丁青山，陳鐵鋒，周志凌，麥麗萍，陳秀云，楊敏，余細(xì)勇

（廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院廣東省人民醫(yī)院科教處，廣東廣州510080）

頭孢克洛膠囊人體藥代動(dòng)力學(xué)與相對(duì)生物利用度研究

丁青山，陳鐵鋒，周志凌，麥麗萍，陳秀云，楊敏，余細(xì)勇

（廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院廣東省人民醫(yī)院科教處，廣東廣州510080）

目的研究頭孢克洛膠囊的相對(duì)生物利用度，評(píng)價(jià)該試驗(yàn)制劑的生物等效性。方法對(duì)20名男性健康受試者采用隨機(jī)交叉雙周期給藥方式，分別口服單劑量參比制劑和頭孢克洛試驗(yàn)制劑500 mg，通過(guò)反相高效液相色譜法測(cè)定血藥濃度，計(jì)算兩者的相對(duì)生物利用度和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，評(píng)價(jià)該制劑的生物等效性。結(jié)果按lnAUC0-t計(jì)算，與參比制劑相比，單劑量口服受試藥的相對(duì)生物利用度為（97.5±10.0）%。試驗(yàn)制劑頭孢克洛膠囊和參比制劑頭孢克洛膠囊之間lnAUC0-T、lnAUC0-∞經(jīng)雙向單側(cè)t檢驗(yàn)，AUC0-T、AUC0-∞的[1-2α]置信區(qū)間在參比制劑相應(yīng)參數(shù)的80%～125%范圍內(nèi)，表明兩種制劑在吸收程度具有生物等效性；lnCmax經(jīng)方差分析和雙向單側(cè)t檢驗(yàn)，Cmax的[1-2α]置信區(qū)間在參比制劑相應(yīng)參數(shù)的75%～133%范圍內(nèi)，表明兩種制劑在吸收的峰值濃度上具有生物等效性；Tmax經(jīng)非參檢驗(yàn)，兩制劑間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明兩制劑在達(dá)峰時(shí)間上具有生物等效性。結(jié)論頭孢克洛的兩種膠囊制劑具有相似的人體藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，生物利用度也相同。

頭孢克洛；生物利用度；高效液相色譜法

頭孢克洛(Cefaclor)是第二代頭孢菌素類抗生素，其作用機(jī)制是通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成來(lái)發(fā)揮作用。體外試驗(yàn)證實(shí)，頭孢菌素類的殺菌作用是使轉(zhuǎn)肽酶失活，干擾細(xì)菌細(xì)胞壁最終階段的合成，阻止黏肽原的交聯(lián)。頭孢克洛在臨床上廣泛用于與肺炎雙球菌或鏈球菌有關(guān)的上呼吸道感染和對(duì)細(xì)菌性急性支氣管炎、急性皮膚感染癥、急性單純性膀胱炎等的治療。頭孢克洛膠囊是頭孢克洛的常用制劑，在《藥品注冊(cè)管理辦法》中的注冊(cè)分類為化學(xué)藥品第6類，為了研究頭孢克洛膠囊的藥動(dòng)學(xué)特征和相對(duì)生物利用度，筆者建立了一個(gè)靈敏、快速、可靠的高效液相色譜法(HPLC)來(lái)測(cè)定血漿中頭孢克洛濃度，并以市售頭孢克洛膠囊作對(duì)照，比較不同制劑中的藥動(dòng)學(xué)特性，對(duì)兩制劑進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑實(shí)驗(yàn)主要使用儀器：HP-Chemstation數(shù)據(jù)處理工作站；HP-1050液相色譜儀；ZT-Ⅰ微型臺(tái)式真空泵(由紹興衛(wèi)星醫(yī)療設(shè)備制造有限公司制造生產(chǎn))。實(shí)驗(yàn)主要試劑：(1)頭孢克洛對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：30481-200904，純度為94.1%；(2)N-乙酰普魯卡因胺對(duì)照品(內(nèi)標(biāo))：SIGMA，批號(hào)：A-5513，純度為99%；(3)水為重蒸去離子水；(4)乙酸鈉、冰醋酸為分析級(jí)，由廣州化學(xué)試劑廠提供；(5)甲醇和乙腈，均為默克公司生產(chǎn)之色譜純。受試制劑為廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司研制的頭孢克洛膠囊(規(guī)格：0.25 g；批號(hào)：091101；有效期至2011年11月13日)；參比制劑為禮來(lái)蘇州制藥有限公司生產(chǎn)的頭孢克洛膠囊(規(guī)格：0.25 g，批號(hào)：L01634；有效期至2012年7月31日)。

1.2 色譜條件色譜柱為Sino Chrom ODS-BPC 18(4.6 mm×150 mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈：10 mmol/L；醋酸鈉緩沖液(冰醋酸調(diào)pH值為3.6)=9:91，流速為1 ml/min；柱溫為40℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：264 nm。

