自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白精密度性能的評價

呂賽平，劉琴，鄒學(xué)森

(江西省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌 330029)

精密度是反映檢測系統(tǒng)性能的重要指標(biāo)之一，精密度越高，說明檢測系統(tǒng)在日常工作中的隨機(jī)誤差就越小[1]。目前臨床上進(jìn)行精密度評價的方法較多，有些方法的試驗(yàn)設(shè)計不甚合理，CLSI頒發(fā)的EP5-A2文件是迄今為止評價精密度試驗(yàn)設(shè)計最為科學(xué)的方法之一[2]，為熟練掌握該文件的臨床應(yīng)用，本研究采用該方法評價本科室自建檢測系統(tǒng)測定血清TP的精密度性能，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)樣本 TP醫(yī)學(xué)決定水平有45g/L、60g/L、80g/L等3個濃度[3]，本研究采用混合血清法配制3個濃度水平的試驗(yàn)樣本(分別定義為低值、中值、高值)，并要求它們的TP濃度分別在44~46g/L、59~61g/L、79~81g/L范圍以內(nèi)。配制完畢后，3個濃度水平混合血清各吸取1ml用于初步精密度評價試驗(yàn)，并對TP濃度進(jìn)行定值，剩余血清各分裝成40份，每份至少0.5ml，-20℃冰凍保存。

1.1.2 儀器與試劑 日本東芝公司生產(chǎn)的TBA-120FR全自動生化分析儀，上海某生物科技有限公司生產(chǎn)的總蛋白試劑盒 (雙縮脲法，批號為：NVOL009)，英國朗道實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)的校準(zhǔn)品 (批號為 770UN)與質(zhì)控品 (批號分別為709UN、498UN)。

1.2 方法 嚴(yán)格按照CLSI頒發(fā)的EP5-A2文件[2,4]完成如下操作。

1.2.1 試驗(yàn)樣本測試 在測試試驗(yàn)樣本前先確定批內(nèi)精密度目標(biāo)(Mwr)以及總精密度目標(biāo)(MT)，本研究分別選用1/4 CLIA’88允許總誤差(TEa)、1/2 CLIA’88 TEa作為 Mwr、MT。然后進(jìn)行初步精密度評價試驗(yàn)，步驟如下：(1)配制3個濃度水平試驗(yàn)樣本時各留取混合血清1ml；(2)將3份混合血清各重復(fù)測定20次；(3)計算各自的均值、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)、變異系數(shù) (CV)，均值用于計算每個濃度水平的Mwr、MT，CV值用于精密度的初步評價。(4)3個濃度水平的CV均＜Mwr時可以進(jìn)行精密度評價試驗(yàn)。

精密度評價試驗(yàn)的步驟如下：(1)每天取3個濃度水平共6份試驗(yàn)樣本進(jìn)行總蛋白測定，即每個濃度水平含2份試驗(yàn)樣本。(2)同一濃度水平的2份試驗(yàn)樣本測定時間間隔需≥2h，并且每份試驗(yàn)樣本需要作平行管測定，因此1份試驗(yàn)樣本有2個數(shù)據(jù)，1個濃度水平2個試驗(yàn)樣本每天有4個數(shù)據(jù)。(3)在測試試驗(yàn)樣本的同時需要進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控結(jié)果在控時數(shù)據(jù)可以接受，失控時需要查找失控原因，待失控得到糾正時重新測定試驗(yàn)樣本。(4)連續(xù)測定20d，這樣每個濃度水平可以收集到80個數(shù)據(jù)，3個濃度水平共240個數(shù)據(jù)。

1.2.2 離群點(diǎn)檢查 由于每份試驗(yàn)樣本可以得到2個數(shù)據(jù)，當(dāng)這兩個數(shù)據(jù)的差值＞5.5×初步精密度評價試驗(yàn)SD時，該對數(shù)據(jù)被定義為離群點(diǎn)。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 三個濃度水平需要計算各自的批內(nèi)精密度(Swr)、批內(nèi)精密度自由度(DFwr)、批內(nèi)精密度檢驗(yàn)統(tǒng)計量(Twr)，總精密度(ST)、總精密度自由度(DFT)、總精密度檢驗(yàn)統(tǒng)計量(TT)等指標(biāo)。

