參照CLSI EP文件評(píng)價(jià)兩種類風(fēng)濕因子測(cè)定試劑的優(yōu)劣

曾崇亮（四川省成都市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科 610066）

類風(fēng)濕因子（RF）是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，無(wú)種屬特異性[1－2]。RF與天然IgG結(jié)合能力較差，但易與免疫復(fù)合物中的IgG或聚合IgG反應(yīng)。RF測(cè)定方法有很多，如膠乳凝劑試驗(yàn)、雙抗原夾心法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、速率散射比濁法、免疫比濁法，前面幾種方法需手工操作，標(biāo)本用量較大，且費(fèi)時(shí)。免疫比濁法臨床操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，在臨床上廣泛應(yīng)用。同時(shí)免疫比濁又分為膠乳增強(qiáng)免疫比濁法和免疫比濁法，膠乳增強(qiáng)免疫比濁法是由特異抗體結(jié)合膠乳顆粒表面，標(biāo)本中的RF與其結(jié)合，并使相鄰的乳膠顆粒彼此交聯(lián)，具有較好的放大作用。本文依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)頒發(fā)的EP7－A2和EP9－A2文件[3－4]，對(duì)膠乳增強(qiáng)免疫比濁和免疫比濁法測(cè)定RF進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本采集 試驗(yàn)組為本院2010年10月至2011年9月的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，其中男22例，女18例，年齡22～40歲，診斷均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年修訂的標(biāo)準(zhǔn)[3]；對(duì)照組為健康人62例。

1.2 試劑與校準(zhǔn)品 試劑分別為A廠家提供的RF膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定試劑盒（批號(hào)：0311021）及配套校準(zhǔn)品（批號(hào)：0311012），B廠家提供的RF免疫比濁法測(cè)定試劑盒（批號(hào)：104151C）及配套校準(zhǔn)品（批號(hào)：106281LY）。

1.3 質(zhì)控品 朗道特殊蛋白質(zhì)控品212LPC與198LPC。

1.4 儀器 采用日立7180全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 主要分析參數(shù) 嚴(yán)格按照儀器、試劑說(shuō)明書(shū)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作規(guī)程進(jìn)行設(shè)定。

1.6 評(píng)價(jià)方法

1.6.1 精密度 取高、低值兩種不同水平的混合血清RF樣品，用A廠家和B廠家提供的試劑測(cè)定20次，計(jì)算均值CV。

1.6.2 測(cè)定范圍 準(zhǔn)備高濃度（H）和低濃度（L）水平的樣本，依照5/5L＋0/5H、4/5L＋1/5H、3/5L＋2/5H、2/5L＋3/5H、1/5L＋4/5H、0/5L＋5/5H的比例制成一系列濃度的樣本，用兩種方法的試劑對(duì)每個(gè)樣本做3次重復(fù)測(cè)定，對(duì)理論濃度與實(shí)際濃度進(jìn)行線性回歸分析，得到相關(guān)系數(shù)（r）≥0.95的范圍為線性范圍。

1.6.3 干擾試驗(yàn) 參照EP7－A2文件的評(píng)價(jià)方法測(cè)定臨床標(biāo)本，先將其分成4n＋1份，每組（膽紅素組、三酰甘油組、血紅蛋白組和維生素C組共4組）中的n份分別加入不同濃度的該種干擾物質(zhì)，另1份作為干擾試驗(yàn)的基準(zhǔn)對(duì)照組，即加入干擾物質(zhì)的濃度為0。用2個(gè)廠家試劑測(cè)定所有樣本，各重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算各自的干擾值。

1.6.4 功能靈敏度 用臨床樣本（濃度為8U/mL）加入生理鹽水對(duì)倍稀釋，組成“檢測(cè)限”樣本，分別測(cè)定20次，計(jì)算變異系數(shù)（CV），當(dāng)CV≤20%時(shí)的最大稀釋濃度作為功能靈敏度。

1.6.5 試劑的開(kāi)瓶穩(wěn)定性觀察 取A廠家和B廠家試劑開(kāi)瓶后分別放入日立7180的試劑倉(cāng)中，時(shí)間為30d，每天測(cè)定質(zhì)控品3次，記錄并取均值。

2 結(jié) 果

2.1 精密度評(píng)價(jià) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出A廠家和B廠家試劑的精密度，見(jiàn)表1。

