連接黏附因子-A在乳腺癌中的表達(dá)與意義

高 鵬 黃錦宇 鄢德宏 徐瑩瑩▲

1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院乳腺外科，沈陽 110000；2.中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸腫瘤外科，沈陽 110000；3.遼寧省新民市人民醫(yī)院外一科，遼寧新民 110300

連接黏附因子（junctional adhesion molecule，JAM）超家族蛋白是一種跨膜蛋白，廣泛表達(dá)于上皮及內(nèi)皮細(xì)胞的緊密連接處，并在血小板和白細(xì)胞等血液細(xì)胞表達(dá)[1-2]。JAM的生理功能包括保持上皮細(xì)胞的極性，維持細(xì)胞間黏附，調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的形態(tài)，調(diào)控細(xì)胞遷移等[3-4]。近些年逐漸有文獻(xiàn)報道JAM家族中的JAM-A與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并已成為全世界研究的熱點。但JAM-A與乳腺癌的關(guān)系國內(nèi)尚無研究，因此本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測乳腺癌組織中JAM-A的表達(dá)并探討其與臨床病理特征和患者預(yù)后之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2005年1月～2007年12月中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科乳腺癌切除標(biāo)本52例，病理結(jié)果均證實為浸潤性乳腺癌，所有患者均有完整的臨床資料和隨訪信息。

1.2 主要試劑

JAM-A 抗體（clone 2E3-1C8）購于 Abnova公司（德國）。通用型SABC試劑盒（即用型）、DAB試劑盒均購自武漢博士德有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)

組織切片常規(guī)脫蠟水化，雙氧水阻斷內(nèi)源性酶，緩沖液高壓修復(fù)，室溫冷卻30 min，加一抗于濕盒中4℃過夜，加入二抗，置濕盒中37℃ 30 min，加入SABC液于濕盒中30 min，最后加入DAB顯色液顯色1～2 min，加入蘇木素復(fù)染液中復(fù)染4 min，鹽酸乙醇分化，梯度乙醇透明，中性樹膠封片。

1.4 染色結(jié)果判定

染色結(jié)果基于染色強度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行綜合評分，具體如下。

1.4.1 染色強度 細(xì)胞無染色，0分；細(xì)胞呈淺黃色，1分；細(xì)胞呈深黃色，2分；細(xì)胞呈深棕色，3分。

1.4.2 陽性細(xì)胞比例 無陽性細(xì)胞表達(dá)，0分；陽性表達(dá)細(xì)胞比例＜25%，1分；陽性表達(dá)細(xì)胞比例介于25%~50%，2分；陽性表達(dá)細(xì)胞比例介于50%~75%，計3分；陽性表達(dá)細(xì)胞比例＞75%，4分。

上述兩種判斷標(biāo)準(zhǔn)得分乘積為最終計分結(jié)果：＜4分為JAM-A陰性表達(dá)，≥4分為陽性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，JAM-A表達(dá)與臨床資料的關(guān)系采用χ2檢驗，JAM-A陰性表達(dá)與JAM-A陽性表達(dá)患者的生存采用Kaplan-Miere法描繪，差異性采用Log-Rank檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

52例患者中，共有16例（30.8%）為JAM-A陽性表達(dá)，且均為細(xì)胞膜表達(dá)。

JAM-A的表達(dá)情況與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小明顯相關(guān)，而與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子受體2（HER2）無明顯相關(guān)性，與JAM-A陰性患者相比，JAM-A陽性表達(dá)的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率明顯減小，較大腫瘤的發(fā)生概率亦明顯低于JAM-A陰性患者（表1），上述結(jié)果表明，JAM-A在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起腫瘤抑制因子的作用。

生存分析結(jié)果顯示，JAM-A陽性患者的5年生存率為93.8%，JAM-A陰性患者的5年生存率為84.9%，兩組5年生存率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.30）（圖1）。

表1 JAM-A表達(dá)與臨床資料的關(guān)系[n（%）]

圖1 JAM-A陰性表達(dá)與JAM-A陽性表達(dá)的生存曲線

3 討論

在多數(shù)腫瘤中，JAM-A被認(rèn)為是腫瘤進(jìn)展的負(fù)調(diào)控因子。Gutwein等[5]發(fā)現(xiàn)，JAM-A在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯低于癌旁和正常腎組織，在腎癌細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)了JAM-A對腫瘤細(xì)胞遷徙能力的抑制功能。Fong等[6]利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測JAM-A在186例胰腺癌組織中的表達(dá)情況時發(fā)現(xiàn)，JAM-A的表達(dá)降低與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和腫瘤分期呈明顯相關(guān)，預(yù)后分析顯示JAM-A表達(dá)有利于腫瘤患者的預(yù)后，并且利用多因素證明JAM-A的表達(dá)情況是獨立的預(yù)后因素。Nava等[7]通過體內(nèi)及體外實驗證明，JAM-A能通過同源二聚體的形式抑制腸上皮細(xì)胞的增殖能力，并且發(fā)現(xiàn)JAM-A是通過抑制Akt/b-catenin通路發(fā)揮相應(yīng)的功能。在黑色素細(xì)胞瘤中，Ghislin等[8]發(fā)現(xiàn)利用siRNA降低內(nèi)源性JAM-A表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的遷徙能力明顯增強。