1.3 樣品處理方法取含藥血漿0.25 ml至1.5 ml的EP離心管中，依次加入內(nèi)標(biāo)工作液20μl、10%的三氯醋酸溶液100μl，快速旋渦振蕩3 min，離心5 min，吸取上清液20μl進(jìn)樣分析。

1.4 方法學(xué)確證[1]

1.4.1 特異性同時(shí)對(duì)6個(gè)不同個(gè)體的空白血漿、空白血漿加標(biāo)準(zhǔn)品以及用藥后的血漿樣品色譜圖進(jìn)行考察。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限分別配制濃度為30 mg/L、20 mg/L、10 mg/L、2 mg/L、0.5 mg/L、0.25 mg/L、0.1 mg/L的帶藥血漿樣品，按前項(xiàng)樣品處理方法進(jìn)行處理。以血漿頭孢克洛濃度(C)作為橫坐標(biāo)，以測(cè)得的頭孢克洛峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比(Y)作縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。血漿樣品頭孢克洛定量下限濃度為0.1 mg/L(S/N＞5)，平行對(duì)5個(gè)濃度為0.1 mg/L的含藥血漿樣品處理后進(jìn)行色譜分析，并計(jì)算其準(zhǔn)確性和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

1.4.3 精密度與準(zhǔn)確度分別配制高(20 mg/L)、中(2 mg/L)、低(0.25 mg/L)三種濃度質(zhì)控樣品，各濃度制備5份樣品，分別在采用1 d內(nèi)重復(fù)3次和分散于2周內(nèi)重復(fù)3次的方式測(cè)定其濃度，計(jì)算日間、日內(nèi)誤差。

1.4.4 穩(wěn)定性觀察高、中、低三個(gè)不同濃度的質(zhì)控樣品分別在室溫(24 h)、-20℃(4周)條件下的穩(wěn)定性，每個(gè)濃度制備樣品5份，結(jié)果用偏差(RE)表示。穩(wěn)定性=(測(cè)定值/加入值)×100%。

1.4.5 提取回收率同時(shí)考察高、中、低三種不同濃度質(zhì)控樣品的提取回收率，每種濃度制備樣品5份。

1.4.6 樣品測(cè)定質(zhì)控每種分析批生物樣品測(cè)定時(shí)均應(yīng)建立新標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低三種不同濃度的質(zhì)控樣品。各濃度至少雙樣本。

1.5 生物利用度試驗(yàn)[1]

1.5.1 受試者基本情況2010年8月入選的20名受試者在被告知所有與藥物有關(guān)的可能的不良反應(yīng)后，自愿簽署知情同意書(shū)。體重：55～79 kg，平均(64.33±5.78)kg；年齡：21～30歲，平均(25.50±2.28)歲；身高：164～184 cm，平均(171.75±4.71)cm；BMI：19.61～23.88，平均(21.77±1.21)。受試者均無(wú)藥物過(guò)敏史，無(wú)肝、腎疾病史，精神狀態(tài)良好，全面體格檢查均正?；虍惓５珶o(wú)臨床意義。受試者在受試前兩周內(nèi)未服過(guò)任何藥物，從開(kāi)始試驗(yàn)直至試驗(yàn)結(jié)束期間，不吸煙、不喝酒，不飲用其他任何飲料。

1.5.2 試驗(yàn)方法采用隨機(jī)、雙周期兩制劑自身交叉對(duì)照的單次給藥試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。符合入選標(biāo)準(zhǔn)的健康成年受試者20例于試驗(yàn)前1 d晚上18：00入?、衿诓》浚尺^(guò)夜(10 h以上)，于次日早晨空腹站立位服用受試制劑或參比制劑2粒(500 mg)，用250 ml溫開(kāi)水送服。受試者于服藥前(0 h)和服藥后5 min、10 min、20 min、30 min、45 min、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h、10.0 h共15個(gè)時(shí)間點(diǎn)抽取靜脈血，每次取血4 ml，置于肝素化的試管中，離心10 min后分離血漿置-20℃儲(chǔ)藏，用于血藥濃度檢測(cè)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示。采用DAS3.1軟件包對(duì)Cmax、Tmax和AUC0-T和AUC0-∞進(jìn)行生物等效性分析，Cmax采用對(duì)數(shù)值，等效標(biāo)準(zhǔn)范圍為75%～133%；Tmax采用實(shí)測(cè)值進(jìn)行非參檢驗(yàn)；AUC0-T、AUC0-∞均采用對(duì)數(shù)值，等效標(biāo)準(zhǔn)范圍80%～125%。相對(duì)生物利用度(F)采用下列公式進(jìn)行計(jì)算：

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)我們所建立的血漿頭孢克洛的測(cè)定方法快速、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠，完全符合生物等效性研究和藥代動(dòng)力學(xué)研究的要求。頭孢克洛和內(nèi)標(biāo)不受代謝物和血漿內(nèi)源性物質(zhì)干擾。定量下限(LLOQ)為0.1 mg/L。代表性標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=-0.003+0.158x(r=0.998，權(quán)重系數(shù)為1/x2)。該研究所建立的方法具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，日間或日內(nèi)差均小于5.5%。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果亦表明樣品在室溫放置24 h或-20℃保存4周條件下有良好的穩(wěn)定性，準(zhǔn)確性在90.7%～105%。在酸性條件下蛋白沉淀提取回收率在71.4%～84.5%區(qū)間之內(nèi)。

