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      北京地區(qū)人群血清抗交叉反應(yīng)性糖類決定簇IgE檢測與分布特征分析

      2013-09-06 06:13:02閆津津馮珍如王美玲閆存玲鄭新芝李志艷史曉敏
      中國全科醫(yī)學(xué) 2013年21期
      關(guān)鍵詞:項目數(shù)變應(yīng)原過敏

      閆津津,馮珍如,王美玲,閆存玲,鄭新芝,李志艷,史曉敏

      目前國內(nèi)外檢測變態(tài)反應(yīng)病的變應(yīng)原(allergen)較常用的檢查方法是變應(yīng)原皮膚點刺試驗 (skin picked test,SPT)和血清變應(yīng)原特異性IgE(specific IgE,sIgE)檢測,前者由于會產(chǎn)生較大的痛苦,不太被患者接受;后者只需抽取少量靜脈血即可,因而應(yīng)用廣泛。準(zhǔn)確判斷變應(yīng)原sIgE的結(jié)果對明確診斷,接受后續(xù)治療具有重要意義。但是由于有交叉反應(yīng)性糖類決定簇(cross-reactive carbohydrate determinants,CCD)可能會產(chǎn)生假陽性,干擾sIgE的結(jié)果判定。CCD的主要結(jié)構(gòu)包括β1,2-xylose(木糖)和 core α1,3-fucose(海巖藻糖)[1]?,F(xiàn)國外有很多關(guān)于CCD生物學(xué)功能的報道。研究表明,在變應(yīng)原和非變應(yīng)原中均有糖基化結(jié)構(gòu),該糖基化結(jié)構(gòu)引起的IgE為抗交叉反應(yīng)性糖類決定簇IgE(IgE to cross-reactive carbohydrate determinants,anti- CCDIgE),是引起交叉反應(yīng)的一類糖基抗體[1]。這類糖基可表現(xiàn)在花粉、植物類食物、昆蟲的毒液等中,引起機(jī)體產(chǎn)生 anti-CCDIgE,anti-CCDIgE是否引起過敏癥狀還未有定論[2],臨床相關(guān)性研究提示一般不引起機(jī)體的臨床過敏癥狀[3]。anti-CCDIgE 由于與其他變應(yīng)原的IgE有共同的抗原表位,存在交叉反應(yīng),這說明一些sIgE陽性的患者并沒有出現(xiàn)相應(yīng)的臨床表現(xiàn),則是 由 于 anti-CCDIgE 引 起 的[2]。anti-CCDIgE是否會引起臨床過敏癥狀,是否需要治療,對sIgE診斷有無干擾,國外雖有報道,但并未明確,國內(nèi)尚無相關(guān)報道。本研究首次在中國對北京地區(qū)人群血清anti-CCDIgE與性別、年齡、職業(yè)暴露、臨床過敏癥狀等的相關(guān)性進(jìn)行研究,旨在為臨床預(yù)防和診治變態(tài)反應(yīng)病提供準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料 參加2010年度北京大學(xué)第一醫(yī)院體檢的本院工作人員共1 377例,其中男349例,女1 028例;年齡22~91歲,平均(42.3±3.8)歲,其中20~40歲650例 (青年組,男98例,女552例),41~60歲587例 (中年組,男202例,女385例),>60歲140例 (老年組,男49例,女91例);行政人員412例,醫(yī)護(hù)人員965例;無過敏史者1 200例,有過敏史者177例。

      1.2 方法

      1.2.1 主要試劑及儀器 試劑:(1)特應(yīng)性變應(yīng)原 (中國組合)檢測試劑盒(歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷股份公司),批號為A100719AA、A1000927AH;保存條件為2~8℃。試劑盒包括:變應(yīng)原膜條、酶結(jié)合物、10倍濃縮通用緩沖液、底物等。變應(yīng)原膜條項目:蟹,蝦,海水魚組合(龍蝦、扇貝、鱈魚),淡水魚組合 (鮭魚、鱸魚、鯉魚),黃豆,花生,牛奶,雞蛋白,葎草,霉菌組合 (點青霉菌、分枝胞霉、煙曲霉、交鏈孢霉),蟑螂,狗上皮,貓毛,屋塵,塵螨組合 (屋塵螨、粉塵滿),艾蒿,普通豚草,樹組合(榆樹、柳樹、楊樹)。

      儀器:EUROBlotMaster免疫印跡自動分析儀 (德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷股份公司),canoscanline 100掃描判讀系統(tǒng)(日本佳能有限公司),掃描結(jié)果判讀軟件 (EUROLine Scan,德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷股份公司)。