1.2.3.1 計算 Swr、DFwr、Twr

上式中Xij1是指第i天第j批重復(fù)測定第1次的結(jié)果，Xij2是指第i天第j批重復(fù)測定第2次的結(jié)果，I為試驗(yàn)總天數(shù)。DFwr=數(shù)據(jù)可接受的工作天數(shù)×2。

1.2.3.2 計算ST、DFT、TT需要按如下步驟計算：①計算批均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(A)、日均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(B)；②計算日間標(biāo)準(zhǔn)偏差(Sdd)、批間標(biāo)準(zhǔn)偏差(Srr)；③計算 ST；④計算批均方(MR)、日內(nèi)均方(MD)；⑤計算 DFT、TT。

上式中Xi1＝第i天第1批重復(fù)2次測定的平均值，Xi2＝第i天第2批重復(fù)2次測定的平均值，Xi＝第i天同一濃度水平4個結(jié)果的均值，X＝同一濃度水平80個數(shù)據(jù)的均值，I=試驗(yàn)總天數(shù)。

1.2.4 結(jié)果解釋 計算得到的檢驗(yàn)統(tǒng)計量T＜T0.05(df)時，說明精密度(Swr或ST)與其目標(biāo)相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；反之，當(dāng)T＞T0.05(DF)時，說明精密度與其目標(biāo)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，需要查找相關(guān)原因，并給予糾正。

2 結(jié)果

2.1 初步精密度評價試驗(yàn) 3個濃度水平的CV值均＜2.5%，說明初步精密度評價試驗(yàn)通過，可以進(jìn)行下一步的精密度評價試驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 3個濃度水平初步精密度評價試驗(yàn)結(jié)果

2.2 離群點(diǎn)檢查 3個濃度水平的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均未發(fā)現(xiàn)離群點(diǎn)，可以進(jìn)行精密度評價試驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理，結(jié)果見表2。

表2 3個濃度水平精密度評價試驗(yàn)的離群點(diǎn)檢查

2.3 數(shù)據(jù)處理結(jié)果 3個濃度水平的批內(nèi)精密度與Mwr差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，總精密度與MT差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見表 3、表 4。

3 討論

傳統(tǒng)方法學(xué)評價檢測系統(tǒng)批內(nèi)精密度的具體操作就是單批連續(xù)測定某個試驗(yàn)樣本20次，通過20個結(jié)果的CV值反映該檢測系統(tǒng)的批內(nèi)精密度，而評價總精密度的具體操作就是先將某試驗(yàn)樣本分裝成20份，每天測定1份，連續(xù)測定20d，同樣通過20個結(jié)果的CV值反映該檢測系統(tǒng)的總精密度。由于傳統(tǒng)方法的操作條件與日常工作中實(shí)際情況有著明顯的差別，因此該方法得到的CV值不能真實(shí)地反映檢測系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、總精密度[5]。

