趙 琰，吳婷婷，李翼飛，孫 曄，孫 慧，胡麗娜，屈會(huì)化，王慶國(guó)

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，北京 100029;3.北京中醫(yī)藥大學(xué)“經(jīng)典方劑的應(yīng)用基礎(chǔ)研究”創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，北京 100029)

樹鼩(Tupaia belangeri，tree shrew)，主要分布于亞洲東南部的熱帶和亞熱帶地區(qū)，我國(guó)西南地區(qū)(云南、四川、貴州、廣西等)具有豐富的資源。自從1924年Le Gros Clark發(fā)現(xiàn)了樹鼩與靈長(zhǎng)類在物種起源上的密切關(guān)系以來，樹鼩開始引起各學(xué)科研究者的廣泛興趣，在動(dòng)物分類學(xué)上，目前多將其定為靈長(zhǎng)目-原猿亞目-樹鼩科［1］。與嚙齒類動(dòng)物相比，樹鼩和人類具有更高的相似度，其研究成果能更有效地轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用;而與獼猴等大型靈長(zhǎng)類動(dòng)物相比，樹鼩具有體形小、容易飼養(yǎng)、成本低等優(yōu)點(diǎn)，因此更有利于被深入研究并廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域。世界衛(wèi)生組織早在20多年前就呼吁用樹鼩替代靈長(zhǎng)類動(dòng)物［2］?，F(xiàn)在，世界許多國(guó)家已經(jīng)開展了樹鼩人工馴繁和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化的研究，并取了得豐碩成果［3］。

云南省具有豐富的野生以及人工繁殖樹鼩資源，中科院昆明動(dòng)物所已具備規(guī)模提供實(shí)驗(yàn)用樹鼩(云南樹鼩Tupaia belangeri chinensis)的能力。本實(shí)驗(yàn)室自2008年開始關(guān)注將樹鼩引入中醫(yī)藥病證結(jié)合動(dòng)物模型研究中，但云南樹鼩是亞熱帶物種，尚未有在北京長(zhǎng)期飼養(yǎng)的先例。為滿足長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)觀察的需要，我們必須在遠(yuǎn)離樹鼩天然生存地的北京，營(yíng)造適合樹鼩生存、生長(zhǎng)和繁殖的飼養(yǎng)環(huán)境，同時(shí)建立統(tǒng)一規(guī)范的培育管理方法。為此，我們通過觀察比較，深入研究了樹鼩的飼養(yǎng)管理方法，在借鑒云南昆明動(dòng)物所建立的“實(shí)驗(yàn)樹鼩”相關(guān)技術(shù)的云南省地方性標(biāo)準(zhǔn)，及德國(guó)靈長(zhǎng)類中心已有經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合北京中醫(yī)藥大學(xué)的實(shí)際條件，在具體操作過程中，積累了大量關(guān)于樹鼩生活習(xí)性的資料，并形成了具有本實(shí)驗(yàn)室特色的樹鼩飼養(yǎng)管理方法，希望能為北方地區(qū)(北京)樹鼩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理提供借鑒。

1 材料

1.1 動(dòng)物

云南樹鼩雌雄各半，體重(120±10)g，由中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物所提供，動(dòng)物許可證:滇發(fā)馴繁(92-29)號(hào)。分3批引進(jìn)，每批20頭，共60頭。

1.2 設(shè)備

籠舍(外籠485 mm×350 mm×200 mm，巢籠290 mm×178 mm×160 mm)自制;固定筒(白色PVC管，內(nèi)徑50 mm，長(zhǎng)150 mm)自制;開口器(長(zhǎng)4 cm，直徑0.5 cm)自制。

2 方法

2.1 引進(jìn)流程

樹鼩名列《國(guó)家保護(hù)的有益的或者有重要經(jīng)濟(jì)、科學(xué)研究?jī)r(jià)值的陸生野生動(dòng)物名錄》，按國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物進(jìn)行管理。根據(jù)《中華人民共和國(guó)野生動(dòng)物保護(hù)法》第十七條、第二十二條及《中華人民共和國(guó)陸生野生動(dòng)物保護(hù)實(shí)施條例》第十九條、第二十五條等有關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定，其引進(jìn)程序需按規(guī)定進(jìn)行:因科學(xué)研究、馴養(yǎng)繁殖等特殊情況需要出售收購利用國(guó)家二級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物或者其產(chǎn)品的，必須經(jīng)省、自治區(qū)、直轄市政府野生動(dòng)物行政主管部門或者其授權(quán)的單位批準(zhǔn)。據(jù)此我們按以下程序(圖1)合法引進(jìn)樹鼩并珍惜合理地加以利用。

圖1 購買樹鼩流程圖。Fig.1 Purchase process of tree shrews.