表1 2個(gè)廠家試劑的精密度比較

2.2 測(cè)定范圍 測(cè)定數(shù)據(jù)錄入Excel表格，使用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析其吸光度變化值的平均值與對(duì)應(yīng)濃度的線性關(guān)系，回歸方程和r分別為：A廠家Y＝0.996 2X－0.046 7；r＝0.999 3，測(cè)定范圍2～140U/mL。B廠家Y＝0.992 3X－0.062 4；r＝0.999 7，測(cè)定范圍0～300U/mL。

2.3 干擾試驗(yàn) A廠家試劑抗干擾能力為：膽紅素小于或等于342μmol/L，血紅蛋白小于或等于10g/L，三酰甘油小于或等于11.3mmol/L以內(nèi)測(cè)定結(jié)果良好。B廠家試劑抗干擾能力為：膽紅素小于或等于500μmol/L，血紅蛋白小于或等于5 g/L，三酰甘油小于或等于6.75mmol/L以內(nèi)測(cè)定結(jié)果良好。

2.4 功能靈敏度 A廠家試劑功能靈敏度為2U/mL，B廠家試劑功能靈敏度為9U/mL。

2.5 開(kāi)瓶穩(wěn)定性觀察 見(jiàn)表2。

表2 2個(gè)廠家試劑的開(kāi)瓶穩(wěn)定性比較

3 討 論

RF是一類自身抗體，包括所有類型的免疫球蛋白，他們是抗生素變性或聚合IgG分子FC片段的抗體，診斷所檢測(cè)的RF主要是RF－IgM，主要用于輔助診斷各種類風(fēng)濕疾病[5－7]。

本文采用目前市售的兩種免疫比濁法方法試劑進(jìn)行評(píng)估，研究結(jié)果為：膠乳增強(qiáng)免疫比濁法和免疫比濁法測(cè)定RF的精密度分別為4.58%（低值）、2.83%（高值）和7.19%（低值）、2.90%（高值），功能靈敏度為2U/mL和9U/mL，測(cè)定范圍分別為：2～140U/mL和0～300U/mL；抗干擾能力分別為膽紅素：≤342μmol/L和≤500μmol/L，血紅蛋白：≤10g/L和≤5g/L，三酰甘油：≤11.3mmol/L和≤6.75mmol/L；試劑開(kāi)瓶后30d反復(fù)測(cè)定CV分別為：4.35%（高值）、4.89%（低值）和4.45%（高值）和7.39%（低值）。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可以看出膠乳增強(qiáng)免疫比濁法試劑的精密度、功能靈敏度、開(kāi)瓶穩(wěn)定性低值測(cè)定方面明顯優(yōu)于免疫比濁法試劑，抗干擾能力中抗血紅蛋白和三酰甘油方面要比免疫比濁法效果好，測(cè)定范圍和抗膽紅素方面低于免疫比濁法，開(kāi)瓶穩(wěn)定性高值測(cè)定方面二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種試劑各有優(yōu)勢(shì)，因血清中RF的含量比較低，其醫(yī)學(xué)決定水平為30U/mL，膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定RF具有很好的精密度和功能靈敏度，能夠更好地滿足臨床需求，測(cè)定低濃度RF更有優(yōu)勢(shì)[8]。試劑開(kāi)瓶穩(wěn)定性觀察結(jié)果兩種方法在高端差異不大，而在低端有明顯的區(qū)別，開(kāi)瓶30d后膠乳增強(qiáng)免疫比濁法試劑吸光度無(wú)明顯變化，說(shuō)明該試劑膠乳包被技術(shù)穩(wěn)定，試劑均一性較好，不會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。

綜上所述，經(jīng)過(guò)本試驗(yàn)方案結(jié)果對(duì)比可以看出，A廠家生產(chǎn)的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法試劑性能明顯優(yōu)于B廠家生產(chǎn)的免疫比濁法試劑，而且A廠家試劑價(jià)格更便宜，符合擇優(yōu)選用的原則。本次試驗(yàn)中只選擇了精密度、功能靈敏度、測(cè)定范圍、干擾試驗(yàn)和開(kāi)瓶穩(wěn)定性等5項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，原因在于可操作性。醫(yī)院檢驗(yàn)科應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況，正確選擇合適的性能評(píng)估指標(biāo)進(jìn)行試劑評(píng)價(jià)試驗(yàn)。目前市面上檢測(cè)同類型指標(biāo)的試劑非常雜多，通過(guò)本次試驗(yàn)，本科室建立了本院檢驗(yàn)科可用的同類試劑評(píng)價(jià)方案，便于擇優(yōu)選用。

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