      1.2.2 血清anti-CCDIgE檢測方法 采集受檢者靜脈血5 ml,置于含分離膠的真空黃蓋管,分離血清于-80℃保存,待測anti-CCDIgE。嚴(yán)格按照儀器和試劑說明書進(jìn)行操作:加樣,清洗,加入酶結(jié)合物,清洗,加底物,清洗等。由EUROblot Master免疫印跡分析儀自動進(jìn)行檢測,檢測完成后取出膜條自然風(fēng)干。

      1.2.3 結(jié)果判讀 將檢測膜條室溫自然風(fēng)干后,采用掃描結(jié)果判讀軟件進(jìn)行掃描,根據(jù)條帶著色強(qiáng)度自動判讀結(jié)果。條帶著色強(qiáng)度<10為陰性,著色強(qiáng)度≥10為陽性。結(jié)果分為0~6級,0級為陰性,1級及以上為陽性,級別越高著色越深,表示sIgE(包括anti-CCDIgE和各項變應(yīng)原sIgE)濃度越高。

      1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理,組間率的比較采用χ2檢驗;同組內(nèi)構(gòu)成比比較采用組內(nèi)構(gòu)成比比較的χ2檢驗;anti-CCDIgE陰性和陽性人群血清sIgE陽性平均項目數(shù)比較采用Wilcoxon W檢驗;anti-CCDIgE陽性率與血清sIgE變應(yīng)原陽性項目數(shù)的關(guān)系采用線性相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 血清anti-CCDIgE檢出情況 1 377例體檢者中 anti-CCDIgE陽性327例,陽性率為23.7%,其中1級185例 (占56.6%),2級85例 (占26.0%),3級46例 (占 14.1%),4級 6例 (占1.8%),5級5例 (1.5%),各陽性級別所占比例間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=340.08,P<0.05)。

      2.2 血清anti-CCDIgE與血清變應(yīng)原sIgE陽性項目數(shù)的關(guān)系 anti-CCDIgE陰性人群血清變應(yīng)原sIgE陽性平均項目數(shù)為0.999個,anti-CCDIgE陽性人群血清變應(yīng)原sIgE陽性平均項目數(shù)為2.551個,二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.001)。anti-CCDIgE陽性率與血清變應(yīng)原sIgE陽性項目數(shù)呈線性正相關(guān) (r=0.986,P<0.05)。1個變應(yīng)原sIgE陽性時anti-CCDIgE陽性率和總體anti-CCDIgE陽性率相當(dāng) (見圖1)。

      圖1 血清anti-CCDIgE陽性率與血清sIgE陽性變應(yīng)原項目個數(shù)的關(guān)系Figure1 The correlation between prevalence of anti-CCDIgE and number of sIgE positive items

      2.3 不同人群anti-CCDIgE陽性率比較 女性體檢者的anti-CCDIgE陽性率高于男性,有過敏癥狀者的anti-CCDIgE陽性率高于無過敏癥狀者,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05)。不同年齡、職業(yè)人群比較,anti-CCDIgE陽性率間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05,見表1)。

      2.4 sIgE各陽性變應(yīng)原項目中anti-CCDIgE陽性率 屋塵44.6%、蟑螂33.9%、狗上皮22.6%、樹22.1%、蝦21.7%、艾蒿15.6%、淡水魚15%、蟹14.4%、塵螨12.2%、豚草11.9%、海魚11.7%、霉菌8.9%、貓毛6.7%、牛奶5.2%、花生3.7%、黃豆3.1%、羊肉2.1%、雞蛋白1.8%、牛肉1.2%、葎草1.2%。

      表1 不同分組人群血清anti-CCDIgE陽性率比較Table1 Comparison of different sub-groups positive rate of serum anti-CCDIgE

      3 討論

      本研究根據(jù)大樣本探討人群血清anti-CCDIgE的分布特征及與臨床變態(tài)反應(yīng)的相關(guān)性,結(jié)果顯示1 377例體檢者中anti-CCDIgE陽性 327例,陽性率為23.7%,略高于歐洲一般人群的anti- CCDIgE陽性率 (20%)[1],其中 1級185例 (占 56.6%),2級85例 (占26.0%),3級46例 (占14.1%),4級6例 (占 1.8%),5級 5例 (1.5%),隨著級別遞增,anti-CCDIgE陽性率明顯降低。上述數(shù)據(jù)顯示北京地區(qū)人群anti-CCDIgE陽性中大部分為低濃度 (1級)水平。文獻(xiàn)報道CCD引起的IgE水平為低水平、低親和力、低活性的[4],因此可能是不會引起臨床癥狀的原因。