2.2 籠舍

對(duì)第1批樹鼩分別采取3種方式居住，即單獨(dú)大籠(485 mm×350 mm×200 mm)，大籠帶透明巢籠(大籠485 mm×350 mm×200 mm，半透明巢籠290 mm×178 mm×160 mm)和大籠帶避光巢籠(大籠485 mm×350 mm×200 mm，不透光巢籠290 mm×178 mm×160 mm)，每天定時(shí)觀察樹鼩狀態(tài)并記錄。

2.3 飼養(yǎng)方式

分單只飼養(yǎng)和雌雄配對(duì)兩種方式飼養(yǎng)，每天定時(shí)觀察樹鼩狀態(tài)并記錄。

2.4 飼料配方

文獻(xiàn)報(bào)道樹鼩的飼料配方多較為復(fù)雜，為探索既能保證樹鼩生活質(zhì)量又方便制作的飼料配方，我們對(duì)第1批樹鼩分別進(jìn)行了3種不同配方的飼養(yǎng):以大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料為底料，分別加以蒸餾水調(diào)糊;大鼠飼料加蒸餾水煮熟;以及大鼠飼料加蒸餾水煮熟加蔗糖并佐以輔食進(jìn)行喂養(yǎng)。每天觀察樹鼩進(jìn)食情況并記錄。

2.5 管理

2.5.1 環(huán)境管理:通過對(duì)樹鼩行為及狀態(tài)的觀察，記錄影響樹鼩的溫度、濕度、噪聲、光線等環(huán)境因素，對(duì)樹鼩居住環(huán)境進(jìn)行調(diào)整，以保持正常穩(wěn)定的生活狀態(tài)。

2.5.2 衛(wèi)生管理:根據(jù)實(shí)際情況，確定保持樹鼩籠舍衛(wèi)生的措施，如定期打掃、消毒等，控制微生物數(shù)量，保持潔凈。

2.5.3 人員管理:由4名研究生長(zhǎng)期負(fù)責(zé)，方便規(guī)范操作并及時(shí)總結(jié)管理經(jīng)驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 籠舍

根據(jù)文獻(xiàn)記載及親身飼養(yǎng)的經(jīng)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)與大鼠、豚鼠、兔等常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同，樹鼩運(yùn)動(dòng)能力極強(qiáng)，動(dòng)作極敏捷，活動(dòng)范圍很大。其基本動(dòng)作包括跑、跳、竄、躍、攀爬甚至后空翻等，這決定了其籠舍不能太小。雖然樹鼩行為敏捷，但同時(shí)它們還具有易驚，怕噪音等特點(diǎn)，需要可供躲避的巢穴。基于以上樹鼩習(xí)性，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際條件以及3種不同籠舍的飼養(yǎng)效果，我們發(fā)現(xiàn)大籠帶避光巢籠的方式有利于維持樹鼩安定的狀態(tài)。

本室自制樹鼩籠舍(圖2)，大籠(利用大鼠飼養(yǎng)籠具改制)規(guī)格為485 mm×350 mm×200 mm，PP聚丙烯塑料，上面為鋼絲籠蓋，可開啟，鋼絲籠蓋上附加遮光蓋;巢籠(利用小鼠飼養(yǎng)籠具改制)為290 mm×178 mm×160 mm，PP聚丙烯塑料，黑色避光，籠底為網(wǎng)狀利于對(duì)樹鼩進(jìn)行觀察和排泄物落出，于側(cè)壁開口70 mm×70 mm作為出入口。

圖2 北京中醫(yī)藥大學(xué)樹鼩飼養(yǎng)籠。Fig.2 The appearance of the self-constructed hutch of tree shrews in BUCM.

