楊勇孫偉吳保華★

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1202例疑似生殖器皰疹患者HSV 基因檢測結(jié)果分析

楊勇1孫偉2吳保華1★

目的了解廣州新塘地區(qū)疑似生殖器皰疹患者單純皰疹病毒（HSV）感染情況。方法用PCR-熒光探針法（FQ-PCR）對我院門診1202例疑似生殖器皰疹患者進行HSV-I/II基因檢測。結(jié)果在1202例生殖器皰疹疑似患者中，檢測出HSV-I型陽性患者8例，陽性率為0.67%（8/1202）；HSVII型陽性患者282例，陽性率為23.46%（282/1202），總計單純皰疹病毒陽性患者290例，陽性率24.13%（290/1202）。HSV-I型感染率與HSV-II型感染率比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。290例單純皰疹病毒感染患者中男性患者193例，陽性率24.62%（193/748），女性患者97例，陽性率23.21%（97/418），男性與女性的感染率比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論① 廣州新塘地區(qū)疑似生殖器皰疹患者HSV檢出率較高近1/4，感染率有型別差異，以HSV-II型為主，提示臨床需重視對疑似生殖器皰疹病毒患者進行HSV檢測，避免誤診漏診。② HSV感染率無性別差異。③ FQ-PCR在HSV檢測中具有簡便、靈敏度高、快捷等特點，具有良好的推廣、應(yīng)用前景。

生殖器皰疹；單純皰疹病毒；熒光定量PCR

生殖器皰疹（genital herpes，GH）是由單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）感染泌尿道生殖器及肛周部位皮膚黏膜引起的一種慢性、復(fù)發(fā)性、難治愈的性傳播疾病。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)[1]，生殖器皰疹是常見的性傳播疾病之一，其發(fā)病率可達到所有性病的30%。生殖器皰疹的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)不斷增長，逐漸成為一個令人關(guān)注的公共衛(wèi)生問題，且隨著社會的發(fā)展，其發(fā)病率亦隨之增高，部分省市的生殖器皰疹甚至較梅毒更多見[2]。尤為嚴(yán)重的是生殖器皰疹增加了人類免疫缺陷病毒/獲得性免疫缺陷綜合征（Human Immunode fi ciency Virus/Acquired Immunode fi ciency Syndrome，HIV/AIDS）感染的危險性，是引起HIV傳播的獨立危險因素。生殖器皰疹所致的生殖器潰瘍顯著增加梅毒（syphilis）及HIV的傳播[3]。此外，還發(fā)現(xiàn)生殖器皰疹患者與人類乳頭瘤病毒、念珠菌、杜克雷嗜血桿菌感染有關(guān)系[4]，不僅給患者帶來反復(fù)難愈的生殖器部位皮膚黏膜損害，而且會給患者帶來纏繞不去的道德失落和性精神壓力[5]。因此早期正確診斷及治療生殖器皰疹，降低其傳染性及危害性具有十分重要的意義。為了解廣州新塘地區(qū)疑似生殖器皰疹患者單純皰疹病毒的感染情況，本文對2010年1月1日～2012年12月30日，我院皮膚性病科門診及婦科門診1202例生殖器皰疹疑似患者進行HSV-I及HSV-II基因檢測，并對其結(jié)果進行分析。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2010年1月1日～2012年12月30日期間在我院皮膚性病科門診及婦科門診就診疑有生殖器皰疹感染的患者共1202例。其中男性784例，女性418例，年齡結(jié)構(gòu)：小于20歲120例、20～60歲1032例、60歲以上50例。

患者入選條件：（1）有不潔性行為史或其配偶確診HSV感染。（2）有典型生殖器皰疹或高度可疑生殖器皰疹皮疹，如泌尿生殖器及肛周部位皮膚黏膜紅斑基礎(chǔ)上，簇集或散在分布的水皰。（3）無典型生殖器皰疹皮疹，但男女在生殖器部位出現(xiàn)細小裂隙、紅腫滲液、潰瘍糜爛面等；男性有尿道痛、刺癢、不適感，有少量尿道分泌物，尿道口發(fā)紅等癥狀，女性患者有陰道分泌物增多、出現(xiàn)伴有皰疹樣改變的宮頸糜爛等癥狀和體癥。患者排除條件：既往在我院或其他醫(yī)院確診為生殖器皰疹的患者。

