液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測火鍋底料中罌粟殼

劉敏敏，張朝正，李延志，溫家欣

（廣東省藥品檢驗所，廣東廣州 510180）

火鍋是我國老百姓比較喜愛的一種飲食，然而，近年來少數(shù)食品生產(chǎn)經(jīng)營者為了招攬顧客，牟取暴利，在火鍋及其調(diào)味料中添加罌粟殼及其水浸物等違禁原料，使食物味道鮮美。罌粟殼是罌粟科植物采完阿片后的干燥成熟果殼，內(nèi)含嗎啡（morphine）、可待因（codeine）、罌粟堿（papverine）等多種生物堿[1]。因此添加了罌粟殼的食物易使消費者成癮，長期食用者會對其產(chǎn)生依賴性。

目前，鍋底料中非法添加罌粟殼的檢測尚無標準檢測方法。文獻報道的方法主要有分光光度法、層析法、示波極譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳和液-質(zhì)聯(lián)用法等[2-3]。本實驗采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建設(shè)了火鍋底料中非法添加的罌粟殼中嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因、那可丁等5種生物堿成分LC-MS/MS檢測方法，方法靈敏、準確，、快速，適用于火鍋調(diào)味料食品中罌粟殼的檢測。

1 材料與試藥

1.1 儀器

液質(zhì)聯(lián)用色譜儀：美國熱電公司，型號為Quantum Access MAX/600 PUMP；離心機：德國Eppendorf公司，型號為X1R；超純水發(fā)生器：美國Millipore公司，型號為QA；電子分析天平：德國SARTORIUS公司，型號為CP225D。

1.2 試劑與試藥

磷酸可待因（批號：171203-201005，含量：99.6%）、嗎啡（批號：171201-200822，含量：99.8%）、鹽酸罌粟堿（批號：171214-200404）；蒂巴因（批號：171216-200403）；那可?。ㄅ枺?71224-200403）：中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

1.3 樣品

火鍋底料均為2011年廣東省餐飲食品監(jiān)督抽檢樣品。

2 方法

2.1 分析條件

2.1.1 色譜條件

色譜柱為SHISEIDOCAPCELLPAKCR1：4（5μm，2.0×150 mm），50 mmol/L 乙酸銨：乙腈（50∶50），0.5%甲酸為流動相A相，乙腈為流動相B相，流速0.3mL/min；按表1進行梯度洗脫。

表1 分離生物堿的最佳梯度洗脫表Table 1 Optimal elution condition for determination of alkaloids residues

2.1.2 質(zhì)譜條件

以三重四極桿質(zhì)譜儀作為檢測器，電化學噴霧離子源，采集模式為正離子模式，質(zhì)譜條件如下：噴霧電壓：5 500.0 V；鞘氣壓力：525 kPa；輔助氣：6 L/min；反吹氣：0.6 L/min。各化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2，總離子流見圖1。

表2 質(zhì)譜參數(shù)表Table 2 Parameter of Mass spectra of alkaloids residues

2.2 標準品溶液的制備

2.2.1 空白基質(zhì)溶液

分別稱取與待測樣品基質(zhì)相同的、不含所測成分試樣，按供試品溶液制備方法依法操作，制備空白基質(zhì)溶液。

圖1 5種生物堿標準品的提取離子流譜圖Fig.1 Extraction spectrum of five alkaloids residues

2.2.2 標準儲備溶液

分別精密稱取嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因和那可丁標準品適量，用0.5%甲酸的甲醇溶液配制成1 mg/mL的溶液，作為標準儲備液。

2.3 樣品的前處理

稱取2 g試樣，于50 mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入5 mL水，渦旋1 min，再加入15 mL乙腈，渦旋1min。超聲提取20 min后，加入1.5 g無水醋酸鈉，再加入6 g無水硫酸鎂，渦旋1 min，以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心1 min，取出后待凈化。稱取50 mgPSA，150 mg無水硫酸鎂置于2 mL聚四氟乙烯具塞離心管中，用1 mL微量移液器將上述上清液1 mL移入此離心管中，渦旋混合器渦旋1min，以5000r/min的轉(zhuǎn)速離心1 min，移取上清液0.5mL于2mL離心管中，加入20 mmol/L乙酸銨溶液0.5mL，混勻，過0.45 μm微孔濾膜待測。

