Nikos E. Mazonakis, Panagiota H. Karathanassi, Dimitrios P. Panagiotopoulos,Paraskevi G. Hamosfakidi, Dimitrios A. Melissos

FAMARS.A.公司,BU化妝品,質量檢驗實驗室，質量保證部門，48thkmNEO希臘雅典萊密阿Avlonas19011

1.介紹

藥品外觀清潔驗證問題已持續(xù)5～7年，它已經(jīng)變成了一個復雜的案例研究。術語像“藥理藥性”和“最低效果限制“在評價制藥公司之間的清潔行動中起到了非常重要的作用[1-5]。有效的清潔程序[6,7]必須符合法規(guī)要求。由于多用途生產(chǎn)設備的不完全清潔，采取措施減小放大系數(shù)。FAMAR S.A.公司，作為藥品的合同制造商，不得不適應這個具有挑戰(zhàn)性的新時代。

在化妝品和盥洗用品行業(yè)，正在調查這些理論的實施狀況，并已起草所有相關的清潔和消毒法規(guī)[8]。目前工作目標是評價化妝品行業(yè)的制藥方法，考慮對關鍵參數(shù)進行合適定義。本文主要研究廣泛使用的防曬霜的吸光系數(shù)[9]和化妝品添加劑的立法允許最大濃度[10]。

盡管在藥物分析中有將清潔驗證和液相色譜（LC）分析相結合的多種方法[11]，但在防曬化妝品中沒有介紹類似方法的刊物。我們已經(jīng)使用了一個經(jīng)過驗證的液相色譜方法[12-15]來檢測常見防曬產(chǎn)品生產(chǎn)設備中的紫外線過濾殘留物。

2.實驗

在進行任何實驗之前，人們必須設計一個協(xié)議，必須遵循協(xié)議中所有的步驟以便獲得可靠的結果。清潔驗證協(xié)議（CVP）的步驟如下。

2.1 定義評估的成分

評估的成分是活性原料，它們在生產(chǎn)（制造和灌裝過程）后不能輕易被移除，并能累積在下一批產(chǎn)品中。與此同時，法律限制同一成分在產(chǎn)品中使用的最大濃度。本次研究的成分是防曬過濾物。

2.2 設置變量

2.2.1 產(chǎn)品將會接觸的罐和器皿的類型及表面積

本次研究中我們專注于6噸制造容器，配有攪拌器、刮刀和均質器。設備的總接觸表面積通過技術研究計算得到。6噸制造容器的表面積是18.4m2。正如預期的那樣，表面總有一些小零件（即角或噴霧清洗機的表面對側），可能會導致清潔過程中效率低。這些表面被描述為“很難清理”（第2.5節(jié)）。

2.2.2 每個設備的產(chǎn)品分組

6噸容器可用于生產(chǎn)防曬產(chǎn)品、洗發(fā)水、沐浴液、面霜和乳液。研究每個組在最差情況下的產(chǎn)品（第2.2.5節(jié)）。作為代表例子，我們將重點研究防曬產(chǎn)品組，其中含有作為活性成分的紫外線過濾物。

2.2.3 評估成分的物理和化學特性

產(chǎn)品中的防曬過濾物的濃度（%，w / w）以及成分的相關效力如吸光度（A），列于表1。在有UVA（I＆II）或UVB的區(qū)域，尤其對于紫外線過濾物，該效力也被定義為吸光度。其中UVAI的波長是340～400 nm，UVAII的波長是320～340 nm，UVB的波長是290～320 nm。UVB照射造成的危害更大并具有致癌性，因為它可以到達真皮層[9]。法律提出的最大界限主要適用于皮膚科及毒效，并且一直在考慮用公式表示，已列于表中作為本次成分研究的間接指標。此信息的意思是在UVB范圍內（290～320 nm），成分（即防曬過濾物）具有高吸光度和接近法律限制的產(chǎn)品濃度，因此防曬過濾物（強效成分）肯定適合此次案例研究。另外，防曬過濾物在水中的溶解度和高粘度（本案例研究為45,000 CPS）發(fā)揮了重要的作用，因為僅用水就能將其洗掉，不需要任何有機溶劑。