1.2 取材方法

用無菌棉拭子沾取皰液或滲出液，潰瘍?nèi)兾锖蜐B出液，結(jié)痂取痂皮，丘疹紅斑用棉拭子刮取組織滲出液，將棉拭子置于無菌管，密閉送檢。宮頸標(biāo)本的取材：先用無菌棉拭子清除宮頸表面的分泌物，然后再用另一滅菌拭子伸入宮頸管內(nèi)2 cm，留置10 s左右，輕輕旋轉(zhuǎn)取出，將取材棉拭子置于無菌管，密閉送檢。標(biāo)本一經(jīng)采集立即送檢，當(dāng)天不能檢測的標(biāo)本置于-20℃保存，以待下次檢測。

1.3 儀器與試劑

使用儀器為DA7600基因擴增儀，其與試劑盒、質(zhì)控品均購于中山大學(xué)達安基因股份有限公司。

1.4 DNA提取及檢測方法

向無菌管中加入1 mL滅菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，擠干棉拭子；吸取全部液體轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，12 000 rpm離心5 min；去上清，沉淀加滅菌生理鹽水1 mL混勻，12 000 rpm離心5 min；去上清，沉淀中加入50 μL DNA提取液充分混勻，100℃恒溫處理10±1 min；12 000 rpm離心5 min，取上清液2 μL作PCR反應(yīng)。HSV-DNA定量檢測采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-熒光探針法），試劑盒檢測的靈敏度為5.0×102基因拷貝，線性范圍5.0×102～5.0×106基因拷貝。嚴(yán)格按照說明書進行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件包進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以百分比表示，進行χ2檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1202例疑似患者HSV檢測結(jié)果

1202例疑似生殖器皰疹患者中，檢出HSV-I型陽性8例，陽性率0.67%（8/1202）；HSV-II型陽性282例，陽性率23.46%（282/1202）。單純皰疹病毒感染290例，總陽性率24.13% （290/1202）。HSV-II型感染率大于HSV-I型感染率，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=294.396，P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 1202例疑似生殖器皰疹患者單純皰疹病毒檢測結(jié)果Table 1 Testing result of herpes simplex virus from 1202 samples

2.2 不同性別疑似患者HSV陽性率

290例單純皰疹病毒感染患者中男性患者193例，陽性率24.62%（193/784），女性患者97例，陽性率23.21%（97/418），男性與女性的感染率比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.297，P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 不同性別患者單純皰疹病毒檢出率Table 2 The positive detection rate of herpes simplex virus in male and female outpatients

3 討論

人類HSV為有包膜的雙鏈DNA病毒，屬皰疹病毒科α病毒亞科，分為兩型，即單純皰疹病毒I型（HSV-I）和單純皰疹病毒II型（HSV-II）。病毒存在于患者的皰液、口鼻和生殖器分泌物中，經(jīng)呼吸道、口腔、生殖器粘膜以及破損皮膚進入體內(nèi)。當(dāng)機體抵抗力下降時，如發(fā)熱、胃腸功能紊亂、月經(jīng)、妊娠、感染和情緒改變時，體內(nèi)潛伏的HSV被激活而發(fā)病。HSV主要通過直接接觸傳播，包括接吻、接觸帶有HSV的病人的口腔和呼吸道分泌物，原發(fā)性感染和復(fù)發(fā)性感染及無癥狀的排病毒者均可成為傳染源。I型病毒主要引起生殖器以外的皮膚、粘膜（口腔粘膜）和器官（腦）的感染；II型病毒主要通過性接觸傳播，引起生殖器部位皮膚粘膜感染。生殖器皰疹臨床表現(xiàn)多樣化，典型臨床癥狀是生殖器部位出現(xiàn)水皰、膿皰、潰瘍或糜爛，但不典型表現(xiàn)、無癥狀感染也相當(dāng)常見，僅依靠患者癥狀做出診斷明顯存在不足[6]，正確的做法是進行實驗室檢測確診[7]。因此，HSV的實驗室早期準(zhǔn)確檢測顯得非常重要。