JAM-A在乳腺癌的進(jìn)展中究竟發(fā)揮著怎樣的作用一直存在爭議。Brennan等[9]在乳腺癌的組織芯片中檢測JAM-A的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)癌灶中的JAM-A表達(dá)明顯高于正常乳腺組織，并且乳腺癌中JAM-A的表達(dá)與HER2陽性、ER陰性、腫瘤分期明顯相關(guān)。同樣，McSherry等[10]利用乳腺癌組織芯片證明了Brennan的結(jié)果，JAM-A的高表達(dá)與HER2表達(dá)以及TNM分期具有相關(guān)性；此外，生存分析顯示JAM-A的表達(dá)與乳腺癌患者的不良預(yù)后相關(guān)。McSherry等[11]在一篇研究中發(fā)現(xiàn)，JAM-A能夠通過調(diào)控Rap1 GTPase和β1-integrin來發(fā)揮促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷徙的能力。而G觟tte等[12]的研究證明了JAM-A作為miR-145的下游靶基因，可以介導(dǎo)miR-145對乳腺癌細(xì)胞的侵襲和遷徙能力的調(diào)控，并得出JAM-A能夠增強乳腺癌細(xì)胞的遷徙和侵襲能力的結(jié)論。與上述研究的結(jié)果相反，Naik等[13]在一篇研究JAM-A與乳腺癌關(guān)系的研究中指出，JAM-A的表達(dá)明顯低于癌旁組織，并且在轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)最低；在乳腺癌細(xì)胞系后高表達(dá)JAM-A后，腫瘤細(xì)胞的運動能力以及侵襲能力大幅度減弱，并認(rèn)為JAM-A高表達(dá)后腫瘤細(xì)胞間的緊密連接形成增多是其調(diào)控腫瘤細(xì)胞遷徙和侵襲的機制。

雖然國際上JAM-A對乳腺癌進(jìn)展的調(diào)控已成為研究熱點，但國內(nèi)尚無此方面研究。為了填補國內(nèi)這一空白，本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測JAM-A在乳腺癌組織中的表達(dá)情況并探討它和臨床病理和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果表明，JAM-A的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小呈明顯的負(fù)相關(guān)，JAM-A陽性表達(dá)的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率明顯減小，較大腫瘤的發(fā)生概率亦明顯低于JAM-A陰性患者。結(jié)果表明，JAM-A在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起腫瘤抑制因子的作用，這一結(jié)果與國外的一篇研究報道結(jié)果一致[13]。盡管JAM-A與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小明顯相關(guān)，但JAM-A陽性與JAM-A陰性患者的生存差異無統(tǒng)計學(xué)意義，認(rèn)為該結(jié)果主要與樣本量較小有關(guān)，從生存率上可以看出，JAM-A陽性患者的生存要略好于JAM-A陰性患者，因此，本研究推測，如果適當(dāng)擴(kuò)大樣本量，兩組之間的生存差異很可能有統(tǒng)計學(xué)意義。

目前JAM-A正引起腫瘤學(xué)者的關(guān)注，相信隨著研究的不斷深入，JAM-A可能會成為輔助腫瘤診斷和判斷預(yù)后的一個標(biāo)志物，并且可能為腫瘤的治療提供一個新靶點。

[1]Martìn-Padura I，Lostaglio S，Schneemann M，et al.Junctional adhesion molecule，a novel member of the immunoglobulin superfamily that distributes at intercellular junctions and modulates monocyte transmigration[J].J Cell Biol，1998，142（1）：117-127.

[2]Naik UP，Eckfeld K.Junctional adhesion molecule 1 （JAM-1）[J].J Biol Regul Homeost Agents，2003，17（4）：341-347.

[3]Liu Y，Nusrat A，Schnell FJ，et al.Human junction adhesion molecule regulates tight junction resealing in epithelia[J].J Cell Sci，2000，113（Pt 13）：2363-2374.

[4]Liang TW，DeMarco RA，Mrsny RJ，et al.Characterization of huJAM：evidence for involvement in cell-cell contact and tight junction regulation[J].Am J Physiol Cell Physiol，2000，279（6）：C1733-C1743.

[5]Gutwein P，Schramme A，Voss B，et al.Downregulation of junctional adhesion molecule-A is involved in the progression of clear cell renal cell carcinoma[J].Biochem Biophys Res Commun，2009，380（2）：387-391.

[6]Fong D，Spizzo G，Mitterer M，et al.Low expression of junctional adhesion molecule A is associated with metastasis and poor survival in pancreatic cancer[J].Ann Surg Oncol，2012，19（13）：4330-4336.

[7]Nava P，Capaldo CT，Koch S，et al.JAM-A regulates epithelial proliferation through Akt/β-catenin signalling[J].EMBO Rep，2011，12（4）：314-320.

[8]Ghislin S，Obino D，Middendorp S，et al.Junctional adhesion molecules are required for melanoma cell lines transendothelial migration in vitro[J].Pigment Cell Melanoma Res，2011，24（3）：504-511.

[9]Brennan K，McSherry EA，Hudson L，et al.Junctional adhesion molecule-A is co-expressed with HER2 in breast tumors and acts as a novel regulator of HER2 protein degradation and signaling[J].Oncogene，2012，32（22）：2799-2804.

[10]McSherry EA，McGee SF，Jirstrom K，et al.JAM-A expression positively correlates with poor prognosis in breast cancer patients[J].Int J Cancer，2009，125（6）：1343-1351.

[11]McSherry EA，Brennan K，Hudson L，et al.Breast cancer cell migration is regulated through junctional adhesion molecule-A-mediated activation of Rap1 GTPase[J].Breast Cancer Res，2011，13（2）：R31.

[12]G觟tte M，Mohr C，Koo CY，et al.miR-145-dependent targeting of junctional adhesion molecule A and modulation of fascin expression are associated with reduced breast cancer cell motility and invasiveness[J].Oncogene，2010，29（50）：6569-6580.

[13]Naik MU，Naik TU，Suckow AT，et al.Attenuation of junctional adhesion molecule-A is a contributing factor for breast cancer cell invasion[J].Cancer Res，2008，68（7）：2194-2203.