2.2.4 批量大小

記錄每組產(chǎn)品的最小和最大批量（表1），這是非常重要的。

2.2.5 最差案例情況

生產(chǎn)罐裝一種含有效成分的產(chǎn)品，按照常規(guī)清洗程序對該生產(chǎn)罐進行清洗（2.4節(jié)）。先用容器裝最大量產(chǎn)品，該產(chǎn)品相對不溶，容器表面較難清潔。下一次生產(chǎn)用這個罐裝最小量產(chǎn)品。這種情況將明顯導致強效成分在下一批產(chǎn)品中積累。選擇的研究產(chǎn)品中，這將是最難清理的情況，對其進行如下考慮：（i）在最危險的照射范圍（UVB）內，產(chǎn)品高濃度成分的最大吸光度；（ii）溶解度；（iii）法律對該成分的限制；（iv）容器表面（v）批量大小。

研究的產(chǎn)品可能包含一些有效成分，使用上述標準，挑出其中最差的一個（第2.3.3節(jié)）。

2.3 設置限制

暫定接受限制。

2.3.1 制藥方法[1-5]

給定的設備中，各組配方產(chǎn)品成分的最小濃度中，允許殘留物最小濃度<0.1%（減少3個數(shù)量級）。用于確定最大濃度的公式中的決定最差情況（第2.2.5）的影響因素要求被確定下來，以便可以認為設備是“干凈的”（第2.6節(jié)）：

其中，A是最低的成分濃度（mg/g），C是各組中的最小批量（g），D是樣品表面積（默認情況下，10-2平方米），E是制造容器表面積（m2），F(xiàn)是采收率，通常定義最低可接受的為50%，G是溶劑沖洗的體積（升）。

2.3.2 參考趨勢

如果上述方程導致高濃度，那么殘留物的最大允許濃度是10mg/L（ppm）。

2.3.3 產(chǎn)品的定義和研究的成分

我們選擇的產(chǎn)品是兒童防曬乳液SPF50（產(chǎn)品編號#6），數(shù)據(jù)列于表1，成分乙基己酯，（辛基）甲氧基肉桂酸酯（OMC），作為“最差情況”。根據(jù)第2.2.5節(jié)中的準則，排出所有其他成分。

限度僅僅是根據(jù)特定案例計算得到。在其他設備中，對于不同的產(chǎn)品組，結果將不同。

表1 兒童防曬乳液SPF50有關數(shù)據(jù)

2.4 常規(guī)清洗程序

采用高壓清洗機對制造容器進行清洗。常規(guī)清洗程序如下：溫度最低為85℃，采用去離子水和合適的洗滌劑清洗。然后使用熱的（溫度最低為85℃）去離子水沖洗容器。在本次清洗程序中，時間設定為45分鐘和5分鐘。判斷清洗效果的兩個標準：采用純凈水清洗樣品后，視覺上的表面清潔度和無紫外線吸光度（200～400 nm）。

2.5 采樣（僅CVP用途）

如果合理設計采樣并正確執(zhí)行，那么整個CVP是可以用的。該方法將產(chǎn)生可靠的結果、化學制品和微生物。樣品處理如下：

* 常規(guī)清潔程序結束時，進行設備的最后沖洗（純凈水），用于全化學（根據(jù)歐洲藥典）及微生物測試。

* 最后沖洗后，使用棉簽對設備表面進行清洗，用于微生物測試。

* 溶劑沖洗（使用水或有機溶劑進行額外清洗，如乙醇，已確定其成分可以溶解）幫助確定正在調查的成分。溶劑量和設備大小相關。

* “難清洗”表面，特別是不能直接用溶劑沖洗的設備表面，如攪拌軸、刮板、內容器表面（表2），溶劑沖洗后使用棉簽，幫助確定正在調查的成分。應在24小時內對所有樣品進行分析，以避免將降解產(chǎn)品當成研究成分。