目前HSV的檢測方法主要有：（1）直接HSV病毒的細胞培養(yǎng)鑒定。（2）免疫學(xué)檢測。（3）分子生物學(xué)檢測：包括核酸雜交技術(shù)和PCR等。然而細胞培養(yǎng)和免疫學(xué)檢測都費時、費力，F(xiàn)Q-PCR技術(shù)是一種比較簡單的分子生物學(xué)技術(shù)，具有特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點[11,12]，目前，利用該技術(shù)在我國進行有關(guān)單純皰疹病毒感染的研究報道逐漸增多。本研究中我們利用該技術(shù)對廣州新塘地區(qū)疑似生殖器皰疹患者HSV感染情況進行了調(diào)查研究。研究發(fā)現(xiàn)，1202例生殖器皰疹疑似患者檢測HSV陽性患者共290例，陽性率24.13%（290/1202），其中有8例生殖器皰疹疑似患者HSV-I病毒檢測結(jié)果呈陽性，陽性率0.67%（8/1202）；HSV-II型陽性患者282例，陽性率為23.46%（282/1202），說明HSV在本地區(qū)有較高的感染率，感染率有型別差異，II型感染率顯著高于I型。同時，與潘大虎等[8]報道相比較，HSV-II陽性率偏低，需引起臨床注意，特別是對生殖器皰疹病毒患者HSV-II型疑似病例擴大檢測范圍，避免誤診漏診的發(fā)生。290例HSV感染患者中男性患者193例，陽性率24.62%（193/784）；女性患者97例，陽性率23.21%（97/418），HSV感染男性與女性的發(fā)病率比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，與廖金英[10]報道并不一致，這可能與部分標(biāo)本來源于婦科門診并且我院皮膚及婦科門診醫(yī)師對女性生殖器皰疹足夠重視有關(guān)。賈曉輝和洪華林[9]對1009例婦女生殖器炎癥標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn)，HSV-II的感染與宮頸病變程度以及宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。通過全面檢測查出女性病毒感染或攜帶者，避免誤診漏診的發(fā)生，對預(yù)防宮頸癌的發(fā)生有一定意義。本實驗采用的FQ-PCR在生殖皰疹病毒感染檢測中具有特異性強，準(zhǔn)確度高而且步驟簡單、自動化程度高、操作快速，結(jié)果客觀準(zhǔn)確等優(yōu)點，適用于快速診斷的需要，能在數(shù)小時內(nèi)獲得結(jié)果，為早期臨床提供可靠的診斷依據(jù)，值得臨床推廣應(yīng)用。

綜上所述，廣州新塘地區(qū)HSV總體感染情況比較嚴(yán)重，以HSV-II型為主，臨床需重視對疑似生殖器皰疹病毒患者進行HSV檢測，避免誤診漏診。而PCR-熒光探針法在HSV檢測中優(yōu)勢突出，具有良好的應(yīng)用前景，值得臨床推廣。此外，雖然HSV-I病毒檢測結(jié)果顯示陽性率低，但HSV-I病毒主要由口唇病灶感染，在生殖器部位檢出HSV-I病毒可能與近年來口-生殖器性行為方式的出現(xiàn)導(dǎo)致生殖器部位HSV病毒感染有關(guān)，因此加強宣傳教育，推行標(biāo)本兼治方案對于本地區(qū)HSV的預(yù)防控制尤為重要。

[1] 葉偉, 葉圣章, 羅中權(quán). 阿昔洛韋聯(lián)合重組人干擾素α-2b凝膠治療復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的療效觀察[J]. 中國醫(yī)藥科學(xué), 2011, 1(9): 100-102.

[2] 趙靜怡, 鐘白玉, 曹紅衛(wèi), 等. 熒光定量PCR法檢測生殖器皰疹病毒感染患者的結(jié)果及分析[J]. 重慶醫(yī)學(xué), 2003, 32(4): 490-500.