2.2 頭孢克洛藥代動(dòng)力學(xué)與相對(duì)生物利用度所有的受試者在實(shí)驗(yàn)期間未發(fā)現(xiàn)有其他不良反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行肝腎功能復(fù)查均表現(xiàn)正常。單劑量口服頭孢克洛膠囊試驗(yàn)制劑或參比制劑血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖1。單劑量頭孢克洛給藥后,受試藥與參比藥的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如表1所示。按lnAUC0-T計(jì)算，與參比制劑相比，單劑量口服受試藥的相對(duì)生物利用度為(97.5±10.0)%。

表1 參比制劑和受試制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（n=20）

圖1 頭孢克洛血藥濃度-時(shí)間曲線(n=20，R為參比藥，A為受試藥)

3 討論

研究結(jié)果顯示，頭孢克洛膠囊試驗(yàn)制劑與參比制劑在人體的吸收速度和吸收程度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩藥具有生物等效性。除達(dá)峰時(shí)間(Tmax)外，本研究中得出的頭孢克洛藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)比較[2-5]并無(wú)太大的差異。造成達(dá)峰時(shí)間差異的原因可能與藥物本身有關(guān)，不同劑型(膠囊或分散片)、不同批次的藥物崩解吸收速度可能有差異，間而影響到吸收速度，產(chǎn)生達(dá)峰時(shí)間差異；另外采血時(shí)間點(diǎn)的設(shè)置也會(huì)造成這種差異，頭孢克洛口服吸收快，如果在吸收相采血時(shí)間點(diǎn)寬，會(huì)影響達(dá)峰時(shí)間的精確計(jì)算；還有不同試驗(yàn)群體個(gè)體吸收差異也會(huì)造成達(dá)峰時(shí)間峰的差別。

單劑量給藥后,受試藥與對(duì)照藥的AUC0-T、AUC0-∞和Cmax三個(gè)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行方差分析，其結(jié)果顯示：AUC0-T、AUC0-∞和Cmax三個(gè)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)制劑間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，服藥周期對(duì)三個(gè)參數(shù)亦無(wú)明顯影響(P＞0.05)，AUC0-T、AUC0-∞和Cmax三個(gè)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均存在明顯的個(gè)體間差異(P＜0.05)。將AUC和Cmax兩個(gè)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，進(jìn)行雙向單側(cè)t檢驗(yàn),AUC0-T和AUC0-∞等效判斷標(biāo)準(zhǔn)為(0.8，1.25)，Cmax等效判斷標(biāo)準(zhǔn)為(0.75，1.33)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，AUC0-T的置信區(qū)間為93.0%～101.1%，AUC0-∞的置信區(qū)間為93.0%～101.0%，Cmax的置信區(qū)間為82.8%～108.7%，均符合等效標(biāo)準(zhǔn)；Cmax、AUC0-T和AUC0-∞三個(gè)參數(shù)的雙向單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果同樣符合等效標(biāo)準(zhǔn)；Tmax經(jīng)非參檢驗(yàn)結(jié)果合格。因此，受試藥與參比藥比較具有生物等效性。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則(中華人民共和國(guó)藥典二部2010年版)[M].中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010,附錄:195-199.

[2]劉亞妮,呂永寧,舒舟,等.頭孢克洛分散片健康人體藥動(dòng)學(xué)與生物等效性評(píng)價(jià)[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,29(5):597-600.

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[5]石焱,羅佳波,隋淼,等.頭孢克洛片在健康受試者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2008,24(3):207-209.

Relative bioavailability and bioequivalence study of cefaclor capsule in Chinese healthy volunteers

DING

Qing-shan,CHEN Tie-feng,ZHOU Zhi-ling,MAI Li-ping,CHEN Xiu-yun,YANG Min,YU Xi-yong.Education Department,Guangdong General Hospital,Guangdong Academy of Medical Sciences,Guangzhou 510080,Guangdong, CHINA

ObjectiveTo study the relative bioavailability of cefaclor capsule in Chinese healthy volunteers and evaluate the bioequivalence.MethodsA single oral dose 500 mg of test and reference formulations was given to 20 healthy volunteers in a randomized cross-over study.The concentrations of cefaclor in plasma were determined by HPLC.ResultsThe relative bioavailability of lnAUC0～Twas（97.5±10.0）%.Two formulations were bioequivalent.The 90%confidence interval of AUC0～Tand AUC0-∞were in the range of 80～125%;Cmaxwas in the range of 75～133%,so the two tablets were bioequivalent.ConclusionThere were similar human pharmacokinetic characteristics and same bioavailability in human subjects between two capsules of cefaclor.

Cefaclor;Bioequivalence;HPLC

R978.1

A

1003—6350（2013）05—0633—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.05.0273

2012-09-19)

余細(xì)勇。E-mail:gamsmail@163.com