葉穎霞

多花野牡丹主要含有黃酮、鞣質(zhì)和酚酸類等物質(zhì), 其黃酮類成分為發(fā)揮抑菌活性的主要藥效成分［1,2］。本論文主要對多花野牡丹的黃酮類成分進(jìn)行研究, 為進(jìn)一步研究多花野牡丹資源提供實驗基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 EL303 電子天平；HH-6恒溫水浴鍋；UV1102紫外-可見分光光度計；WFH-203B 紫外燈；玻璃板；RE-3000D 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。試藥 多花野牡丹植株；硅膠G、HF254；羧甲基纖維素鈉；甲醇；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 多花野牡丹中黃酮類化合物的提取 取多花野牡丹葉片粗粉1 kg用95%乙醇于80℃水浴提取3次, 1 h/次, 濾過,收集濾液后減壓回收乙醇, 得墨綠色浸膏, 取適量浸膏溶于150 ml蒸餾水中, 用石油醚脫脂, 取水層用乙酸乙酯萃取,蒸干, 殘渣加乙酸乙酯溶解, 即得多花野牡丹黃酮提取液(供試品溶液1)。

2.2 薄層色譜分離提純黃酮類化合物 取多花野牡丹黃酮提取液, 以相應(yīng)試劑為陰性溶液, 點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚－乙酸乙酯－氯仿(8：3：2)為展開劑, 展開, 取出,晾干, 置紫外燈(254 nm)下檢視。結(jié)果表明, 供試品色譜中出現(xiàn)五條熒光帶, 記錄黃綠色的熒光帶(Rf=0.19), 其余為藍(lán)色熒光；陰性對照品色譜中無熒光。刮取黃綠色熒光帶下的硅膠, 以乙酸乙酯洗脫, 收集洗脫液, 蒸干, 殘渣加乙酸乙酯溶解, 得供試品溶液2；刮取陰性對照品色譜中Rf=0.19處同等質(zhì)量的硅膠, 同法制備陰性溶液2。

2.3 多花野牡丹黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 紫外光譜分析 取供試品溶液2和陰性溶液2若干份, 分別加入甲醇鈉溶液、醋酸鈉、醋酸鈉/硼酸、三氯化鋁溶液、三氯化鋁/鹽酸等試劑, 掃描并記錄加入診斷試劑前后供試品溶液2的光譜圖(200～500 nm), 結(jié)果見表1, 圖1～3。

表1 多花野牡丹黃酮類化合物紫外光譜變化結(jié)果

如圖1所示, 甲醇光譜中帶I在358～385 nm范圍內(nèi), 屬于黃酮醇類化合物。甲醇鈉光譜在320 nm左右處有吸收, 示含有7-OH；比較甲醇光譜與甲醇鈉光譜, 帶I紅移32 nm,且吸收帶I不隨時間而衰退, 推斷該黃酮物質(zhì)含有3-OH, 且無3、4'-二羥基、3, 3, 4'-三羥基或5, 6, 7三羥基-或5, 7, 8-三羥基或3', 4', 5'-三羥基。

由圖1和圖2可知, 比較甲醇與醋酸鈉光譜, 帶II紅移6 nm, 示含有7-OH, 且醋酸鈉光譜不隨時間延長而衰退, 故不含5, 6, 7-三羥基或5, 7, 8-三羥基或3', 4', 5'-三羥基等對醋酸鈉敏感基團(tuán)；比較甲醇與醋酸鈉/硼酸光譜, 帶I、II均無紅移, 故A、B環(huán)不存在鄰二酚羥基。

由圖3可知, 比較三氯化鋁與三氯化鋁/鹽酸光譜, 光譜相似, 三氯化鋁/鹽酸光譜中吸收帶均無明顯紫移, 故A、B環(huán)無鄰二酚羥基。比較甲醇光譜與三氯化鋁/鹽酸光譜,帶I紅移45 nm, 示該黃酮醇含有5-OH。

圖1 A-甲醇光譜, B-甲醇鈉光譜)

圖2 A-醋酸鈉光譜, B-醋酸鈉/硼酸光譜

圖3 (A-三氯化鋁光譜, B-三氯化鋁/鹽酸光譜)

通過紫外光譜對所提純的多花野牡丹黃酮類化合物進(jìn)行檢測, 初步確定多花野牡丹含有5, 7-二羥基黃酮醇。

3 討論

本研究采用高濃度的乙醇作為多花野牡丹黃酮類成分的提取溶劑。采用低極性的展開劑石油醚－乙酸乙酯－氯仿(8：3：2)可使黃酮類成分與其余成分獲得良好的分離。

化合物結(jié)構(gòu)的鑒定可結(jié)合質(zhì)譜、氫譜等幾種有效的方法相互確定、驗證, 雖然紫外光譜的靈敏度較低, 但是對于較純的黃酮類化合物結(jié)構(gòu)的初步確定仍然具有重要的研究價值, 而且操作簡單、重復(fù)性好。

［1］姚亮亮, 劉新亞.野牡丹屬植物的化學(xué)成分、藥理活性及臨床應(yīng)用研究概況.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2010, 22(6):52-55.

［2］蘇燕評, 周孫英, 劉劍秋.多花野牡丹的抑菌活性及總黃酮含量測定.植物資源與環(huán)境學(xué)報, 2005, 14(1):56-57.

［3］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊).上海:上海人民出版社,1997: 941.