[3] Ramjee G, Williams B, Gouws E, et a1. The impact of incident and prevalent herpes simplex virus-2 infection on the incidence of HIV-1 infection among commercial sexworkers in South Africa[J]. J Acquir Immune Defic Syndr, 2005, 39(3): 333-339.

[4] Maan M A, Hussaia F, Iqbal J, et a1. Sexually transmitted infections in Pakistan[J]. Ann Saudi Med, 2011, 31(3): 263-269.

[5] Merin A, Pachankis J E. The psychological impact of genital herpes stigma[J]. J Health Psychol, 2011, 16(1): 80-90.

[6] 邵曉丹, 鐘羽西, 田秀紅, 等. 上海市閔行區(qū)性病門診病人生殖器皰疹患病率和2型單純皰疹病毒感染率研究[J]. 中國初級衛(wèi)生保健, 2010, 24(12): 67-69.

[7] Domeika M, Bashmakova M, Savicheva A, et a1. Guidelines for the laboratory diagnosis of genital herpes in eastern Europern countries [J]. Euro Surveill, 2010, 15(44): 1-7.

[8] 潘大虎, 翟海燕, 雷妍. 276例疑似生殖器皰疹患者單純皰疹病毒II型檢測結(jié)果分析[J]. 分子診斷與治療雜志, 2010, 2(1): 43-45.

[9] 賈曉輝, 洪華林. 單純皰疹病毒感染狀況分析[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2010, 31(4): 565-566.

[10] 廖金英. 230例性病門診患者單純皰疹病毒檢測結(jié)果分析[J]. 醫(yī)學(xué)臨床研究, 2006, 23(7): 1088-1090.

[11] 周雪蓮, 李創(chuàng), 付莉. 四川成都地區(qū)2型單純皰疹病毒檢測結(jié)果分析[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床, 2011, 8(15): 1847-1848.

[12] 尹興平, 張海平, 曹蕾, 等. 熒光定量PCR和酶聯(lián)免疫吸附法檢測生殖器皰疹病毒的對比研究[J].中國實驗診斷學(xué), 2012, 16(7): 1260-1261.

Analysis of genetic detecting in 1202 outpatients with suspected herpes simplex virus infection

YANG Yong1, SUN Wei2, WU Baohua1★
(1.Department of Dermatology, Hydropower Hospital, Guangdong, Guangzhou 511340, China; 2.Department of Clinical Laboratory, Hydropower Hospital, Guangdong, Guangzhou 511340, China)

ObjectiveTo investigate the situation of patients with genital suspected herpes simplex virus (HSV) infection in Xintang, Guangzhou.MethodsTo test herpes simplex virus (HSV-I/II) of 1202 cases of outpatients by fl uorescence quantitative polymerase chain reaction technology (FQ-PCR).ResultsThe positive rate of 1202 casas of outpatients were 0.67% (8/1202) with HSV-I and 23.46% (282/1202) with HSV-II. The total positive rate of HSV infection were 24.13% (290/1202). There was signi fi cant difference between the positive detection rate of HSV-I and HSV-II (P＜0.01). The positive rate of HSV in male and female patients were 24.62% (193/748) and 23.21% (97/418), respectively. There was no signi fi cant difference of the positive detection rate between male and female (P＞0.05).Conclusion①The detection rate of HSV in the outpatients with suspected genital herpes HSV infection was high in Xintang area, which nearly a quarter. The infection rate was difference in different types of HSV, and the main type was HSV-II. The result illustrated that clinical diagnosis should pay attention to detect HSV in outpatients with suspected genital herpes virus in order to avoid misdiagnosis.②There was no difference of HSV infection between male and female. ③The features of FQ-PCR were simplicity, high sensitivity, fast in detection of HSV and it is worth for clinical application.

Genital herpes; Herpes simplex virus; Fluorescence quantitative PCR

1.廣東省水電醫(yī)院皮膚科，廣東，廣州 511340

2.廣東省水電醫(yī)院檢驗科，廣東，廣州 511340

★通訊作者：吳保華，E-mail:wubaohua1978@hotmail.com