張 帆，張 純，鄭 潔，何 聯(lián)

(1華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院，武漢430030;2湖北省婦幼保健院生殖中心)

鎘離子(Cd2+)是一種目前已知極易在體內(nèi)長期蓄積(10～30 a)、生物半衰期長，且對機(jī)體有多器官、多系統(tǒng)毒性作用的高度可疑的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物［1，2］。既往對 Cd2+的研究多著眼于其對生物體肝、腎、血液系統(tǒng)的急慢性影響及致癌、致畸與致突變作用，其對未成年雌(女)性哺乳動物生殖系統(tǒng)毒性的研究鮮見報道。本研究觀察了鎘對未成年雌性大鼠卵巢組織卵泡發(fā)育的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1．1 材料 ①實驗動物:15日齡健康清潔級雌性SD大鼠38只，體質(zhì)量60～90 g，由武漢大學(xué)實驗動物中心提供，飼養(yǎng)環(huán)境溫度(20±2)℃，濕度(50±20)%，自由飲水進(jìn)食。②主要試劑:氯化鎘(CdCl2·2．5 H2O)為上海亭新制藥廠產(chǎn)品，分析純。

1．2 動物分組及處理 將38只SD大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)6 d，按體質(zhì)量分層隨機(jī)分為4組，其中染鎘高、中、低劑量組各10只，分別皮下注射氯化鎘1．2、0．6、0．3 mg/kg(以 Cd2+計)染毒，注射體積均為1．5 mL/kg，1次/d，每周 5 d，連續(xù) 6 周;對照組 8 只，予等體積生理鹽水皮下注射，方法同上。實驗期間觀察大鼠一般情況，每2 d稱重1次并據(jù)之調(diào)整氯化鎘劑量。

1．3 觀察指標(biāo) ①動情周期:染毒第5周(35 d)起，以陰道細(xì)胞涂片法連續(xù)觀察并記錄大鼠動情周期。②卵巢組織鎘含量及各期卵泡構(gòu)成比例:取右側(cè)卵巢組織分為兩份，一份以原子吸收光譜法檢測鎘含量;另一份以多聚甲醛固定，組織切片圖像分析法檢測各期卵泡構(gòu)成比例。

1．4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件。計量資料以ˉx±s表示，組間比較應(yīng)用One-Way ANOVA分析(方差齊時選擇LSD，方差不齊時選擇Dunnett's T3)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 四組動情周期及卵巢組織鎘含量 與對照組相比，染鎘各劑量組動情周期明顯延長，卵巢組織鎘含量明顯增加，且均呈劑量依賴性。詳見表1。

表1 四組大鼠動情周期及卵巢組織鎘含量比較(ˉx±s)

2．2 四組卵巢組織各期卵泡構(gòu)成比例 與對照組相比，染鎘高、中劑量組卵巢組織內(nèi)次級卵泡構(gòu)成比例均明顯降低，閉鎖卵泡構(gòu)成比例均明顯升高。詳見表2。

3 討論

由于鎘在國民經(jīng)濟(jì)、工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域中具有重要作用，鎘資源被人類肆無忌憚地開發(fā)、濫用，導(dǎo)致鎘資源過度流失，相當(dāng)數(shù)量的鎘通過工業(yè)廢氣、廢水、廢渣排入環(huán)境，造成大氣、水體(水生物)、土壤以及各種生物體內(nèi)鎘含量不斷升高，人類作為食物鏈的最終消費(fèi)者，可通過生物放大與生物積累，經(jīng)呼吸道、消化道及皮膚黏膜將過量的鎘攝入體內(nèi)。鎘對生物體肝、腎、肺、骨骼、睪丸、腦、血液等系統(tǒng)的急慢性影響及其致癌、致畸與致突變作用的研究較多［3～5］。鎘對雌性哺乳動物生殖系統(tǒng)影響方面的研究明顯欠缺與滯后，仍然有很多問題懸而未決。實驗表明，鎘可改變成年雌性小鼠卵巢組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，抑制卵泡的正常生長與發(fā)育。由于鎘的蓄積伴隨人體的生長與發(fā)育，其對青春前期雌(女)性的影響不容忽視。然而目前有關(guān)鎘對未成年雌(女)性動物卵巢結(jié)構(gòu)與功能影響的研究鮮見報道。研究［6］顯示，鎘對未成年雌性大鼠卵巢組織雌、孕激素分泌的直接抑制可能是其內(nèi)分泌干擾作用的機(jī)制之一。本實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，各染鎘組大鼠卵巢組織內(nèi)鎘含量明顯增高、動情周期明顯延長，且染鎘高、中劑量組卵巢組織內(nèi)次級卵泡構(gòu)成比例均明顯降低、閉鎖卵泡構(gòu)成比例均明顯升高。提示鎘能在未成年雌性大鼠卵巢組織內(nèi)蓄積并影響卵泡的正常發(fā)育，通過促進(jìn)卵泡的閉鎖與凋亡進(jìn)而抑制排卵可能為其性腺毒性的作用機(jī)制之一。

表2 四組大鼠各期卵泡構(gòu)成比例比較 (%，ˉx±s)

［1］Kuriwaki J，Nishijo M，Honda R，et al．Effects of cadmium exposure during pregnancy on trace elements in fetal rat liver and kidney［J］．Toxicol Lett，2005，156(3):369-376．

［2］Murphy CA，Rose KA，Thomas P．Modeling vitellogenesis in female fish exposed to environmental stressors:predicting the effects of endocrine disturbance due to exposure to a PCB mixture and cadmium［J］．Reprod Toxicol，2005，19(3):395-409．

［3］Tormanen CD．Inhibition of rat liver and kidney arginase by cadmium ion［J］．J Enzyme Inhib Med Chem，2006，21(1):119-123．

［4］Nordberg GF．Lung cancer and exposure to environmental cadmium［J］．Lancet Oncol，2006，7(2):99-101．

［5］Filipic M，F(xiàn)atur T，Vudrag M．Molecular mechanisms of cadmiuminduced mutagenicity［J］．Hum Exp Toxicol，2006，25(2):67-77．

［6］張純，張帆，何聯(lián)，等．鎘對未成年雌性大鼠卵巢組織激素分泌的影響［J］．山東醫(yī)藥，2013，53(7):52-53．