氧化活性與化學(xué)組分的研究進(jìn)展[J].蜜蜂雜志，2009，2（7）.

[2] Burdock G A.Review of the biological properties and toxicity of bee propolis（propolis）[J].Food and Chemical Toxicology，1998，36（4）：347-363.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 一部[S].中國醫(yī)藥科技出版社，2005.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 一部[S].中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[5] 盛文勝，杜青桃，李樹嵐，等.蜂膠與楊樹膠中八種黃酮與肉桂酸含量的測定[J].中國蜂業(yè)，2008，3（59）：7-8.

[6] 張翠平，胡福良.蜂膠與楊樹膠 HPLC 指紋圖譜鑒別[J].中國食品學(xué)報，2011，11（1）：222-225.