3.2 飼養(yǎng)方式

文獻(xiàn)記載雄性樹鼩如果群養(yǎng)會(huì)競(jìng)爭(zhēng)出不同的等級(jí)，表現(xiàn)為雄性同籠經(jīng)常打架，決出主從之后劣勢(shì)樹鼩有抑郁絕食傾向。而我們發(fā)現(xiàn)樹鼩雌雄配對(duì)飼養(yǎng)較單籠飼養(yǎng)者情緒更穩(wěn)定，因此后期均采取雌雄同籠飼養(yǎng)。其中第3批實(shí)驗(yàn)樹鼩因運(yùn)輸過程中1只雄性樹鼩死亡，故1號(hào)籠為單只飼養(yǎng)，與其余2～10號(hào)籠雌雄配對(duì)飼養(yǎng)者比較，單只樹鼩出現(xiàn)敏感多動(dòng)，不愛進(jìn)入巢籠等不同表現(xiàn)，且在進(jìn)食量上存在較大波動(dòng)(圖3)。

3.3 飼料配方

比較幾種飼料配方，我們發(fā)現(xiàn)樹鼩喜食香甜柔軟多汁的食物，不愛吃生硬干澀的食物。樹鼩為雜食動(dòng)物，攝食廣泛，需要經(jīng)常攝入蛋白質(zhì)，如果長(zhǎng)期缺乏蛋白質(zhì)攝入則會(huì)導(dǎo)致體質(zhì)下降而生病。因此我們結(jié)合實(shí)際條件，以保證營(yíng)養(yǎng)又方便制作為前提，確定了每日定量定時(shí)喂養(yǎng)的飼料配方:以煮熟大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料粉加白砂糖為主食，水果為輔食，每周一次肉類補(bǔ)充蛋白質(zhì)(表1)。

圖3 單只飼養(yǎng)(1號(hào)籠)與雌雄同養(yǎng)(2～10號(hào)籠)樹鼩單位飲食量的波動(dòng)。Fig.3 The variation of food intake units of the tree shrew bred singularly in the hutch No.1 and male-female mixed breed in the hutches No.2 －10.

表1 北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)樹鼩飼料配方。Tab.1 Feed composition of the tree shrews bred in BUCM.

3.4 管理

3.4.1 環(huán)境管理:樹鼩飼養(yǎng)于獨(dú)立動(dòng)物飼養(yǎng)間，普通飼養(yǎng)環(huán)境，執(zhí)行的環(huán)境管理標(biāo)準(zhǔn)如表2所示:

表2 北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)樹鼩飼養(yǎng)環(huán)境指標(biāo)。Tab.2 Environmental standards of tree shrew breeding in BUCM.

3.4.2 衛(wèi)生管理:樹鼩飼養(yǎng)執(zhí)行的衛(wèi)生管理標(biāo)準(zhǔn)見表3。

表3 北京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)樹鼩衛(wèi)生管理。Tab.3 Cleaning management of tree shrews bred in BUCM.

3.4.3 人員管理:由4名研究生專門負(fù)責(zé)，統(tǒng)一操作。每天接觸樹鼩前穿潔凈隔離服、佩戴帽子、口罩、手套，并注意動(dòng)作輕柔，保持安靜。在每天準(zhǔn)備飲食，清潔餐具過程中，注意觀察樹鼩飲食量、排泄物、行為和情緒狀態(tài)等情況，并作好詳細(xì)記錄。在開關(guān)籠子的過程中應(yīng)特別仔細(xì)小心，防止樹鼩逃逸。

3.5 樹鼩證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)基準(zhǔn)指標(biāo)(擬定)

在長(zhǎng)期的飼養(yǎng)管理過程中，我們發(fā)現(xiàn)樹鼩具有明顯的生物節(jié)律和情緒變化，以及敏感的應(yīng)激性和很強(qiáng)的記憶力等特性。據(jù)此我們擬定了可用于樹鼩證候?qū)傩耘袆e的基準(zhǔn)指標(biāo)，為建立樹鼩病證結(jié)合動(dòng)物模型奠定基礎(chǔ)。如表4所示，評(píng)價(jià)指標(biāo)分為3大類共20項(xiàng)，其中認(rèn)知能力的測(cè)試最為復(fù)雜，我們對(duì)其進(jìn)行了專門的研究，將另文介紹。

4 討論

4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理規(guī)范化的重要性

在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的四個(gè)基本條件 Animal，Equipment，Information，Reagent(簡(jiǎn)稱 AEIR 四要素)中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量往往是影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)質(zhì)量和水平的制約性要素，使用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并在標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、規(guī)律、可重復(fù)的前提，是保證醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究結(jié)果應(yīng)用價(jià)值的重要條件。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理是標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)內(nèi)容之一，規(guī)范化的飼養(yǎng)管理是各項(xiàng)研究工作開展的前提。

表4 樹鼩證候?qū)傩栽u(píng)價(jià)基準(zhǔn)指標(biāo)(擬定)。Tab.4 Evaluatrion indicators of tree shrew syndrome.