3 結(jié)果

3.1 線性范圍

分別準確吸取上述標準儲備液1.00 mL于100 mL容量瓶中，用稀釋溶劑（取空白基質(zhì)溶液：20 mmol/L乙酸銨=50：50比例配制成稀釋溶劑）定容至刻度。再準確吸取該溶液1.00 mL于200 mL容量瓶中，用稀釋溶劑定容至刻度，制成標準使用液。分別準確吸取上述溶液 1.00、1.00、1.00、1.00、2.00、4.00 mL 于 50、20、10、5、5、5 mL容量瓶中，用稀釋溶劑稀釋至刻度，制成濃度分別為 1，2.5，5，10，20，40 ng/mL 溶液，作標準曲線，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，5種物質(zhì)在1 ng/mL～40 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均達0.999。

表3 5種生物堿標準曲線Table 3 the linear of alkaloids residues

3.2 檢測限

以基線3倍噪聲值計算方法檢測限，測得可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因的檢出限為0.1 ng/mL，嗎啡的檢測限為2.5 ng/mL，按測定方法計算，本方法可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因的檢測限為1 μg/kg；嗎啡的檢測限為 37 μg/kg。

3.3 精密度試驗

取濃度為5ng/mL的基質(zhì)標準溶液，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果表明，嗎啡、可待因、罌粟堿、那可丁、蒂巴因6次進樣峰面積的RSD值在0.8%～2.3%范圍內(nèi)，精密度良好。

3.4 加樣回收率試驗

取樣品2 g，分別加入不同濃度水平的標準品適量，照樣品處理項下方法依法操作，計算回收率及相應(yīng)RSD值，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，本方法回收率試驗結(jié)果良好。

3.5 方法應(yīng)用

應(yīng)用本方法對2011年廣東省餐飲食品監(jiān)督抽檢抽得的200批的火鍋底料進行檢測，共有5批樣品檢出多種罌粟殼類生物堿成分，添加了罌粟殼的火鍋底料占2.5%，結(jié)果見表5。

表4 回收率實驗（n=6）Table 4 Recovery of alkaloids residues（n=6）

表5 部分樣品檢出結(jié)果Table 5 Result of some samples μg/kg

4 討論

1）火鍋底料中罌粟殼的檢測，現(xiàn)在尚無標準，有文獻報道，可以參考農(nóng)殘檢測的QuECHERS法進行提取[4]。實際應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)該方法回收率低，嗎啡的回收率僅為32.5%。生物堿在火鍋底料中以鹽的形式存在，本方法用水將火鍋底料中罌粟殼中的生物堿提取出來，再用乙腈萃取，加無水醋酸鈉促進生物堿由水相轉(zhuǎn)移至有機相，最后用無水硫酸鎂出去水相。實驗表明，本方法大大提高了生物堿尤其是嗎啡的回收率，滿足了實驗所需。

2）嗎啡等生物堿為強極性化合物，有文獻報道，用C18柱進行色譜分離[5]。筆者在實驗中發(fā)現(xiàn)，嗎啡等生物堿在C18柱上基本不保留，無法進行色譜分離。筆者也曾嘗試采用文獻報道的ACQUITY UPLC BEH HILIC色譜柱[4]，這款正相柱具有重現(xiàn)性差，保留時間飄移嚴重，難以預(yù)平衡等特點，難以在基層實驗室推廣應(yīng)用。本方法選擇了強陽離子交換與反相C18混合填料，混合比例（1：4）的色譜柱，該柱子克服了原方法的缺點，重現(xiàn)性好，保留時間穩(wěn)定，容易平衡等特點，能有效分離嗎啡等強極性的化合物。

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[1]廖文娟,張虹,任一平.液相色譜－串聯(lián)四級桿質(zhì)譜法測定罌粟殼主要成分在止咳藥中的含量[J].分析化學,2006,34(8):1175－1178

[2]汪芳芳,咼亮,曾愛明,等.食品中罌粟殼殘留檢測的研究現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代商貿(mào)工業(yè),2009(3):279－280

[3]張靖.食品中罌粟堿、嗎啡、可待因含量的液相色譜法研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,17(1):72－73

[4]王柯,鄭榮,簡龍海,等.火鍋調(diào)料中5種生物堿成分的液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測定法[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(2):363－365

[5]劉艷琴,王浩,楊紅梅,等.液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定食品中罌粟堿殘留[J].食品研究與開發(fā),2010.31(7):130－132