2.6 清洗程序后的規(guī)格

* 最終清洗（常規(guī)）后的視清潔度

* 最終清洗和棉簽清洗（CVP）后無微生物污染。

* 最終清洗后沒有明顯的紫外吸光度（暫定研究成分的最大吸光度是10ppm，CVP）。

* 用溶劑清洗和表面棉簽擦拭濃度必須優(yōu)于可接受的限度（第2.3.3節(jié)CVP）。

2.7 方法

2.7.1 儀器

使用具有1cm光程的水晶容器進行最終清洗，使用紫外-可見分光光度計（Perkin-Elmer L2）對其進行評價（第2.4和2.6節(jié)）。

瓦里安星LC系統(tǒng)（紫外檢測器9050和泵9012）配備自動進樣器（9100）與20環(huán)路和一個C18逆轉相柱（Kromasil?250mm×4.5mm，5 包裝材料）及類似的前置柱（30mm×4.6mm），排成一直線，用于評估溶劑沖洗和棉簽擦拭效果。在環(huán)境溫度下，溶液流速為1.2mL/min，該溶液由甲醇和水組成，（甲醇∶水=90∶10，v/v），流動相包括對溶液的等度洗脫。該檢測器被設置為305 nm。

表2 液相色譜分析獲得的OMC分析數(shù)據(jù)和驗證結果

2.7.2 液相色譜法分析沖洗和棉簽擦拭

確定防曬過濾物內容所使用的方法（類似于文獻中提到的那些）[12-15]和常規(guī)分析所使用的方法是相同的。這是一個為FAMAR客戶（跨國公司）開發(fā)、驗證和批準的內部方法。成分OMC的常規(guī)測定濃度是150mg/L（ppm）。產(chǎn)品的OMC濃度為7.5%（w/w）。在濃度為0.5，1，10，50，100，150mg/L（n =6）時，進行線性和精度驗證，并對檢測結果（DL）和定量限度（QL）的確定進行評價（表2）。

2.7.2.1 標準的準備

所有重量測量均使用工業(yè)參考標準，該標準來自已獲批準的原始文檔（OMC，BASF，德國）。準確稱取100毫克左右的OMC，放入容積100毫升的燒瓶中，溶解于異丙醇并稀釋至相應的體積。為了進行測量結果校準，相應的溶液用移吸管轉移至100毫升容量瓶中，混合異丙醇并稀釋至相應的體積。

2.7.2.2 樣品制備

在直接注入溶劑沖洗前，先用2mL溶劑沖洗棉簽。所有的測試都重復3次。

2.7.3 采收率

本次研究中采收率表示從設備中回收殘留物的程度。樣品擦拭仿真通過將含有研究成分的溶液置于不銹鋼板上，不銹鋼板的尺寸等于采集的樣品尺寸（10厘米×10厘米= 10-2平方米），用經(jīng)溶劑沖洗過的濕潤棉簽進行干燥和采收。測試范圍：1.00～150.0mg/L。所有的測試都重復3次。

3.結果與討論

從方法（表2）和回收率（表3）驗證得到的分析結果表明：CVP中所有的假設和計算證明殘留物可以在預期的范圍內檢測到（沖洗液和棉簽濃度<10mg/L或10 每根棉簽）。確定殘留物成分的分析方法能夠檢測到濃度最低為1.11mg/L的OMC，并能對濃度大于3.34mg/L的OMC進行量化。線性范圍是0.50～150 mg/L，A = 39,999（±189）×C-7971（±13378），R = 0.99994。所有校準點的精度，R.S.D. = 0.21～1.35%（<2.0%），確保精度在此范圍內的所有值是可靠的。必須明確的是：每次用于溶劑沖洗的樣品只有一個是有效的，并且每個棉簽樣品（三個樣品）必須是從不同的點獲得。標準偏差對這些重復樣品是不適用的。

就回收率而言，證明已知1～150mg/L范圍內分析方法檢測到的殘留物可以通過選定的采樣方法進行回收?；厥章史秶?7.6～101.3%，顯示了該方法準確性高?？紤]到低濃度抽樣的隨機誤差，該回收率已經(jīng)相當高，并且符合規(guī)定（第2.3.1節(jié)）。

4.結論

經(jīng)過常規(guī)清洗程序后，使用的驗證方法確保樣品結果在合適的范圍內。暫定濃度10mg/L被認為是最終最大接受限度。每年對三次連續(xù)檢驗的驗證方案進行監(jiān)測。正確地使用洗滌分析程序，了解下一批產(chǎn)品的性質（活性組分積累存在潛在風險），有任何偏離都必須予以追究。當運用的驗證方法不是很敏感時，殘留物含量降低3個數(shù)量級的方法被證明是有用的。 （丁宇/編譯）

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