4.2 樹鼩的飼養(yǎng)管理現(xiàn)狀

Gonaway1965年首次報(bào)道樹鼩進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，我國(guó)從上世紀(jì)70～80年代開展樹鼩人工馴養(yǎng)繁殖及相關(guān)研究［4］。但目前國(guó)內(nèi)對(duì)樹鼩的飼養(yǎng)繁殖主要集中在云南、廣西、武漢、上海等南方省市，在我國(guó)北方僅有甘肅多年前曾報(bào)道過對(duì)樹鼩飼養(yǎng)繁殖的小規(guī)模探索。雖然昆明動(dòng)物所已擁有全國(guó)最大的樹鼩飼養(yǎng)繁殖基地，并建立了“實(shí)驗(yàn)樹鼩云南省地方標(biāo)準(zhǔn)”，但要形成一個(gè)遺傳背景清晰可控、微生物等級(jí)監(jiān)管及飼養(yǎng)管理標(biāo)準(zhǔn)化的樹鼩品系(昆明樹鼩品系)耗時(shí)很長(zhǎng)。另外，樹鼩作為越來越受矚目的“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物明星”，在全國(guó)各地的廣泛應(yīng)用勢(shì)在必然，如何使作為亞熱帶物種的樹鼩適合本地氣候條件是其成為標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的必經(jīng)之路。

4.3 本實(shí)驗(yàn)室建立的樹鼩飼養(yǎng)管理方法

本實(shí)驗(yàn)室探索了樹鼩在北京地區(qū)實(shí)際條件下，如何能夠保持良好生存狀態(tài)所需的飼養(yǎng)、管理方法。在飼養(yǎng)籠舍方面，本實(shí)驗(yàn)自制籠舍規(guī)格參考了昆明醫(yī)學(xué)院的樹鼩籠舍規(guī)格，大小相似，樹鼩適應(yīng)良好。但本室的籠舍改自大小鼠籠，制作簡(jiǎn)便，貨源充足，能夠短時(shí)間內(nèi)滿足大規(guī)模飼養(yǎng)的需要。而且本自制籠舍使用方便，功能靈活多樣，為樹鼩實(shí)驗(yàn)研究的開展提供了極大的輔助和便利。

在飼養(yǎng)方式方面，雌雄1∶1配對(duì)的方式對(duì)大多數(shù)樹鼩來說非常合適，雌雄樹鼩之間相處融洽而且交流互動(dòng)明顯，配對(duì)飼養(yǎng)的樹鼩身體和精神狀態(tài)均較單只飼養(yǎng)樹鼩穩(wěn)定。雌雄1∶1配對(duì)有利于對(duì)樹鼩性行為相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)以及開展繁殖工作。

本實(shí)驗(yàn)室的飼料配方源自大鼠基礎(chǔ)飼料，營(yíng)養(yǎng)全面均衡，并且針對(duì)樹鼩對(duì)食物的特殊生理需求，增加了水果和蛋白質(zhì)類以保證營(yíng)養(yǎng)。事實(shí)證明本飼料配方深受樹鼩喜愛，樹鼩體重上升明顯，精神狀態(tài)良好，被毛潤(rùn)澤，而且每次喂食前后都發(fā)出歡快的叫聲并迅速進(jìn)食。

在管理方面，保證溫度適宜是樹鼩適應(yīng)北京氣候的首要條件，我們發(fā)現(xiàn)規(guī)范統(tǒng)一、有規(guī)律的接觸對(duì)樹鼩刺激最小，而且有助于對(duì)樹鼩異常表現(xiàn)的發(fā)現(xiàn)。

我們?cè)陲曫B(yǎng)和實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，樹鼩對(duì)外界的刺激十分敏感，并且其生活具有明星節(jié)律性，光照、喂食時(shí)間、實(shí)驗(yàn)時(shí)間都很影響其生活及繁育，這些現(xiàn)象提示樹鼩存在明顯的生物節(jié)律、敏感的應(yīng)激性和精準(zhǔn)的記憶力。

［1］Hubrecht R，Kirkwood J.The UFAW Handbook on the Care and Management of Laboratory and Other Research Animals［M］.8th ed.New York:Wiley-Blackwell.2010.20:262.

［2］彭燕章，葉智章，鄒如金，等.樹鼩生物學(xué)［M］.昆明:云南科技出版社，1991.

［3］沈培清，鄭紅，劉汝文，等.中國(guó)樹鼩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究進(jìn)展和展望［J］.動(dòng)物學(xué)研究，2011，32(1):109－114.

［4］沈培清，劉美芳，劉汝文，等.樹鼩的應(yīng)用和標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)業(yè)化研究［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2008，25(1):49－52.