針對上述情況，美國CLIS頒發(fā)了EP5系列文件用于臨床化學(xué)設(shè)備的精密度性能評價，該系列文件為評價臨床化學(xué)設(shè)備的批內(nèi)精密度、總精密度提供了標(biāo)準(zhǔn)操作指南，本研究即嚴(yán)格按照該系列EP5-A2文件評價本科室自建檢測系統(tǒng)測定血清TP的批內(nèi)精密度、總精密度。需要注意的是，在EP5-A2文件的實(shí)際操作過程中，其結(jié)果勢必受到試驗(yàn)樣本穩(wěn)定性的影響，試驗(yàn)樣本穩(wěn)定性越好，精密度評價試驗(yàn)結(jié)果就與實(shí)際情況越相符合，而應(yīng)用穩(wěn)定性差的試驗(yàn)樣本進(jìn)行精密度性能評價所得到的試驗(yàn)數(shù)據(jù)是不可靠的[6，7]。由于分析樣本中TP在冰凍保存狀態(tài)下可以穩(wěn)定數(shù)年[8]，因此本研究采用混合血清法配制試驗(yàn)樣本完全符合EP5-A2文件對試驗(yàn)樣本穩(wěn)定性的要求。除此以外，EP5-A2文件對試驗(yàn)樣本數(shù)目、濃度還有一定的要求，該文件要求試驗(yàn)樣本數(shù)目在2個甚至2個以上，而試驗(yàn)樣本濃度則達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平[9]。由于TP有3個醫(yī)學(xué)決定水平，因此本研究選擇3個濃度水平的試驗(yàn)樣本，并且在在配制試驗(yàn)樣本時要求其各自的濃度水平在 (醫(yī)學(xué)決定水平±1)g/L范圍內(nèi)，因此本研究試驗(yàn)樣本數(shù)目、濃度亦滿足EP5-A2文件的相關(guān)要求。

表3 3個濃度水平批內(nèi)精密度的評價

表4 3個濃度水平總精密度的評價

在結(jié)果解釋的時候，EP5-A2文件要求將試驗(yàn)得到的批內(nèi)精密度、總精密度與臨床化學(xué)設(shè)備廠家提供的Mwr、MT進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較，但我科采用的是自建檢測系統(tǒng)，儀器、試劑、校準(zhǔn)品與質(zhì)控品均來自不同的廠家，根據(jù)目前臨床上通行的做法，我們分別采用 1/4 CLIA’88TEa、1/2 CLIA’88 TEa 作為本研究的Mwr、MT[10]。由本研究計算的數(shù)據(jù)可知，我科自建檢測系統(tǒng)測定血清TP在3個醫(yī)學(xué)決定水平處的批內(nèi)精密度、總精密度與其對應(yīng)的Mwr、TT差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，因此我科室自建檢測系統(tǒng)測定血清TP的精密度滿足臨床需求。但這里需要說明的是，EP5-A2文件要求試驗(yàn)過程中校準(zhǔn)品、試劑批號、操作者等因素均固定不變，而這些因素對檢測系統(tǒng)總精密度可以產(chǎn)生很大的影響，因此應(yīng)用EP5-A2文件評價總精密度時存在低估的可能性。新版本的EP5系列文件可否囊括影響總精密度的所有因素，這一點(diǎn)值得我們期待。

[1]Smolcic VS,Bilic-Zulle L,Fisic E.Validation of methods performance for routine biochemistry analytes at Cobas 6000 analyzer series module c501[J].Biochem Med (Zagreb),2011,21(2):182-190.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods[S].EP5-A2，CLSI，2004.

[3]呂賽平,劉琴,鄒學(xué)森.兩種不同檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白的結(jié)果比對與偏倚評估[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012,30(2):144-146.

[4]呂賽平,伍志杰,鄒學(xué)森.自動生化分析儀精密度性能的評價[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007,22(4):48-49.

[5]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M].第2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2007,85-107.

[6]De Koninck AS,De Decker K,Van Bocxlaer J,et al.Analytical performance evaluation of four cartridge-type blood gas analyzers[J].Clin Chem Lab Med,2012,50(6):1083-1091.

[7]Lebitasy MP,Latinne D,Maisin D,et al.Clauss assay and fibrinogen protein estimated by capillary zone electrophoresis[J].Clin Chem Lab Med,2011,49(4):689-693.

[8]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006：113-117.

[9]Carlier P,Harika N,Bailly R,et al.Laboratory evaluation of the new AccessRcytomegalovirus immunoglobulin IgM and IgG assays[J].J Clin Virol,2010,49(3):192-197.

[10]陳唐勇,章登珊,萬臘根.生化儀檢測系統(tǒng)精密度的評估方法與結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,27(5):461-462.