      本研究結(jié)果顯示,anti-CCDIgE陽性人群血清變應(yīng)原sIgE的陽性項目數(shù)明顯高于 anti-CCDIgE陰性人群,并且隨sIgE陽性項目增加,anti-CCDIgE陽性率有增高趨勢,即多種變應(yīng)原陽性時,可能anti-CCDIgE抗體對sIgE檢測的干擾就越大。

      本研究結(jié)果顯示,女性anti-CCDIgE陽性率高于男性,有臨床過敏癥狀者高于無臨床過敏癥狀者,因此對有過敏癥狀的就診者,特別是女性,在評估變應(yīng)原時應(yīng)考慮anti-CCDIgE的影響。而不同年齡、職業(yè)人群 anti-CCDIgE陽性率無差異,說明年齡和職業(yè)暴露不同不會引起anti-CCDIgE差異產(chǎn)生。西班牙地區(qū)的調(diào)查報道,男性anti-CCDIgE水平高于女性,45歲及以上和45歲以下者anti-CCDIgE水平無差別,有過敏癥狀者anti-CCDIgE水平高于無過敏癥狀者[4],與北京地區(qū)不同的是,北京地區(qū)女性anti-CCDIgE陽性率高于男性,整個中國乃至亞洲地區(qū)人群是否與歐洲地區(qū)不同需進(jìn)一步研究探索。

      本研究表明在一般人群中anti-CCDIgE陽性率最高樣本中的變應(yīng)原是屋塵 (44.6%),這與國外相關(guān)報道首位的是花粉[5]不同,可能與人類基因的多態(tài)性和接觸的頻率有關(guān)。

      大部分吸入或食入變應(yīng)原都含有糖基化的低聚糖,它們是有免疫原性的,可使人體產(chǎn)生針對糖類的抗體anti-CCDIgE,干擾血清中sIgE的測定,可能引起假陽性或假陰性的產(chǎn)生,其原因可能是機(jī)體產(chǎn)生的anti-CCDIgE結(jié)合與其有相同表位的變應(yīng)原導(dǎo)致。根據(jù)國外相關(guān)報道,大多數(shù)交叉反應(yīng)導(dǎo)致的假陽性不是因蛋白表位的交叉反應(yīng),而是由于anti-CCDIgE的產(chǎn)生所致,如有大量證據(jù)顯示膜翅目毒液和蜜蜂毒液之間的交叉反應(yīng)大多是由N-糖基鏈所致,而不是蛋白之間的交叉反應(yīng)[6],因此當(dāng)出現(xiàn)多種變應(yīng)原時應(yīng)考慮anti-CCDIgE的影響。研究估計15%~30%的變態(tài)反應(yīng)病患者會產(chǎn)生針對糖基蛋白的 sIgE,即 anti-CCDIgE[7]。41%對花粉產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)的患者,產(chǎn)生了針對糖基蛋白的sIgE,而SPT顯示為陰性[8]。

      本研究未能分析anti-CCDIgE對SPT的影響是否也會引起SPT假陽性或假陰性,以及有文獻(xiàn)報道蜜蜂叮咬人群anti-CCDIgE陽性率明顯高于其他人群[4],在進(jìn)一步研究中將考慮。此文亦未能分析當(dāng)sIgE和anti-CCDIgE同時存在時,其他具有相同蛋白表位的變應(yīng)原是否也有干擾,是以哪種為主,具體個案分析有待進(jìn)一步研究。

      綜上可見,anti-CCDIgE普遍存在于過敏人群中,從有過敏的患者到無過敏的人群,都有anti-CCDIgE的存在,所以使用天然或重組糖蛋白作為靶抗原建立的sIgE檢測方法必須認(rèn)真評估anti-CCDIgE的普遍存在,其是引起多種與臨床診斷不相符合的變應(yīng)原sIgE假陽性的因素之一。對于變態(tài)反應(yīng)病首先應(yīng)盡快明確其變應(yīng)原,在血清學(xué)檢查中應(yīng)將anti-CCDIgE考慮其中,必要時使用抑制劑預(yù)處理,從而得到準(zhǔn)確的結(jié)果,指導(dǎo)臨床有效預(yù)防和控制變態(tài)反應(yīng)病的發(fā)生。

      1 Altmann F.The role of protein glycosylation in allergy[J].IntArch AllergyImmunol,2007,142(2):99-115.

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